TAE與TBE的區(qū)別及在凝膠電泳的應(yīng)用

1、TAE是Tris-乙酸，緩沖容量小，但是溶解度大，易于儲(chǔ)存TBE是Tris-硼酸，緩沖容量大，但是溶解度小，不易長(zhǎng)期儲(chǔ)存，易產(chǎn)生沉淀與的區(qū)別.首先要知道與緩沖溶液的成份如下:5010051051101055它們的分別有下列幾點(diǎn)：1不能太濃它只可有10是不會(huì)有太大問(wèn)題。的比會(huì)比較高。因?yàn)橛须x子出的進(jìn)行下一步酵素處理，如1m因?yàn)闀?huì)很容易沉淀，但一般有少許沉淀高，用來(lái)跑出來(lái)的，分辨率它會(huì)影向酵素的工作。因此，若要為分離或的話，就要切記不要讓碰上的比較差，一般比較模糊，但它不會(huì)對(duì)影向酵素用三種緩沖液的配制方法乙酸（）:50X濃貯存液（每升）：堿51冰乙酸TOC o 1-5 h z100050使用時(shí)再稀

2、釋50倍。用磷酸（）：10X濃貯存液（每升）：10堿155%磷酸（1）0050使用時(shí)再稀釋10倍。硼酸（）：5X濃貯存液（每升）：5堿硼酸5電泳緩沖液起什么作用呢默認(rèn)分類2007-10-0520:29:30閱讀11評(píng)論0字號(hào)：大中小訂閱電泳緩沖液TAE起什么作用呢？緩沖液在電泳過(guò)程中的一個(gè)作用是維持合適的。電泳時(shí)正極與負(fù)極都會(huì)發(fā)生電解反應(yīng)，正極發(fā)生的是氧化反應(yīng)（，負(fù)極發(fā)生的是還原反應(yīng)（-長(zhǎng)時(shí)間的電泳將使正極變酸，負(fù)極變堿。一個(gè)好的緩沖系統(tǒng)應(yīng)有較強(qiáng)的緩沖能力，使溶液兩極的保持基本不變。電泳緩沖液的另一個(gè)作用是使溶液具有一定的導(dǎo)電性，以利于分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應(yīng)含有的離子，離子的濃度

3、太低時(shí)電泳速度變慢:太高時(shí)就會(huì)造成過(guò)大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。.電泳緩沖液還有一個(gè)組分是，加入濃度為，目的是螯合等離子，防止電泳時(shí)激活酶，此外還可防止離子與核酸生成沉淀。，加是：使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量（中電泳時(shí)測(cè)出的相對(duì)分子質(zhì)量會(huì)大于實(shí)際分子質(zhì)量），且雙鏈線狀在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約，電泳大于的片段時(shí)用緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收片段時(shí)也易用緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。的缺點(diǎn)是緩沖容量小，長(zhǎng)時(shí)間電泳（如過(guò)夜）不可選用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。的特點(diǎn)是緩沖能力強(qiáng)，長(zhǎng)時(shí)間電泳時(shí)可選用，并且當(dāng)用于電泳小于的片段時(shí)分離效果更好。用

4、于瓊脂糖凝膠時(shí)易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價(jià)結(jié)合的四羥基硼酸鹽復(fù)合物而使片段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。的緩沖能力也較強(qiáng)，但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過(guò)程中析出，所以也不宜在回收片段的電泳中使用。轉(zhuǎn)載實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù)參數(shù)資料記事本我看世界2007-10-1815:47:27閱讀13評(píng)論0字號(hào)：大中小訂閱轉(zhuǎn)載實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù)參數(shù)資料（一）262007-10-1615:12一、核酸及蛋白質(zhì)常用數(shù)據(jù)1核苷三磷酸的物理常數(shù)化合物子量分71摩爾溶液（時(shí)的最大吸收值7.）0中入2800.0入07525150007235253137000.668262100

5、000.38251520008075253137000.66822676000.712常用核酸的長(zhǎng)度與分子量核酸核苷酸數(shù)分子量入8502（雙鏈環(huán)狀）3.0X107322363（雙鏈）2.8X106288001.6X1062337001.2X106181006.1X105117005.5X10551203.6X104（大腸桿菌）752.5X1043常用核酸蛋白換算數(shù)據(jù)（1）重量換算1pg=10-6g1pg=10-121ng=10-9g1fg=10-15g（2）分光光度換算：1260雙鏈A=p5g0/ml1260單鏈A=p3g0/ml1260單鏈A=p4g0/ml（3）摩

6、爾換算:1pg100bpD=1.52末端3.031pR322=0.361p1000bpDpNgA=0.661ppBRp32g2=2.81k雙鏈（鈉鹽）=6.6X105道爾頓1k單鏈（鈉鹽）=3.3X105道爾頓1k單鏈（鈉鹽）=3.4X105道爾頓（4）蛋白摩爾換算：100分子量100,000蛋白質(zhì)=10p100分子量50,000蛋白質(zhì)=5p100分子量10,000蛋白質(zhì)=1p氨基酸的平均分子量=126.7道爾頓（5）蛋白質(zhì)換算：1個(gè)氨基酸編碼容量=3.7X104MW蛋白質(zhì)10,000MW蛋白質(zhì)=27030,000MW蛋白質(zhì)=1050,000MW蛋白質(zhì)=1.35100,000MW蛋白質(zhì)=2.7

7、常用蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物()咼分子量標(biāo)準(zhǔn)參照(2)中分子量標(biāo)準(zhǔn)參照(3)低分子量標(biāo)準(zhǔn)參照肌球蛋白分子量磷酸化酶B7碳酸酐酶3,肌球蛋白22牛血清白蛋白62大豆蛋白酶2,B半乳糖甘酶B1谷氨酶脫氫酶5抑制劑磷酸化酶B7卵白蛋白2馬心肌球蛋白6牛血清白蛋白62醛縮酶溶菌酶4過(guò)氧化氫酶7碳酸酐酶3,肌球蛋白()8醛縮酶大豆蛋白酶2,肌球蛋白(262抑制劑肌球蛋白(32,溶菌酶4常用分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物皿入/黑入/EC0R入/Hindlll+EcoRlpBR322/HaeIII233222222232333223223333223322223223232322續(xù)上表22/H:IinfQx174/Hinf

8、I0X174/HaeIII0X174/aI1172141521451771111711755551724452274441712124142114122111422717222442454154224147515111272二、常用緩沖液1分子克隆常用緩沖液(無(wú))2磷酸緩沖液(1)25C下1磷酸鉀緩沖液的配制H1/2H41/H245515122124277221147571557271728.21.8.686.61.8.8.28.6.2(2)25C下.1磷酸鈉緩沖液的配制pH12H(10H25.8.2.16.12.88.6.21.882.26.25.5.56.65.26.86.86.5.5.2

9、.268.1.6.22.6.68.515.5.88.61.8.26.8：用蒸餾水將混合的兩種1貯存液稀釋至10根據(jù)HH方程計(jì)算其pH值：pH=pK+1g(質(zhì)子受體質(zhì)子供體)在此，pK=6.86(25C)。3電泳緩沖液測(cè)序凝膠加樣緩沖液98%去離子甲酰胺(pH8.0)25二%甲苯青0.025%溴酚藍(lán)甲酰胺：許多批號(hào)的試劑級(jí)甲酰胺，其純度符合使用要求，無(wú)須再進(jìn)行處理。不過(guò)，一旦略呈黃色，則應(yīng)用在磁力攪拌器上將甲酰胺與Do混合床樹(shù)脂共同攪拌1小時(shí)進(jìn)行去離子處理，并用ama號(hào)濾紙過(guò)濾2次，去離子甲酰胺分裝成小份，充氮存于70C。常用的電泳緩沖液緩沖液使用液濃貯存液（每升）Tris乙酸（TE1X:0.0

10、4mol/LTris乙酸50X：242gTris堿0.001mol/LEDT57.1ml冰乙酸100ml0.5mol/LEDTH.0Tris磷酸（TE1X：0.09mol/LTris磷酸10X：10gTris堿0.002mol/LEDT15.5ml5磷酸（1.79g/ml40ml0.5mol/LEDTH.0Tris硼酸（TBE）a0.5X0.045mol/LTris硼酸5X：54gTris堿0.001mol/LEDT27.5硼酸20ml0.5mol/LEDTH.0堿性緩沖液1X：50mmol/LNaOH1X：5ml10mol/LNaOH1mmol/LEDT2ml0.5mmol/LEDTH.0T

11、ris甘氨酸1X：25mmol/LTris5X：15.1gTris250mmol/L甘氨酸94g苷氨酸（電泳級(jí)）（H.）0.1SDS50ml10SDS電泳級(jí)說(shuō)明：TBE溶液長(zhǎng)時(shí)間存放后會(huì)形成沉淀物，為避免這一問(wèn)題，可在室溫下用玻璃瓶保存5X溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。以片都以1XTBE作為使用液（即1：5稀釋濃貯液）進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。但0.5X的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1：10稀釋的貯存液作為使用液。進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小，故通過(guò)緩沖液的電流量通常較大，需要使用1XTBE以提供足夠的緩沖容量。堿性電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。Tris甘氨酸緩沖液用S

12、DS聚丙烯酰胺凝膠電泳。2XSDS凝膠加樣緩沖液：100mmol/LTris?HCl（6.8）200mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）4SDS(電泳級(jí))0.2%溴酚藍(lán)20%甘油不含DTT的2XSDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，應(yīng)在臨用前取貯存液現(xiàn)加于上述緩沖液中。4凝膠加樣緩沖液緩沖液類型6X緩沖液貯存溫度0.25溴酚藍(lán)I0.25二甲苯青FF4C40()蔗糖水溶液0.25溴酚藍(lán)II0.25二甲苯青FF室溫5聚蔗糖F4000.25溴酚藍(lán)III0.25二甲苯青FF4C0甘油水溶液IV0.25溴酚藍(lán)4C40蔗糖水溶液堿性加樣緩沖液006DT聚蔗糖F400V0.5溴甲酚綠4C0.25二甲苯青FF使用以上

13、凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保D均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，含有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽(yáng)極泳動(dòng)的染料。溴酚藍(lán)在瓊脂糖中移動(dòng)的速率約為二甲苯青FF的2.2倍，而與瓊脂糖濃度無(wú)關(guān)。以0.5XTBF作電泳液時(shí)，溴酚藍(lán)在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率約與長(zhǎng)00的雙鏈線狀D相同,而二甲苯青FF的泳動(dòng)則與長(zhǎng)4的雙鏈線狀D相同。在瓊脂糖濃度為0.5.4的范圍內(nèi)，這些對(duì)應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。選用哪一種加樣染料純屬個(gè)人喜惡。但是，對(duì)于堿性凝膠應(yīng)當(dāng)使用溴甲酚綠作為示蹤染料，因?yàn)樵趬A性條件下其顯色較溴酚更藍(lán)為鮮明。5.各種值的T緩沖液的配制各種值的T緩沖液的配制所需值（25C）的體積7.45.77.244.77.4347.442.7.54o7.857.767.457.22922222247254724757某一特定值的5緩沖液的配制：將5堿溶液與上表所示相應(yīng)體積（單位：）的混合，