化妝品微生物課件

1、1第12章 化妝品微生物2化妝品是指以涂沫、噴灑或其他類似方法，散布于人體表面(皮膚、毛發(fā)、指甲、口唇等)，以達到清潔、消除不良氣味、護膚、美容和修飾目的的化學工業(yè)品?；瘖y品的商業(yè)價值，對現(xiàn)代社會的影響。3化妝品的發(fā)展歷史第一代 即直接使用動植物或礦物來源的不經過化學處理的各類油脂。古埃及人4000多年前就已在宗教儀式上，干尸保存上以及皇朝貴族個人的護膚和美容上使用了動植物油脂、礦物油和植物花朵。古羅馬人除對皮膚、毛發(fā)、指甲、口唇的美化和保養(yǎng)外，那不勒斯地區(qū)已成為香業(yè)中心，用于愉悅的香味外，也可在衣櫥內防蟲蛀，最早的芳香物有樟腦、麝香、檀香、薰衣草和丁香油等。 4第二代 以油和水乳化技術為基礎

2、的化妝品十八、十九世紀歐洲工業(yè)革命后，化學、物理學、生物學和醫(yī)藥學得到了空前的發(fā)展，許多新的原料、設備和技術被應用于化妝品生產，更由于以后的表面化學，膠體化學、結晶化學、流變學和乳化理論等原理的發(fā)展，引進了電介質表面活性劑，解決了正確選擇乳化劑的關鍵問題。 在這些科學理論指導和以后人們大量的實踐中，化妝品生產發(fā)生了巨大的變化，從過去原始的初級的小型家庭生產，逐漸發(fā)展成為一門新的專業(yè)性的科學技術。正是在這個基礎上我國化妝品行業(yè)才成為目前我國輕工行業(yè)中發(fā)展最迅猛，最受廣大民眾歡迎的諾大行業(yè)。就連美國著名的FDA(食品藥品管理委員會Food Drug Administration ) 也正在考慮更名

3、為FDCA(食品藥品化妝品管理委員會Food Drug Cosmetics Administration)。 諸如從皂角、果酸、木瓜等天然植物或者從動物皮肉和內臟中提取的深海魚蛋白和激素類 等精華素加入到化妝品中去。產品在國外已經流行了四五十年，使人們始終追求的美白、去粉刺、去斑、去皺等成為可能，直到如今，這些化妝品有的還很受歡迎。 第三代 是添加各類動植物萃取精華的化妝品 7第四代 是仿生化妝品即采用生物技術制造與人體自身結構相仿并具有高親和力的生物精華物質并復配到化妝品中，以補充、修復和調整細胞因子來達到抗衰老、修復受損皮膚等功效，這類化妝品代表了21世紀化妝品的發(fā)展方向。這些化妝品以生物

4、工程制劑如神經酰胺和基因工程制劑如脫氧核糖核酸和表皮生長因子的參與為代表。以致使豐胸、瘦身，肌膚某種程度上恢復青春成為可能。 8化妝品在生產、貯藏和使用過程中均可能受到微生物的污染。由于微生物的作用可引起化妝品的變質、變色和產生異味，降低或失去了其商品價值。更重要的是如有病原微生物或條件致病微生物的污染還可對人體健康產生危害，如化膿性細菌污染可引起皮膚和眼部的感染。 9第一節(jié) 化妝品生境特征水：大多數化妝品如膏霜、奶液和香波等都含有一定比例的水分，有利于微生物的生長。營養(yǎng)成分：天然的動物臟器，各種酶類，花粉，蜂王漿，天然或合成的膠質、蛋白質、氨基酸、淀粉、維生素等，這些成分為微生物的生長和繁殖

5、提供了必須的碳源、氮源、礦物質和維生素。10pH值： 化妝品的pH在47之間，最適宜微生物生長。多數細菌適宜生長在中性及微堿性(pH68)環(huán)境，酵母菌和霉菌可在中性及酸性環(huán)境(pH46)條件下生長。溫度： 化妝品的生產、貯藏和使用的溫度大多在2030之間，正是多數環(huán)境微生物的適宜生長溫度。11防腐劑的使用為了抑制微生物在化妝品中的生長繁殖和避免消費者在使用過程中的產品污染，往往在化妝品中加入了不同種類、一定劑量的防腐劑。但由于防腐劑可以產生過敏癥等皮膚刺激癥狀，甚至多次使用經皮膚吸收有引起全身中毒的可能，所以對防腐劑的品種、用量上要做出種種限制，不可能用量太大。12第二節(jié) 化妝品微生物的來源、

6、種類及其衛(wèi)生學意義13一、化妝品微生物污染的來源 化妝品中微生物的污染，按其來源分為一次污染和二次污染 一次污染是指化妝品在生產過程中導致的污染 二次污染是指化妝品在使用過程中造成的污染。14(一) 化妝品的一次污染 在生產過程中，從原料到產品的污染稱為一次污染，包括原料污染和生產過程污染 。1原料 化妝品的原料被微生物污染是一次污染的主要原因，它們在生產前(如加熱、混合前)可能已受到微生物的污染。根據污染可能性的大小可將原料分為三類： (1)最易被微生物污染的原料 (2)較易被微生物污染的原料 (3)微生物污染較少的原料 16(1) 最易被微生物污染的原料：天然動植物成分及其提取物屬于此類。

7、 動物成分如明膠、骨膠原、多肽水解物、胎盤提取液，蜂王漿等； 植物成分如蘆薈、紅花、甘草、人參提取液等。 這些成分本身帶有不同種類的微生物，同時因其營養(yǎng)豐富，外界污染的微生物極易生長繁殖。 (2)較易被微生物污染的原料： 此類原料有：增稠劑、成膜劑(天然膠質、高分子膠乳)、粉體(滑石粉和高嶺土等)、色素(有機無機染料、顏料)、離子交換水和表面活性劑等。 其中特別應注意的是水，化妝品生產中主要采用離子交換水，但離子交換水由于除去活性氯，所以污染的微生物容易生長。近年來由于特殊用途化妝品的發(fā)展， 維生素類作為化妝品的添加劑其用量越來越大，品種也越來越多，為微生物的生長提供了物質條件。 18(3)微

8、生物污染較少的原料： 油脂、高級脂肪酸、醇、香料、酸和堿等是污染機會較少的原料，因為這些原料本身有抑菌或殺菌作用。192生產過程 生產設備： 攪拌鍋和罐裝機是微生物最有機會聚集的地方。 廠房空氣 生產人員 廠房環(huán)境 包裝材料： 目前化妝品包裝材料有玻璃容器、塑料容器、瓷制品及紙制品。這些包裝材料在堆放、輸送和貯藏過程中，往往由于空氣中微生物或用含微生物的水沖洗等而造成微生物的污染。與化妝品直接接觸的刷子、海綿和內塞等材料也易受到污染，尤其是動物毛制的刷子帶有多種細菌，如不能用有效的方法滅菌，則造成化妝品的污染。21（二）化妝品的二次污染化妝品的二次污染是指產品在使用過程中被微生物污染，主要是消

9、費者使用不當造成的。但包裝設計的不科學，防腐劑使用不當也給化妝品的二次污染造成了機會。例如，用不潔凈的手涂抹化妝品時，手指上大量的微生物就會污染化妝品；涂抹用的海綿、小刷子、粉撲等反復使用會將皮膚上的微生物帶到化妝品上；另外，容器敞開時，空氣中的微生物也會進入到化妝品中。22二次污染有許多實例報道安得森(Anderson)曾報道眼影粉、眼線液、眉黛等細菌污染水平為102103cfug，金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的檢出率較高。埃亨(Ahearn)等證明睫毛油在使用前污染率僅為1.5，使用中污染率則急劇增加到60。邁爾(Myer)在1973年報道海綿、刷子等化妝品用具污染也相當嚴重。 23二、化妝品

10、污染微生物種類污染化妝品的微生物種類很多，主要有細菌、霉菌和酵母菌?；瘖y品中常見的細菌主要以G-為主，如埃希菌屬、假單胞菌屬、變形桿菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬等，也有葡萄球菌屬、鏈球菌屬、沙雷菌和芽胞桿菌屬。常見的霉菌有青霉屬、曲霉屬、毛霉屬、絲核霉屬、茁霉屬和根霉屬。常見的酵母菌有紅酵母屬、圓酵母屬、隱球酵母屬和假綠酵母屬。24國外報道化妝品微生物污染1968年沃爾凡(Wolven)檢測了美國市場上200種化妝品，發(fā)現(xiàn)有25的產品受到微生物污染。1969年美國食品與藥品管理局(FDA)檢測169種化妝品，結果在檢測的產品中有20污染微生物，其中50為革蘭陽性菌。1974年英國拜

11、德(Baird)公布在英格蘭購買的147種化妝品中，67存在微生物污染，6.1的產品分離出革蘭陰性菌，4.1的產品發(fā)現(xiàn)假單胞菌污染。251970年以后，發(fā)達國家由于制定了化妝品衛(wèi)生法規(guī)和衛(wèi)生標準，抽檢的化妝品微生物污染率明顯降低，很少有化妝品微生物污染的報道。26各類化妝品微生物污染情況 霜膏類(護膚類) 這類化妝品含有一定量的水分，有可供微生物生長繁殖的油脂、膠質、蛋白質、多元醇等多種營養(yǎng)物質，有較適宜的pH(中性或微酸)，這都為微生物的生長繁殖提供了良好的條件。據調查霜膏類化妝品微生物的污染率最高，污染的微生物種類也最多。細菌總數大于1 000cfug的占22，細菌總數的超標率為65.6，

12、糞大腸菌群檢出率為4.7%，銅綠假單胞菌的檢出率為2.8，此外還檢出金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、克雷伯菌、沙雷菌、腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌、假單胞菌屬、粘桿菌、枯草桿菌、真菌等。 洗護類產品包括洗發(fā)香波、護發(fā)素、浴液、液體香皂(洗面奶)等。這類化妝品的微生物污染率也較高，僅次于霜膏類。除檢出銅錳假單胞菌、金黃色葡萄球菌外，還檢出了變形桿菌和熒光假單胞菌。菌落總數大于1 000cfug者占16，糞大腸菌群的檢出率為2.8. 這類產品的微生物污染問題容易被生產廠家和消費者忽視，生產廠家大多認為這類化妝品使用后很快被沖洗掉，未考慮到被微生物及其毒素污染的清洗劑若流人眼、口或殘留于損傷的皮膚上，可能會造

13、成感染。因而在生產過程中對衛(wèi)生問題不重視。試驗表明，用銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌污染的洗發(fā)膏稀釋1001 000倍滴眼，可引起化膿性炎癥。28粉類包括香粉、痱子粉、爽身粉、粉餅等。這類產品干燥，微生物污染率比上述二類低。其污染來源主要是原料，如滑石粉、高嶺土、皂土等，這些原料易受土壤中微生物的污染。國外報道曾檢出破傷風梭菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸菌群、銅綠假單胞菌等。美容類化妝品包擴唇膏、胭脂、眉筆、眼影膏、睫毛油等其原料中大多含有香精、香料，這些芳香族化合物本身就有殺菌作用。在制造過程中，這類產品大多經過高溫熔化，因而很少含菌。對產品實際調查證明其污染率確實很低，細菌總數超過500

14、cfug者僅占3.9。污染常發(fā)生在使用過程中，一旦污染微生物，尤其是致病菌，對人體健康影響較大，特別是眉目化妝品和唇膏。國外有從眼部化妝品分離出銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、白假絲酵母菌的報道.30 三、化妝品微生物的衛(wèi)生學意義 (一)微生物引起化妝品變質 化妝品污染最多的是腐敗菌，在適宜的條件下，細菌在化妝品中大量繁殖，致使受污染的化妝品發(fā)生一系列物理性狀和化學成分改變，如變色、變稀、產生氣泡、有異味或出現(xiàn)霉斑等，最終導致化妝品變質，失去商品價值。31 (二) 對人體健康的危害化妝品污染致病性和條件致病性微生物，可對人體健康造成較大的危害?；瘖y品受污染后可產生腐敗酸解產物，后者能直接刺激皮膚

15、發(fā)生炎癥；葡萄球菌和溶血性鏈球菌等可引起毛囊炎、癤、癰、膿腫乃至敗血癥，銅綠假單胞菌感染如不及時治療則也可發(fā)生全身擴散，嚴重感染可危及生命。 32國外報道由于使用被微生物污染的化妝品而引起的感染1946年新西蘭報道由于爽身粉中滑石粉污染破傷風梭菌而引起新生兒破傷風。1966年英國Noble報道，由于使用加有六氯酚的藥用雪花膏被假單胞菌污染，致使某醫(yī)療單位有11人受感染。1967年Morse等報道，在美國某醫(yī)院因護士使用的擦手霜污染了肺炎克雷菌，在給病人輸液時引起13人感染，致使6人患敗血癥，其中1名60多歲的老人因敗血癥死亡。20世紀70年代后期，由于睫毛膏被假單胞菌污染，出現(xiàn)數起導致失明的事

16、件。33 近年國內也有由于使用化妝品而引起面部癤腫、紅斑、炎性水腫、眼結膜充血等，用抗過敏治療無效，使用抗生素類藥物后癥狀才消失的報道。 總的來說，這方面的調查研究還比較少。隨著化妝品使用的日漸廣泛，化妝品被微生物污染引起的感染癥應引起各方面的關注。 此外，對某些微生物代謝產物的毒性作用也應有所警惕，如黃曲霉菌產生的黃曲霉毒素等。34第三節(jié) 化妝品微生物的檢驗及衛(wèi)生標準35一、化妝品的微生物檢驗 (一)樣品的采集及注意事項 1所采集的樣品應具有代表性，一般視每批化妝品數量大小，隨機抽取相應數量的包裝單位。檢驗時，應分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g或10ml。包裝量小的樣品，取樣量可酌減

17、。 2供檢樣品，應嚴格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應有破裂，在檢驗前不得啟開，以防再污染。 3接到樣品后，應立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡快檢驗。如不能及時檢驗，樣品應放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。364若只有一個樣品而同時需做多種分析，如細菌、毒理、化學等，則宜先取出部分樣品作微生物檢驗，再將剩余樣品作其他分析。5在檢驗過程中，從開封到全部檢驗操作結束，均須防止微生物的再污染和擴散，所用器皿及材料均應事先滅菌，全部操作應在無菌室內進行。或在相應條件下按無菌檢驗規(guī)定進行。6如檢出糞大腸菌群或其他致病菌，自報告發(fā)出起該菌種及被檢樣品應保存一個月備查。37(二) 檢測的內容化妝品微生物

18、學檢驗包括菌落總數、 霉菌和酵母菌總數及特定菌的檢驗。 381菌落總數的測定化妝品菌落總數是指1g或1ml檢樣經過處理，在卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，于37培養(yǎng)48h后所生長的一群嗜中溫的需氧及兼性厭氧的菌落總數。所得結果只包括一群本方法規(guī)定條件下的菌落總數，以判明樣品被細菌污染的程度。菌落總數的測定是對樣品進行衛(wèi)生學總評價的綜合依據。除培養(yǎng)基有特殊要求外，檢驗方法、菌落記數及報告方式與水、食品、藥品相同。 392霉菌和酵母菌總數的測定霉菌和酵母菌數總數是指1g或1ml化妝品檢樣在虎紅培養(yǎng)基上，于28培養(yǎng)3天后，所生長的霉菌和酵母菌菌落總數?；瘖y品中所污染的活的霉菌和酵母菌數量，可以判明化

19、妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。檢驗方法與菌落總數相同，采用傾注平板法，所用培養(yǎng)基為虎紅(孟加拉紅)培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度28，培養(yǎng)時間3天，觀察并計算所生長的霉菌和酵母菌菌落數。403特定菌的檢驗特定菌是指化妝品中不得檢出的特定細菌。特定菌的種類各國規(guī)定并不一樣我國規(guī)定在化妝品中不得檢出的特定菌是糞大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌。41(三) 特定菌的衛(wèi)生學意義糞大腸菌群: 一群需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在445培養(yǎng)2448h能發(fā)酵乳糖產酸產氣。來源：糞大腸菌群細菌直接來源于人和溫血動物的糞便，意義：檢出糞大腸菌群表明該化妝品已被糞便污染，有可能存在其他腸道致病菌或寄

20、生蟲等病原體。用途：糞大腸菌群被認為是重要的衛(wèi)生指標菌，目前已被國內外廣泛應用于水、食品、藥品和化妝品的衛(wèi)生檢測。銅綠假單胞菌屬：假單胞菌屬也稱綠膿桿菌，該菌廣泛存在于空氣、水和土壤中，對外環(huán)境的抵抗力比其他細菌強，銅綠假單胞菌適宜在潮濕的環(huán)境中生長，水分含量比較多的化妝品易受其污染。該菌對人有致病力，為條件致病菌，能引起人的眼、耳、鼻、咽喉和皮膚等處的化膿性感染，嚴重時可引起敗血癥，特別是用于眼周圍的化妝品。世界各國均規(guī)定化妝品中不得檢出銅綠假單胞菌。 43金黃色葡萄球菌： 廣泛存在于自然環(huán)境中，抵抗力較強，人的皮膚、鼻腔和口腔均可發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌是葡萄球菌中對人致病力最強的一種。能引起

21、人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。44 二、化妝品的衛(wèi)生標準 我國衛(wèi)生部2003年1月1日起實施的化妝品衛(wèi)生規(guī)范中對化妝品的微生物學質量規(guī)定如下：1眼部化妝品及口唇等黏膜用化妝品以及嬰兒和 兒童用化妝品菌落總數500cfuml(g)。2其他化妝品菌落總數1 000cfuml(g)。3化妝品中霉菌和酵母菌總數100ccfuml(g)。4每克或每毫升產品中不得檢出糞大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌。45第四節(jié) 化妝品微生物污染及其預防46一、針對一次污染的預防 化妝品一次污染的預防包括原料、儀器設備、生產過程及包裝幾方面。47二、二次污染的預防 防止化妝品在使用期間的二次污染，主要是加

22、強衛(wèi)生宣傳，使消費者了解化妝品是微生物最容易孳生的場所及化妝品微生物污染的危害性，使用中減少微生物的污染；另外，在化妝品加入適量防腐劑也可防止微生物的污染。 1消費者要洗凈手后再用手指蘸取化妝品，用后隨時蓋好。粉撲和毛刷要經常清洗，保持清潔干燥，盡量避免交叉感染。 2采用不易被微生物污染的化妝品包裝材料和方式，如手按氣壓式細頸塑料瓶，消費者使用時不必啟蓋，不易被污染微生物。 483應用適量的防腐劑在化妝品工業(yè)中，有效的防腐處理特別重要。防腐方法很多，國內外普遍采用的仍然是化學防腐劑。在化妝品中許可使用的化學防腐劑有120多種，其中化合物有40種，衍生物2030種，復方約50種。為了獲得廣譜的抑

23、菌效果，常常采用23種防腐劑配合使用，能取得滿意的抗微生物生長的結果。49第五節(jié) 化妝品微生物研究的前景50一、加強預防化妝品微生物污染的研究(一) 規(guī)范化妝品生產和質量管理 國際上藥品生產質量管理規(guī)范(GMP)已成為藥品、化妝品生產和質量管理的基本準則，是一套系統(tǒng)的、科學的管理制度。 我國化妝品生產也應實行GMP，以進一步提高化妝品質量。51(二) 采用抗菌作用廣、低刺激、溫和型的防腐劑在化妝品工業(yè)中，有效的防腐處理特別重要。由于防腐劑可以產生過敏癥等皮膚刺激癥狀，甚至多次使用經皮膚吸收有引起全身中毒的可能，所以對防腐劑的品種、用量上要做出種種限制，防腐劑的使用應符合化妝品衛(wèi)生規(guī)范中禁用和限

24、用物質的要求。對于化妝品防腐劑的要求是不影響產品的色澤，無氣味，不改變產品的黏度、pH值，用量范圍內應無毒性和對皮膚無刺激性。52(三) 輻射滅菌的應用輻射滅菌可用于化妝品原料和產品。法國藥典第9版規(guī)定，固體化妝品的粉劑、膏劑、霜類、皂類、懸液等都允許輻射滅菌。近年來我國也開展了60Co輻射滅菌研究，輻射滅菌后細菌數明顯減少，大部分可以達到無菌。大腸埃希菌、假單胞菌和金黃色葡萄球菌對輻射都很敏感。 輻射滅菌具有穿透力強，滅菌效果好，操作簡便且輻射后無殘留量等優(yōu)點。但需專門的裝置，投資大，要求高。在我國化妝品輻射滅菌尚處于起步階段。53二、提高化妝品微生物的檢驗能力 化妝品檢測的內容和方法各國基

25、本相同，但評價指標稍有不同。隨著國際交往的加強，各國的標準也會趨于一致。 三、修訂、完善化妝品微生物衛(wèi)生法規(guī)54第十三章 藥品微生物55藥品是特殊商品，是用于預防、治療和診斷疾病，有目的地調節(jié)機體生理功能并規(guī)定有適應證或功能主治的物質。藥品質量的好壞直接關系到使用者的健康和生命。56第一節(jié) 藥品生境特征 藥品成分、酸堿度、滲透壓、含水量等生境特征與微生物的生長繁殖關系密切，藥品內含有很多表面活性劑、賦形劑、保濕劑和調和劑等，其中很多物質都是良好的細菌培養(yǎng)基。57藥品生境可分成兩類： 一類有利于微生物繁殖: 含有微生物生長所需的營養(yǎng)物質和各種離子成分，一旦被微生物所污染，微生物不僅可在其中大量繁

26、殖，而且可以引起藥品變質，失去藥用價值。 另一類則具有抑制或殺菌作用: 一般含有抑菌劑或防腐劑。58與微生物生長相關的藥品生境特征：1糖類和蛋白質等營養(yǎng)成分 以淀粉和糖類為輔料的藥品，以微生物代謝產物作為原料參與制作的藥品，如葡聚糖、氨基酸、酶類制劑等；以及中藥蜜丸、糖漿、人參、葡萄糖注射液、血漿等，都含有豐富的糖類和蛋白質，極易受到各種微生物的污染。2離子物質 K+、Na+ 、Ca2+、Mg2+ 等陽離子物質為微生物所需的營養(yǎng)元素，可促進微生物的繁殖。一些陽離子物質，如Fe3+ 、Co2+、等對微生物具有毒性作用，可抑制其生長。3水分 如果固型劑的含水量超過10%，微生物就可在其中大量繁殖。

27、口服液體劑型由于含水量高且營養(yǎng)豐富，很容易受微生物污染，而且一旦污染，微生物就可在其中迅速繁殖。4酸堿度5滲透壓60第二節(jié) 藥品微生物污染的來源、種類及其衛(wèi)生學意義61一、藥品微生物污染的來源(一)來源于原輔料本身的污染 (二)來源于空氣微生物(三)來源于水微生物(四)來源于操作人員(五)來源于廠房設備和包裝容器生物 62二、污染藥品的常見微生物 污染藥品的微生物種類很多，主要有細菌、放線菌、霉菌和酵母菌。細菌類常見的有大腸埃希菌、沙門菌、假單胞菌、變形桿菌、葡萄球菌、梭菌等；霉菌類常見的有假絲酵母菌、青霉菌、曲霉菌等。63藥品可分為兩大類：規(guī)定滅菌藥品，如注射劑、輸液劑及用于正常無菌體腔、燒

28、傷、眼科外傷等用藥制劑。這類藥品要求達到無菌。非規(guī)定滅菌藥品，如各種口服制劑和一般外用制劑。這類藥品允許存在一定數量細菌，但對染菌數量和種類有相應的衛(wèi)生標準。 64(一)規(guī)定滅菌藥品的微生物污染 注射劑和輸液劑 出現(xiàn)微生物污染的原因主要有生產過程中環(huán)境嚴重污染、滅菌不徹底、瓶塞不嚴或者漏氣等，例如安瓿有毛細孔或細微裂縫，在貯存過程中，環(huán)境溫度變化會導致安瓿內容物膨脹，微生物就可進入其中繁殖。污染的細菌以革蘭陰性菌多見，如大腸埃希菌、產氣桿菌、變形桿菌和銅綠假單胞菌等；也可見到革蘭陽性菌、真菌和放線菌等的污染。65注射劑或輸液劑一旦染菌，即使重新滅菌，細菌死亡所釋放出的大量熱原質也會引起發(fā)熱等不

29、良反應。66滴眼劑和眼藥膏 正常人淚液含具有殺菌作用的溶菌酶(Lysozyme)，加上淚液的不斷沖洗，可以保持眼部清潔無菌；角膜和鞏膜也能阻止細菌進入眼球內部，盡管如此，滴眼劑和眼藥膏都要求保持無菌狀態(tài)。滴眼劑和眼藥膏的pH與滲透壓接近于淚液，非常適合細菌生長.常見的污染菌有銅綠假單胞菌、葡萄球菌、類白喉桿菌、枯草桿菌等。67其他滅菌和無菌制劑 包括體內埋植制劑、創(chuàng)面用制劑和海綿劑等。這些制劑在生產和使用過程中也易被各種微生物污染，尤其是海綿劑所用的原料包含淀粉、明膠、纖維蛋白原和血漿等成分，可以為大多數微生物生長繁殖提供豐富的營養(yǎng)物質。 68(二)非規(guī)定滅菌藥品的微生物污染 口服藥劑 主要有

30、固體劑型和液體劑型兩種。固體劑型包括散劑、顆粒劑、片劑和膠囊劑等，由于含水量較低，較少受到微生物污染。以動植物為原料的制劑如含生藥的片劑、散劑、蜜丸等，最易受到來自動物或土壤中微生物污染。液體劑型包括口服溶液劑、糖漿劑、混懸液劑和乳劑等較易受到微生物污染。糖漿劑含有較高蔗糖或葡萄糖，易受到真菌，如酵母菌、青霉菌、黑曲霉菌、毛霉菌以及其他雜菌的污染。69外用制劑 包括乳膏劑、軟膏劑、糊劑、凝膠劑和粉劑等。乳膏劑和凝膠劑由于含水量較高，糊劑由于含淀粉量較多，在貯存和反復使用過程中易受細菌或霉菌的污染。常見的污染菌有葡萄球菌、變形桿菌、大腸埃希菌、厭氧性芽胞梭菌、酵母菌和霉菌等。消毒劑與洗滌劑 常常

31、檢出革蘭陰性桿菌，如銅綠假單胞菌、克雷伯菌、大腸埃希菌等。 70中藥材 最容易受真菌污染，如能產生黃曲霉毒素的黃曲霉菌就曾在中成藥內檢出。中成藥在貯藏過程中還常常受到螨類的污染，這些螨類以霉菌孢子和藥品原料為食，其排泄物又促進了霉菌孢子的擴散。近年來的調查就發(fā)現(xiàn)染螨與藥品發(fā)霉有關。71三、藥品微生物的衛(wèi)生學意義藥品微生物污染的危害 (一)微生物引起藥品變質 1物理性狀和外觀的改變表現(xiàn)為有些藥品變質后可產生異味；當污染菌具有產色素能力時可使藥品變色；糖漿劑染菌后可形成聚合性黏稠物；乳劑染菌變質后可有團塊或沙粒感；液體制劑染菌后可出現(xiàn)沉淀、混濁或云霧狀改變，也可產生菌團或膜狀物。 2產生有害代謝產

32、物 細菌在繁殖過程中可釋放大量有毒有害物質。 注射劑或輸液劑被革蘭陰性菌污染后，可產生熱原質；有些真菌污染藥品后可合成真菌毒素，危害人體健康；有些真菌還可轉化藥品內所含有的對細菌不利的物質，促進細菌生長。3失去藥用價值微生物對藥物的直接降解將導致藥品失效。 阿司匹林被微生物降解后可形成具有刺激性的水楊酸；青霉素類、頭孢類或氨基糖苷類等抗生素被相應的耐藥菌降解后就失去抗菌活性。73(二) 對人體的危害 無論哪種藥品污染了微生物，都將對用藥者的身體健康造成危害，甚至危及生命。當染菌藥品被誤用后，會引起藥源性感染、中毒或超敏反應等。因給藥途徑不同，所引發(fā)癥狀的類型和嚴重程度也不同。 741全身性感染

33、 靜脈給藥的注射劑或輸液劑一旦染菌，可造成全身性感染，出現(xiàn)敗血癥、膿毒血癥、內毒素血癥和休克等，后果嚴重。局部給藥的外用制劑被產外毒素型病原菌污染后，這些細菌在局部組織中繁殖，所產生的外毒素進入血循環(huán)，引起毒血癥，病死率較高。 例如我國武漢、宜昌等地曾因用中藥散劑治療宮頸糜爛而發(fā)生破傷風的案例，經查實為藥品污染破傷風梭菌所致。 2局部感染 皮下或肌肉注射給藥的注射劑或輸液劑染菌，可引起局部感染，嚴重者也可進一步發(fā)展成全身性感染。在皮膚或燒傷創(chuàng)面使用染菌的軟膏、乳劑或粉劑時，可引起創(chuàng)面感染。在角膜外傷情況下，如果使用染菌的滴眼劑或眼藥膏可引起角膜感染甚至失明。值得注意的是，眼用制劑的微生物污染是

34、相當嚴重的，Kallings在檢測了60份眼藥膏后，發(fā)現(xiàn)其中47份(78.3)樣品已被銅綠假單胞菌污染。 763腸道傳染病以及其他疾病 一些動物性原料制成的片劑或膠囊如果污染沙門菌等腸道致病菌，口服后可造成腸道傳染病的流行。 中成藥染螨可引起皮炎及消化道、泌尿道和呼吸系統(tǒng)的疾病。1970年7月至1971年3月，美國25個醫(yī)院由于輸注污染細菌的葡萄糖液致使378名人罹患敗血癥，40人死亡。1970年，英國普拉姆斯總醫(yī)院也發(fā)生了因輸注染菌的葡萄糖液導致6人死亡的案例。我國在19911993年，由于輸注污染的人血白蛋白發(fā)生46例感染、8例死亡的事故。78第三節(jié) 藥品微生物檢測與衛(wèi)生標準79一、藥品微

35、生物檢測的特殊性藥品生境的多樣性和復雜性微生物數量少，分布不勻多數為亞致死狀態(tài)的損傷菌微生物消長的多變性80(一) 藥品生境的多樣性和復雜性藥品種類繁多、劑型復雜，理化性質各異；不同劑型的酸堿度、滲透壓和含水量不同；有些劑型含有一定的抑菌劑或防腐劑81劑型對藥品微生物檢測也產生較大影響: 例如軟膏劑和非水溶性油劑由于難溶或不溶于水，其中的微生物在油性物質包裹之下由于無法有效接觸培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質或缺氧而難以生長，常常出現(xiàn)陰性檢測結果。82(二)微生物數量少，分布不勻在一般情況下，污染藥品的微生物數量很少；藥品中污染微生物的分布常常是局部的、不均勻的，當污染發(fā)生在生產流程的后期時，情況更是如此。

36、即使在同一批次產品中，不同操作人員和不同包裝點的不同瓶(或盒、袋、片等)中出現(xiàn)的污染及嚴重程度都是不同的。因此，在藥品微生物限度或無菌檢驗時，都要求達到一定的樣本量，以保證樣品的代表性。 83(三) 多數為亞致死狀態(tài)的損傷菌污染藥品的微生物受原料處理、加工、加熱或冷卻等的影響，以及藥品內所添加的防腐劑或抑菌劑的作用，往往處于亞致死性的損傷狀態(tài)，如果用常規(guī)方法檢測控制菌或細菌總數，可出現(xiàn)“陰性”或計數偏低的結果。因此，在藥品微生物檢驗需要進行損傷菌的復蘇或修復，然后再用常規(guī)方法檢測。84(四) 微生物消長的多變性污染藥品的微生物可隨貯存時間的延長而逐漸衰亡，也可因環(huán)境條件適宜而大量繁殖。例如一批

37、不含抑菌成分的液體制劑，出廠檢驗時發(fā)現(xiàn)存在少量細菌，但細菌數仍處在該產品的微生物限度標準范圍之內，判為合格藥品出廠；出廠后，由于貯存溫度適宜，藥品內的細菌大量繁殖，這批藥品就成為不合格產品；又經過一段時間后，由于營養(yǎng)物質的消耗和有害代謝產物的積累，細菌數又逐漸減少直至全部死亡，這時，這批產品在微生物檢驗方面又成為“合格產品”，但是其中的藥品成分已完全改變。85二、藥品微生物檢測的內容無菌檢查微生物限度檢查細菌內毒素和熱原質檢查 86 (一) 無菌檢查 1無菌檢查的概念與意義 是指用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原輔料及其他物品是否無菌的一種方法，是批準無菌產品放行檢驗或監(jiān)管部門對無菌產品

38、質量監(jiān)督的項目之一。 一般而言，直接進入人體血循環(huán)系統(tǒng)、肌肉、皮下組織或接觸創(chuàng)傷、潰瘍等部位而發(fā)生作用的制品或要求無菌的材料、滅菌器具等都要進行無菌檢查，以最大限度地保證這些制劑或用品不帶有活菌。87無菌檢查法作為藥品微生物檢驗的要求在20世紀20年代被列為必檢項目。新中國第一部藥典(1953年版)就已收載無菌檢查法，在以后的每一修訂版中，無菌檢查的范圍、方法、檢驗量和檢驗材料的質控等內容都在不斷修訂更新，以進一步確保無菌或滅菌制劑的用藥安全。2005年版中國藥典中的無菌檢查法與美國、歐洲和日本三方(ICH)無菌檢查法的主要內容相一致，基本達到了與國際接軌的目的。 882無菌檢查的方法根據藥品

39、種類不同，用無菌操作方法將一定量藥品加入相應培養(yǎng)基，以硫乙醇酸鹽液體為培養(yǎng)基的培養(yǎng)物在3035下，以改良馬丁培養(yǎng)基的培養(yǎng)物在2328下培養(yǎng)14天，在培養(yǎng)期間每日觀察并記錄是否有菌生長。無菌試驗必須在完全控制的無菌條件下進行，以保證無菌檢查結果的正確。試驗設備、試驗環(huán)境、試驗器具和材料都應符合無菌要求，而且試驗的全過程都必須嚴格遵守無菌操作。我國藥典規(guī)定無菌試驗應在環(huán)境潔凈度10 000級和局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)內進行。(1)一般規(guī)定滅菌藥品的無菌檢查：是指本身不含抗菌成分的藥品的無菌檢查。 無菌檢查法包括需氧菌、厭氧菌和真菌三類微生物的檢查。硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基用于需氧菌

40、和厭氧菌檢查改良馬丁培養(yǎng)基用于真菌檢查聚山梨酯80培養(yǎng)基用于油劑藥品的無菌檢查，使之成為均勻的乳濁液 各類無菌檢查用培養(yǎng)基配制后需要進行適用性檢查，包括培養(yǎng)基的無菌性檢查和靈敏度檢查，檢查合格后方可用于藥品的無菌試驗。無菌性檢查為每批培養(yǎng)基隨機抽取5支或5支以上，在規(guī)定溫度下培養(yǎng)14天，應無菌生長。靈敏度檢查主要是檢測所配制的培養(yǎng)基是否適合微生物生長。我國藥典規(guī)定培養(yǎng)基靈敏度檢查的菌種有金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽胞桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉，如果空白對照管無菌生長，而接種標準菌種的培養(yǎng)管內細菌生長良好，則為培養(yǎng)基靈敏度檢查合格。91 (2)特殊規(guī)定滅菌藥品的無菌檢查：這類藥品

41、本身含有抑菌成分或防腐劑，對微生物具有抑制或殺傷作用。因此，對這類藥品進行無菌檢查時必須先去除其中的抑菌或防腐成分，然后再按上述方法進行無菌檢查。常用的去除方法有微孔濾膜過濾法、稀釋法、中和法等，例如對磺胺類藥品的無菌檢查可用對氨基苯甲酸培養(yǎng)基，因為對氨基苯甲酸是磺胺類的有效中和劑。923無菌試驗的結果判定無菌試驗結束后，只有出現(xiàn)以下結果才能判為無菌試驗合格，即陽性對照管應有菌生長，陰性對照管應澄清，所有供試品管均應澄清或者雖然渾濁但證明并非微生物生長所致。我國藥典規(guī)定無菌檢查結果不得復試，如果供試品檢出微生物，但有充分證據證明生長著的微生物并非供試品本身所致時，方可判試驗無效，可重試，否則應

42、判供試品不符合無菌檢查法的要求。934無菌檢查的局限性與規(guī)定滅菌藥品的無菌保證無菌概念是指物品中不含任何活的微生物，然而在實際工作中要達到如此絕對的程度是不可能的。因此，批準滅菌產品的無菌性在概率意義上定義為污染單位低至可接受的程度，一般以無菌保證水平(stermty asstlrance level，SAL)表示。此外，由于無菌檢查對樣品是破壞性的，不可能對每一最小包裝產品都進行檢測，而是對批準滅菌產品采用隨機抽樣的方法進行抽檢，因此，產品的污染率越低，誤判合格的概率就越高。94正是由于無菌檢查局限性的存在，規(guī)定滅菌藥品在SAL概率意義上的無菌保證不能依賴于最終產品的無菌檢驗，而應取決于生產

43、過程中采用驗證合格的滅菌工藝、嚴格的GMP管理和良好的質量保證體系。由此可見，與批準無菌檢查結果相比較，藥品批準生產過程中的微生物監(jiān)控更能反映產品的無菌水平。95 (二) 微生物限度檢查 1微生物限度檢查的概念與意義:是指非規(guī)定滅菌制劑及其原料、敷料受到微生物污染程度的一種檢查法。這類藥品一般不要求絕對無菌，允許一定限量的微生物存在，但不得存在可疑致病菌。微生物限度檢查是體現(xiàn)藥品衛(wèi)生質量的一個重要依據。藥品污染的微生物量反映了藥品的衛(wèi)生質量，藥品中污染的微生物越多，存在致病微生物的可能性就越大，藥品質量和用藥安全性也就越無法保證。96微生物限度檢查也是藥品生產企業(yè)管理和質量體系評審的一個重要手

44、段，反映藥品生產工藝的科學性、合理性和質量管理水平。衛(wèi)生工藝條件差、質量管理水平低的生產單位，其生產藥品的染菌量必然嚴重。972微生物限度檢查的方法包括細菌總數、霉菌及酵母菌數和控制菌的檢查。(1)細菌菌落總數、霉菌和酵母菌菌落總數測定：這是檢測藥品質量的一個重要指標，也是對藥品原料、生產工藝、生產環(huán)境以及操作人員衛(wèi)生狀況進行衛(wèi)生學綜合評價的依據之一。 按我國藥典規(guī)定，細菌菌落總數是指每克、每毫升或每10cm2。在需氧條件下，3035培養(yǎng)48h，在肉湯營養(yǎng)瓊脂平板上生長的菌落數，記錄為菌落形成單位數(colony forming unit，cfu)。霉菌和酵母菌菌落計數，采用玫瑰紅鈉瓊脂或酵母

45、浸出粉一胨一葡萄糖瓊脂為培養(yǎng)基，2325培養(yǎng)4872h，測定和記錄單位同樣也是菌落形成單位數。99 (2) 控制菌的檢查非規(guī)定滅菌藥品中不得檢出的菌類稱為控制菌。藥品中不允許污染致病微生物，但是致病微生物種類繁多，不可能逐一檢驗，而是通過分析某種致病微生物存在于某種藥品中的可能性，從而選作控制菌。我國藥典選定的藥品控制菌有大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和梭菌屬。1003微生物限度檢查的結果判定如果供試品的細菌數、霉菌和酵母菌數以及控制菌三項檢測結果符合該品種規(guī)定，則判定為供試品符合規(guī)定；如果其中任何一項不符合該品種的規(guī)定，則判為供試品不符合規(guī)定。101控制菌或其他致

46、病菌的檢測，按一次檢出結果為準，不再復試；對于供試品的細菌數、霉菌和酵母菌數，其中任何一項不符合該品種的規(guī)定時，應從同一批樣品中隨機抽樣，獨立復試兩次，以3次結果的平均值報告菌數。102(三）細菌內毒素和熱原質的檢查1細菌內毒素和熱原質檢查的概念與意義 細菌內毒素是革蘭陰性菌細胞壁的組分，是在細菌死亡破裂后釋放出的脂多糖成分。 熱原質泛指那些能引起機體發(fā)熱的物質，可分為外源性和內源性熱原質。外源性熱原質為細菌合成代謝所產生的能導致機體發(fā)熱反應的物質，主要包括革蘭陰性菌內毒素和少數革蘭陽性菌分泌的外毒素。內源性熱原質則來自機體自身，細菌內毒素可激活機體單核一巨噬細胞和致敏淋巴細胞，使之釋放IL-1、INF-和IFN等內源性熱原質。熱原質檢查法也稱為家兔熱原試驗，是將一定劑量的供試品靜脈注入家兔體內，在規(guī)定時間內觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原質的限度是否符合規(guī)定。細菌內毒素檢查法也稱為鱟試驗，是利用鱟試劑與內毒素產生凝集反應的機制，來判斷供試品中細菌內毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。104與熱原質檢查法相比，內毒素檢查法具有更高的靈敏度和