項目九：食品常見有害有毒物質(zhì)測定ppt課件

1、 工程九 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測內(nèi)容簡介 本章講述了食品食品中常見有害有毒物質(zhì)如有機氯農(nóng)藥、有機磷農(nóng)藥、黃曲霉毒素等的測定方法以及各種測定方法的本卷須知。工程九 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測學(xué)習(xí)目的與要求：1、掌握食品常見有害有毒物質(zhì)如有機氯農(nóng)藥、有機磷農(nóng)藥殘留及黃曲霉毒素等的測定操作方法2、熟練運用氣相色譜和液相色譜儀工程九 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測重點：有機氯農(nóng)藥、有機磷苯農(nóng)藥殘留及黃曲霉毒素等的測定操作方法、氣相色譜和液相色譜儀的運用難點：氣相色譜和液相色譜儀的運用第七章 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定本章目

2、錄第七章 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測一、定性檢驗1、焰色法 1原理 此法是利用樣品中的有機氯受熱分解為氯化氫，它與銅勺外表的氧化銅作用，生成揮發(fā)性的氯化銅，在無色火焰中呈綠色。用以鑒別樣品提取液中有機氯農(nóng)藥的存在。第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定2操作步驟 取銅小勺在煤氣燈或酒精燈上灼燒，直至銅勺外表覆蓋一層黑色氧化銅為止。取少量疑心污染有機氯農(nóng)藥的食品，用乙醚浸漬振搖并過濾。將濾液逐滴加在銅勺外表蒸發(fā)，然后進展灼燒，呈綠色火焰者，闡明食品被有機氯農(nóng)藥(包括DDT及六六六)污染。假設(shè)樣品中農(nóng)藥含量很低，可將乙醚提取液濃縮蒸干，用少量乙醇溶解殘留物，然后按上法檢驗，本法最

3、低檢出范圍為1ug有機氯。第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定2、亞鐵氨化銀試紙法1原理 此法是根據(jù)有機氯農(nóng)藥與碳酸鈉灼燒生成氯化鈉。與硫酸作用生成氯化氫。氯化氫與亞鐵氰化銀試紙反響，在硫酸鐵存在下產(chǎn)生藍色，可鑒別有機氯的存在。第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定2操作步驟 a、亞鐵氰化銀試紙 稱取硝酸銀25g、亞鐵氰化鉀13g，分別溶于25mL水中。將硝酸銀溶液緩慢加到亞鐵氰化鉀溶液中，離心分別，將沉淀物反復(fù)用水洗滌至不含銀離子為止。在沉淀中加濃氨水25mL，搖勻后，將濾紙浸入懸浮氨溶液中5min，取出試紙用熱風(fēng)吹干，備用.第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定b、檢測 取10Og左右待測磨碎樣品，置于三角燒瓶中，參

4、與20mL乙醚，振搖后，分出乙醚層。置水浴上揮發(fā)至04ml，移入小試管中，參與一勺碳酸鈉，在水浴上蒸干、冷卻。 取亞鐵氰化銀試紙條，在1gL硫酸鐵溶液中浸濕后，懸掛于橡皮塞下。向試管內(nèi)殘渣小心滴人濃硫酸23滴，迅速將掛有試紙的橡皮塞塞緊小試管，將試管移人水浴內(nèi)加熱smin，假設(shè)試紙變?yōu)樗{色，表示樣品中有有機氯農(nóng)藥存在。實驗中應(yīng)防止無機氯的干擾。二、定量檢驗 采用氣相色譜法1、農(nóng)藥提取2、凈化3、測定1氣相色譜參考條件色譜柱：內(nèi)徑34mm，長1.22m的玻璃柱，內(nèi)裝涂以O(shè)V-715g/L和QF-120g/L的混合固定液的80100目硅藻土。第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定2電子捕獲檢測器 汽化室溫度

5、：215；色譜柱溫度：195 ；檢測器溫度：225 ；載氣氮氣流速：90ml/min；3色譜圖4計算第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定一、定性檢驗1、剛果紅法 1原理 利用樣液中的有機磷農(nóng)藥經(jīng)溴氧化后，與剛果紅作用，生成藍色化合物，來鑒別樣品能否存在有有機磷農(nóng)藥。第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定2、操作步驟 取經(jīng)粉碎的樣品用苯浸泡、振搖，用濾紙過濾，取濾液于蒸發(fā)皿上，參與100gL甘油甲醇溶液1滴，瀝干，加1mL水混勻。將樣液滴于定性濾紙上，揮發(fā)干。將濾紙置于溴蒸氣上熏5min，取出，在通氣處將溴揮發(fā)盡。滴人5gL剛果紅乙醇溶液，置于濾紙的點樣處，假設(shè)濾紙顯示出藍紫色那么表示

6、樣品中有有機磷存在。呈粉紅色者那么為溴的色澤。第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定2、紙上斑點法1原理 樣液中的硫代磷酸酯類有機磷與2，6一二溴苯醌氯酰亞胺，在溴蒸氣作用下，構(gòu)成各種有顏色的化合物，用以鑒定能否存在有機磷及是哪一種有機磷。第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定2操作步驟 a、2，6一二溴苯醌氯酰亞胺試紙 稱取005g 2，6一二溴苯醌氯酰亞胺，溶于10mL95 %(體積分數(shù))乙醇中，將定性濾紙浸濕，晾干備用。 b、檢驗 汲取按剛果紅法制備的樣液1滴，于2，6一二溴苯醌氯酰亞胺試紙上，稍干，置于溴蒸氣上蒸熏片刻，呈現(xiàn)出不同顏色的斑點，根據(jù)所顯示斑點的顏色鑒別屬于哪種有機磷農(nóng)藥。實驗時，為防止色素干

7、擾，試紙要暫時配制。有機磷農(nóng)藥呈色反響如表6-1所示。農(nóng)藥種類反應(yīng)顏色反應(yīng)時間3911鮮黃，周圍較深 5s-3min1605淡黃紫紅 30s-3min1059鮮黃暗黃30s-3min4049黃黃棕30s-5min樂果黃橙黃表6一l 有機磷農(nóng)藥的呈色反應(yīng)20s-5minM-74淡土黃暗紫紅30s-5min三硫磷土黃杏紅15s-5min1240鮮黃暗黃30s-3min有機磷農(nóng)藥的呈色反響二、定量檢測 采用氣相色譜檢測法 1、規(guī)范溶液的配制 2、試樣制備 3、有機磷農(nóng)藥提取 4、有機磷農(nóng)藥凈化5、測定第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定5、測定1氣相色譜條件； 色譜柱：玻璃柱2.6m3mm id，填裝涂有4

8、.5DC2002.5OV17的ChromosorbWAW DMCS80100目的擔體。玻璃柱2.6m3mmid，填裝涂有 1.5質(zhì)量分數(shù)DCOE1的Chromosorb WAW DMCS6080目氣體速度：氮氣N250mLmin、氫氣H2100ml/min、空氣 50mLmin。溫度：柱溫240、汽化室260、檢測器270 第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定2測定。汲取25L混合規(guī)范液及樣品凈化液，注入色譜儀中，以保管時間定性。以試樣的峰高或峰面積與規(guī)范比較定量。6、結(jié)果計算第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定7、16種有機磷農(nóng)藥的色譜圖 第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定黃曲霉毒素，是一組化學(xué)構(gòu)造類似的化合物。

9、 已分別鑒定出12種，包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定黃曲霉毒素B1 黃曲霉毒素B2 黃曲霉毒素B3 黃曲霉毒素B4黃曲霉毒素B5黃曲霉毒素B6表1 中國對食品中黃曲霉毒素的最高允許含量 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定食 物 名 稱最高允許含量/(ug/kg)玉米、花生、花生油、堅果和干果(核桃、杏仁)20(黃曲霉毒素B1)玉米、花生仁制品(按原料折算)20(黃曲霉毒素B1)大米、其他食用油(香油、菜籽油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油)10(黃曲霉毒素B1)其他糧食(麥類、面粉、薯干)、發(fā)酵食品(醬

10、油、食用醋、豆豉、腐乳制品)、淀粉類制品(糕點、餅干、面包、裱花蛋糕)5黃曲霉毒素B1)牛乳及其制品(消毒牛奶、新鮮生牛乳、全脂牛奶粉、淡煉乳、甜煉乳、奶油)、黃油、新鮮豬組織(肝、腎、血、瘦肉)0.5(黃曲霉毒素M1)一、薄層層析法 1、儀器 小型粉碎機、樣篩、電動振蕩器、玻璃濃縮器、玻璃板5cm20cm、薄層板涂布器、展開槽(25cm6cm4cm)、紫外光燈100125W、波長365nm濾光片、微量注射器。2、測定方法 (一)樣品處置 (二)黃曲霉毒素提取 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定(三)測定 1單向展開法 (1)薄板制備：稱取3g硅膠G，加23倍量的水，研磨12min呈糊狀后，倒入涂布器推

11、成5cm20cm，厚度約0.25mm的薄層板3塊。在空氣中枯燥15min，在100活化2h，取出，放枯燥器中保管。普通可保管23d，假設(shè)放置時間較長，可再活化后使。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定(2)點樣在距薄層板下端3cm的基線上用微量注射器或血紅素吸管滴加樣液。第一點：10l AFTB,規(guī)范運用液(0.04gml)。 第二點：20l 樣液。 第三節(jié)：20l 樣液+10L0.04gml AFTB1規(guī)范運用液。 第四點：20l 樣液+10L0.02gml AFTB1規(guī)范運用液。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定 (3)展開與察看 在展開槽內(nèi)加10mL無水乙醚，預(yù)展12cm，取出揮干。再于另一展開槽內(nèi)加10

12、mL丙酮三氯甲烷(8+92)，展開1012cm，取出，在紫外光下察看結(jié)果. 方法如下： a由于樣液上加滴了AFTB1規(guī)范，可使AFTB1規(guī)范點與樣液中AFTB1，熒光點重疊。假設(shè)樣液為陰性，薄板上第三點AFTB1為0.0004g，可用作檢查樣液中AFTB1最低檢出量能否正常出現(xiàn)；假設(shè)樣液為陽性；那么起定性作用。薄層板上第四點AFTB1規(guī)范為0.002g，主要起定位作用。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定b假設(shè)第二點與AFTB1規(guī)范點的相應(yīng)位置上無藍色熒光點，那么表示樣品中AFTB1含量5gkg；假設(shè)在相應(yīng)位置上有藍色熒光點，那么需進展確證實驗。 (4)確證實驗：為確認薄層樣上樣液熒光系由黃曲霉毒素B1

13、產(chǎn)生的，加滴三氟乙酸，產(chǎn)生AFTB1的衍生物，展開后此衍生物的比移值約在0.1左右。于薄層板左邊依次滴加兩個點。 第一點：10L 0.04gmL AFTB1規(guī)范運用液。 第二點：20L樣液 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定 于以上兩點各加一小滴三氟乙酸蓋于其上，反響5min后，用吹風(fēng)機吹熱風(fēng)2min(板上溫度不高于40)，再于薄層板上滴加以下兩點。 第三點：10L 0.04gmL AFTB1規(guī)范運用液。 第四點：20L樣液。 按上法展開并察看，樣液能否產(chǎn)生與AFTB1規(guī)范點一樣的衍生物。未加三氟乙酸的三、四兩點，可依次作為規(guī)范與規(guī)范的衍生物空白對照。第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定5稀釋定量：樣液中的AFTB

14、1熒光點的熒光強度，如與AFTB1規(guī)范點最低檢出量0.0004g的熒光強度一致，那么樣品中AFTB1含量為即為5gkg。 假設(shè)樣液中熒光強度比最低檢出量強，那么根據(jù)強度估計，減少滴加微升數(shù)，或?qū)右合♂尯笤俚渭硬煌⑸龜?shù)，直至樣液的熒光強度與最低檢出量的熒光強度一致為止。滴加式樣如下： 第一點：10LAFTB1規(guī)范運用液0.04gmL。 第二點；根據(jù)情況滴加 10L樣液。 第三點：根據(jù)情況滴加 15L樣液。 第四點：根據(jù)情況滴加20L樣液。第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定6結(jié)果計算 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定式中 X樣品中AFTB1的含量，y/kg； V1參與苯一乙睛混合液的體積，mL； V2出現(xiàn)最低熒

15、光時滴加樣液的體積，mL； D樣液的總稀釋倍數(shù)； m1 參與苯一乙腈混合液溶解時相當樣品的質(zhì)量，g； 0.0004AFTB1的最低檢出限量，g。 2雙向展開法 (1) 點樣：取薄層板三塊，在距下端3cm基線上，在距左邊緣0.8lcm處，各滴加10LAFTB1(0.04gmL)規(guī)范液，在距左邊緣2.83cm處，各滴加20L樣液。然后在第二塊板的樣液點上加滴10L AFTB1(0.04gmL)規(guī)范液，在第三塊板的樣液點上加滴10L AFTB1(0.02gmL)規(guī)范液。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定(2) 展開a橫向展開：在展開槽內(nèi)的長邊置一玻璃支架，加10mL無水乙醇，將上述點好的薄層板靠規(guī)范點的長邊

16、，置于展開槽內(nèi)展酗，展至板端后，取出揮干。根據(jù)情況，需求時，可再反復(fù)12次。b縱向展開：揮干的薄層板以丙酮三氯甲烷(8:92)展開至10l2cm為止。丙酮與氯甲烷的比例，根據(jù)不同條件自行調(diào)理。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定 (3) 察看與評定結(jié)果:a在紫外光下察看第一、二塊板，假設(shè)第二塊板在AFTB1規(guī)范點的相應(yīng)處出現(xiàn)最低檢出量，而在第一板與第二板的一樣位置上未出現(xiàn)熒光，那么樣品中AFTB1含量5gkg。 b假設(shè)第一塊板與第二塊板的一樣位置上出現(xiàn)熒光點，那么將第一塊板與第三塊板比較，著第三塊板上第二點與第一塊板上第二點的一樣位置上的熒光點能否與AFTB1規(guī)范點重疊，假設(shè)重疊，再進展確證實驗。在詳細

17、測定中，三塊板可以同時做，也可按順序做。當?shù)谝粔K板出現(xiàn)陰性時，第三塊板可以省略，如第一塊板為陽性,那么第二塊板可省略，直接做第三塊。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定(4)確認實驗：另取薄層板二塊，于第四、五兩板距左邊緣0.81cm處，各滴加10LAFTB1(0.04gmL)規(guī)范液及1小滴三氟乙酸；在距左邊緣2.83cm 處，于第四板滴加20L樣液及1小滴三氟乙酸；于第五板滴加20L樣液、10LAFTB1規(guī)范液及1小滴三氟乙酸，反響5min后，用熱風(fēng)吹2min板上溫度不高于 40。 再用雙向展開法展開后，察看樣液能否產(chǎn)生與AFTB1規(guī)范點重疊的衍生物。察看時，可將第一板作為樣液的衍生物空白板。假設(shè)樣液

18、AFTB1含量較高時，那么將樣液稀釋后，按單向展開法中4做確認實驗。第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定 (5) 稀釋定量 假設(shè)樣液中AFTB1含量較高，可按單向展開法中5稀釋定量操作。假設(shè)AFTB1含量較低，稀釋倍數(shù)小，在定量的縱向展開板上仍有雜質(zhì)干擾，影響結(jié)果判別，可將樣液再做雙向展開法測定，以確定含量。6結(jié)果計算：同單向展開法。第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第四節(jié) 液相色譜法測定食品中苯并(a)芘食品中苯并(a)芘在的測定方法有薄層層析法、熒光分光光度法、氣相色譜和液相色譜法，這里引見液相色譜法。一、 原理 本法主要是利用樣品經(jīng)過提取、皂化或者液一液分配以及柱層析凈化，除去脂肪類物質(zhì)、色素和多環(huán)芳烴以外的其他物質(zhì)后，再經(jīng)過液相色譜儀中的色譜柱，將苯并芘從多環(huán)芳烴物質(zhì)中分別出來。求出樣品中苯并芘的含量。第四節(jié) 液相色譜法測定食品中苯并(a)芘二、儀器 (1)液相色譜儀： 色譜柱：ODS柱，柱長 250