5-食物中毒性細(xì)菌及其檢驗

1、食物中毒性細(xì)菌及其檢驗食品藥品學(xué)院微生物課程組內(nèi)容提要沙門氏菌檢測 大腸菌群及大腸桿菌檢測 副溶血性弧菌 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 志賀氏菌 金黃色葡萄球菌檢測 肉毒梭菌 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌 檢測等 食物中毒(food poisoning)是指攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有毒有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝人后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。包括食入被污染的食物或腐敗變質(zhì)的食物；飲用含有大量化學(xué)毒物或病原微生物的水，或用這種水烹調(diào)加工的食物等。 第一節(jié) 食物中毒概述注： 對于攝入非可食狀態(tài)的食物(未成熟的水果、蔬菜)，非正常數(shù)量的食物(暴飲、暴食)，以及某些食物雖可引起

2、疾病，其臨床癥狀與食物中毒類似，但不屬于食品中毒的范圍。 食源性疾病的概念具有三個基本要素：食物是傳播病原物質(zhì)的媒介、引起食源性疾病的病原物質(zhì)是食物中的各種致病因子、主要臨床癥狀表現(xiàn)為中毒性或感染性。美國FDA對食源性疾病的定義是指由于食用受污染的食品或者飲料而引起的疾病。WHO則將其定義為“凡是通過攝食 進入人體內(nèi)的各種致病因子引起的、 通常具有感染性質(zhì)或中毒性質(zhì)的一 類疾病”。 食物被某些病原微生物污染進食被毒物污染的食品食物本身含有天然有毒成分?jǐn)z入外形與普通食物相似，而實際含有毒成分的某些動植物此外，在食品中濫加營養(yǎng)素，對人體也有害食物發(fā)生生物性或物理化學(xué)性變化而產(chǎn)生或增加了有毒物質(zhì)食物

3、中毒的來源 潛伏期短，發(fā)病過程急劇所有病人都有類似的臨床表現(xiàn)，且多表現(xiàn)為腸胃炎的癥狀有明顯的季節(jié)性。夏、秋季多發(fā)生細(xì)菌性和有毒動植物食物中毒，冬、春季多發(fā)生肉毒中毒和亞硝酸鹽中毒等。發(fā)病率高且集中，人與人之間不直接傳染發(fā)病與進食同類食物有明顯的因果關(guān)系食物中毒的特征對酶系統(tǒng)的干擾對血紅蛋白運氧功能的阻斷對神經(jīng)傳導(dǎo)的干擾變態(tài)與光毒反應(yīng)食物中毒的機理 細(xì)菌性食物中毒的致病菌。包括沙門氏菌、致病性大腸埃希氏菌、變形桿菌、志賀氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽孢桿菌、空腸彎曲桿菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、椰毒假單胞菌酵米面亞種、單核細(xì)胞增生李斯特菌等。在食物中產(chǎn)生大量毒素

4、而引起。包括由黃曲霉毒素、鐮刀菌毒素、黃變米毒素、展青霉毒素、雜色曲霉毒素、棕曲霉毒素、交鏈孢霉毒素等；真菌毒素食物中毒如赤霉病麥面、霉變甘蔗中毒，霉變花生或玉米中毒等。微生物性食物中毒的類型 第二節(jié) 食物中毒性細(xì)菌及其檢驗I 沙門氏菌屬1880年E. Berth首先發(fā)現(xiàn)傷寒沙門氏菌，1885年Salmon與Smith又分離出豬霍亂沙門氏菌，以后取Salmon氏之名為本菌屬之名。沙門氏菌屬是一群符合腸桿菌科定義并與其血清學(xué)相關(guān)的革蘭氏陰性、需氧性、無芽孢桿菌。本菌屬種類繁多，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)2300多個血清型我國已發(fā)現(xiàn)血清型近200個。它是引起食物感染與食物中毒的重要致病菌，是最常見的食

5、源性疾病的病原微生物。沙門氏菌屬生物學(xué)特性形態(tài)特征： 革蘭氏陰性，大小為130.40.9m的兩端鈍圓的短桿菌，無芽孢，一般無莢膜，除雞沙門氏菌和雛沙門氏菌以外，都有周身鞭毛，運動力強。培養(yǎng)特性：沙門氏菌需氧或兼性厭氧，10-42 都可生長，最適生長溫度為37，最適pH為6.87.8。營養(yǎng)瓊脂平板：3537培養(yǎng)1824h，其菌落大小一般為23mm，光滑、濕潤、無色、半透明、邊緣整齊S.S瓊脂：沙門氏菌不分解乳糖，形成無色或淺粉紅色、半透明的圓形菌落。產(chǎn)生硫化氫的菌株，菌落中心呈黑色。血平板：中等大小的灰白色菌落。生化特性：絕大多數(shù)沙門氏菌有規(guī)律的發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但也有不產(chǎn)氣者，不發(fā)酵蔗糖和側(cè)

6、金盞花醇、不產(chǎn)生吲哚、不分解尿素。沙門氏菌屬生物學(xué)特性沙門氏菌屬的抗原菌體抗原（O抗原）表面抗原（K抗原）：Vi抗原和M抗原鞭毛抗原（H抗原）纖毛抗原引起中毒的必要條件是食物中含有大量活菌.一般來說，當(dāng)食物中含菌量在105108 cfu/g范圍可引起食用者中毒。食入致病力強的沙門氏菌2105cfu/g即可發(fā)病，致病力弱的沙門氏菌108cfu/g才可發(fā)病。中毒的原因 中毒的機理 一般來說，當(dāng)沙門氏菌隨食物進入消化道后，可在小腸和結(jié)腸內(nèi)繼續(xù)繁殖，附于腸黏膜或侵入黏膜下層，引起腸黏膜的充血、水腫、組織炎癥，經(jīng)淋巴系統(tǒng)進入血液，出現(xiàn)菌血癥，引起全身感染。胃腸炎型：最常見，約占75。多由鼠傷寒、豬霍亂及

7、腸炎沙門氏菌引起。多數(shù)起病急驟類傷寒型：多由豬霍亂及鼠傷寒沙門氏菌所引起。潛伏期平均310d敗血癥型：常見的致病菌為豬霍亂或鼠傷寒沙門氏菌。多見于嬰幼兒兒童感冒型：霍亂型：可出現(xiàn)嚴(yán)重脫水以至循環(huán)衰竭。中毒的癥狀 預(yù)防中毒措施 沙門氏菌主要來源是患病人和動物(牛、豬、羊、家禽等)的腸 道、血液、糞便、尿液，一般情況下腸道帶菌率較高。 防止食品原料和成品被污染控制生長繁殖食前徹底加熱殺菌 國標(biāo)法參看食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗(GB/T 4789.4)。熒光抗體技術(shù)、ELISA、單克隆抗體技術(shù)等。商品化的生化快速檢定系統(tǒng)：如API系統(tǒng)、R/B系統(tǒng)、腸管(enterotube)系統(tǒng)等。其中以AP

8、I系統(tǒng)應(yīng)用較為廣泛，此外還BAX系統(tǒng)在許多國家用于沙門氏菌的快速檢測。沙門氏菌屬-檢驗方法API 20EFDA BAM 沙門氏菌檢驗流程前增菌 25g樣+225mL乳糖肉湯 （肉制品、肉副產(chǎn)品、動物產(chǎn)品） 勻質(zhì)2min，室溫放置60 5min 混合均勻，測定調(diào)節(jié)PH6.8 0.2 35、24 2h選擇性增菌 0.1ml+10mlMM（RV） 1ml+10mlTTB 42、24h （水浴培養(yǎng)） 35、24h 43、24h（水浴培養(yǎng)） 含菌量高 含菌量低分離培養(yǎng) 劃線接種 選擇性培養(yǎng)基（BS、XLD、HE） 35、2448h（BS）生化鑒定 每個平板挑取至少2個可疑菌（包括典型和非典型各2個） 接

9、種TSI三糖鐵、LIA賴氨酸鐵高層斜面（LIA高層深4cm） （松蓋以保持有氧條件防止產(chǎn)生過多H2S） 35、242h 棄去 尿素酶試驗 衛(wèi)矛醇、 氰化鉀、丙二酸鈉、吲哚試驗 陽性 陰性血清學(xué) 血清學(xué)試驗沙門氏菌的分類 報告結(jié)果生鮮食物、嚴(yán)重污染的食品和動物飼料ISO6579 沙門氏菌檢驗流程前增菌 25g樣+225mLBPW 勻質(zhì) 371、18 2h選擇性增菌 0.1ml+10mlRVS 1ml+10mlMKTTn 41.5 1、24 3h 37 1、24 3h （水浴培養(yǎng)）分離培養(yǎng) 劃線接種選擇性培養(yǎng)基（XLD和第二種選擇性培養(yǎng)基，如 BS） 37、2448h（BS） 每個平板挑取至少5個

10、可疑菌進行純培養(yǎng)和確認(rèn)試驗 37、243h 生化鑒定 TSI、尿素酶、賴氨酸脫羧酶、-牛乳糖、V-P、 吲哚試驗血清學(xué) 血清學(xué)試驗沙門氏菌的分類 報告結(jié)果ISO6579 沙門氏菌生化試驗表試驗沙門氏菌屬傷寒A型副傷寒B型副傷寒C型副傷寒其他菌屬反應(yīng)%b反應(yīng)%b反應(yīng)%c反應(yīng)%c反應(yīng)%bTSI葡萄糖產(chǎn)酸+100+100+100TSI葡萄糖產(chǎn)氣-d0+100+92TSI乳糖產(chǎn)酸-2-100-1TSI蔗糖產(chǎn)酸-0-0-1TSI硫化氫產(chǎn)生+97-10+92尿素水解-0-0-1賴氨酸脫羧酶+98-0+95-牛乳糖反應(yīng)-0-0-2eV-P反應(yīng)-0-0-0吲哚反應(yīng)-0-0-1b：百分率表明并不是所有分離到的沙

11、門氏菌血清型都會顯示+或-的結(jié)果。c：這些百分率不能從現(xiàn)有的文獻中獲得。d：傷寒沙門氏菌不產(chǎn)氣e：亞利桑那亞型腸炎沙門氏菌為乳糖陽性或陰性反應(yīng)，但通常-牛乳糖反應(yīng)陽性。沙門氏菌檢驗選擇性分離培養(yǎng)XLD瓊脂：FDA BAM典型菌落：粉色菌落，帶或不帶黑色中心。許多沙門氏菌培養(yǎng)物可呈 現(xiàn)大的具光澤的黑色中心或幾乎為全部黑色的菌落。 非典型菌落：黃色帶或不帶黑色中心。ISO中心黑色、周圍由于指示劑顏色的改變而出現(xiàn)紅色的輕微透明帶。菌名菌落形態(tài)鼠傷寒沙門氏菌 紅色，有黑心傷寒沙門氏菌紅色，有黑心弗氏志賀氏菌紅色大腸埃希氏菌 黃色，有膽鹽沉淀環(huán)糞鏈球菌 -沙門氏菌檢驗選擇性分離培養(yǎng)BS瓊脂：FDA BA

12、M典型菌落：產(chǎn)硫化氫菌落黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周 圍的培養(yǎng)基通常開始呈褐色，但伴隨培養(yǎng)時間的延長而 變?yōu)楹谏⒂袝灜h(huán)效應(yīng)； 非典型菌落：有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成灰綠色菌落，周圍培養(yǎng) 基不變色。菌名菌落形態(tài)傷寒沙門氏菌 黑色，有金屬光澤鼠傷寒沙門氏菌 黑色，有金屬光澤奇異變形桿菌褐色或呈黑色，無金屬光澤弗氏志賀氏菌棕色至綠色大腸埃希氏菌 棕色至綠色糞鏈球菌 -50071 44104Blank 50115沙門氏菌檢驗選擇性分離培養(yǎng)HE瓊脂：FDA BAM典型菌落：蘭綠色至蘭色，多數(shù)菌株產(chǎn)硫化氫，菌落帶或不帶黑色 中心或幾乎全黑色。 非典型菌落：乳糖陽性的菌株為黃色中心黑色或全黑色。

13、菌名菌落形態(tài)傷寒沙門氏菌 藍(lán)綠色，部分有黑心鼠傷寒沙門氏菌 藍(lán)綠色，部分有黑心奇異變形桿菌藍(lán)綠色，有或無黑心弗氏志賀氏菌藍(lán)綠色大腸埃希氏菌 橙紅色，有膽酸鹽沉淀糞鏈球菌 -沙門氏菌檢驗生化鑒定TSI：典型反應(yīng)：斜面產(chǎn)堿（K）：紅色； 底部產(chǎn)酸（A）：黃色； 產(chǎn)H2S：黑色（少數(shù)不產(chǎn)）菌名生化反應(yīng)腸炎沙門氏菌 K/A，產(chǎn)氣，產(chǎn)H2S大腸埃希氏菌A/A，產(chǎn)氣銅綠假單胞菌 K/K奇異變形桿菌K/A，產(chǎn)H2S弗氏檸檬酸桿菌A/A，產(chǎn)H2S弗氏志賀氏菌K/A沙門氏菌檢驗幾點注意冷凍樣品解凍需在45以下，有自動調(diào)溫器自控的水浴鍋內(nèi)不斷攪拌進行15min或在2-8，18小時內(nèi)軟化。為保證檢驗的準(zhǔn)確性，必須在

14、選擇性培養(yǎng)基上挑取足夠數(shù)量的菌落進行生化和血清學(xué)鑒定。進行生化反應(yīng)時，應(yīng)以純培養(yǎng)物進行試驗，如出現(xiàn)血清學(xué)陽性，而生化反應(yīng)特征不符合時，應(yīng)對接種物進行純化，用純化后的培養(yǎng)物重新進行生化試驗。測試中應(yīng)同時接種陽性對照菌株。II 致病性大腸埃希氏菌大腸桿菌（也稱大腸埃希氏菌），分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬。大腸桿菌指革蘭氏陰性無芽孢桿菌、乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMViC試驗（靛基質(zhì)、MR、V-P、檸檬酸鹽試驗）為+-或-+-的細(xì)菌。與人類有關(guān)的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，包括五種：腸毒素性大腸桿菌（ETEC）、致病性大腸桿菌（EPEC）、出血性大腸桿菌（EHEC）、侵襲性大腸桿菌（EIEC）、黏附

15、性大腸桿菌（EAEC）。大腸菌群和大腸桿菌的關(guān)系耐熱大腸菌群的定義：能在液體乳糖培養(yǎng)基中35/37 培養(yǎng)48h產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并在44.5培養(yǎng)24h產(chǎn)酸產(chǎn)氣的細(xì)菌（依據(jù)ISO標(biāo)準(zhǔn)）衛(wèi)生學(xué)意義大腸菌群和大腸桿菌是評價衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，作為食品中的糞便污染指標(biāo)。食品中檢出大腸菌群，表明該食品有糞便污染，既可能有腸道致病菌存在，因而也就有可能通過污染的食品引起腸道傳染病的流行。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反映了對人體健康危害性的大小。大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道致病菌接近，它的出現(xiàn)預(yù)示著某些腸道病原菌的存在，因此該菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌。近年來，有些國家在執(zhí)行HACCP管理

16、中，將大腸桿菌檢測作為微生物污染狀況的監(jiān)測指標(biāo)和HACCP實施效果的評估指標(biāo)。大腸桿菌的生物學(xué)特性基本形態(tài)： 此菌為兩端鈍圓的短小桿菌，一般約0.5-0.8m*1.0-3.0 m，多單獨存在或成雙，但不呈長鏈排列。約50%的菌株有周生鞭毛，但多數(shù)只有1-4根，一般不超過10根，故菌體動力弱。多數(shù)菌株有菌毛，有的有莢膜或微莢膜，不形成芽孢，對普通堿性染料著色良好，革蘭氏染色陰性。大腸桿菌的生物學(xué)特性培養(yǎng)特性：大腸桿菌合成代謝能力強，在含無機鹽、銨鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好。最適生長溫度為37，在42-44 條件下仍能生長，生長溫度范圍15-46 。 在普通營養(yǎng)瓊脂上有3中菌落形態(tài)： 1）光

17、滑型：菌落邊緣整齊，表面有光澤、濕潤、 光滑、呈灰色，在生理鹽水中易分散； 2）粗糙型：菌落扁平、干澀、邊緣不整齊，易 在生理鹽水中自凝； 3）黏液型：常為含有莢膜的菌株。大腸埃希氏菌的抗原菌體抗原（O抗原）鞭毛抗原（H抗原）表面抗原（K抗原）：莢膜抗原、被膜抗原、表面抗原該菌屬的抵抗力 本菌在自然界生存力較強。在土壤、水中可存活數(shù)月，在寒冷干燥的環(huán)境中可存活較久，而在潮濕、溫暖的環(huán)境中，存活不到1個月。對熱抵抗力不強，60加熱30min即可被殺死。本菌培養(yǎng)物在室溫中可存活數(shù)周，如密封者在黑暗室溫(2022)中至少能保存1年，凍干菌種置低溫(-20以下)至少能活10年。對常用消毒劑抵抗力不強，

18、510漂白粉、3來蘇兒、5石炭酸等均能迅速殺死大腸桿菌。對氯很敏感，在含有0.2mg/kg游離氯的水中，即可很快死亡。對強酸和強堿較敏感。 致病因素多數(shù)大腸埃希菌在腸道內(nèi)不致病，但如移位至腸道外的組織或器官，如尿道、膽道、前列腺、肺、骨和腹腔等其他部位則可引起腸道外感染。腸道外感染以泌尿系統(tǒng)和化膿性感染最為常見。 致病性E.coli引起食物中毒一般與人體攝人的活菌量有關(guān)。只有食品中活菌數(shù)在107cfu/g以上，才可使人致病。其中毒原因同沙門氏菌。中毒的原因中毒的機理 當(dāng)致病性E.coli進人人體消化道后，ETEC可在小腸內(nèi)繼續(xù)繁殖，產(chǎn)生腸毒素。腸毒素吸附于小腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上EIEC可以侵入

19、結(jié)腸黏膜的上皮細(xì)胞。中毒的癥狀 EAEC、EPEC、ETEC、EHEC、EIEC引起中毒的食品：主要是肉類、乳與乳制品、水產(chǎn)品、豆制品、蔬菜，尤其是肉類和涼拌菜。 污染途徑：致病性E.coli主要寄居于人和動物腸道中，隨糞便污染。預(yù)防中毒措施： 1.防止食品原料和成品被帶菌的人和動物，以及污水、不潔的容器和用具等污染； 2.低溫冷藏生肉、熟食品和其他動物性食品，一般應(yīng)置于45低溫儲藏； 3.食前徹底加熱殺菌。致病性大腸埃希氏菌-檢驗方法國標(biāo)法參看食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗(GB/T 4789.6)。檢測大腸桿菌及其腸毒素的新技術(shù)、新方法很多。如用K88單抗血清對糞中K88菌檢出率

20、比常規(guī)培養(yǎng)法提高1倍，最小檢測菌量為10 000cfu/mL。987P酶標(biāo)單抗對糞便和腸內(nèi)容物最小檢出菌量為2 000cfu/mL。對致病性大腸桿菌毒力基因檢測，過去多用動物或細(xì)胞培養(yǎng)測定，現(xiàn)可用其單抗以多種免疫學(xué)手段檢出。如用免疫磁分離法檢測牛糞便和食品標(biāo)本的大腸桿菌O157：H7，可提高了大腸桿菌O157：H7感染病例的檢出率。 據(jù)報道，2004年10月，美國佛羅里達大學(xué)科學(xué)家使用納米粒子技術(shù)，開發(fā)出一種新的大腸桿菌檢測法，即使樣本里只有一個大腸桿菌也能檢測出來，整個過程只需要20min。大腸菌群測定 MPN法檢驗流程（FDA BAM） 檢樣50g+450ml稀釋液 適當(dāng)十倍稀釋樣品選擇3

21、個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液，每個稀釋度接種三管LST肉湯（每管9mlLST肉湯并加有導(dǎo)管），每管接種1mL 35 ，24 2h 48 2h 沒有產(chǎn)氣管 有產(chǎn)氣管 報告陰性 接種BGLB肉湯管 接種EC肉湯 35 ，48 2h 44.50.5 （水浴培養(yǎng)） 24 2h 48 2h 查MPN表報告結(jié)果 產(chǎn)氣管接種EMB平板（35、1824h） （大腸菌群） 從EMB平板上挑取5個可疑菌轉(zhuǎn)接到PCA斜 面，進行革蘭氏染色、IMVC生化鑒定、接 種LST復(fù)檢產(chǎn)氣 查MPN表報告結(jié)果（大腸桿菌） 大腸菌群測定MPN法檢驗幾點說明MPN檢索表： MPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Num

22、ber)的簡稱。這種方法，對樣品進行連續(xù)系列稀釋，加入培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，從規(guī)定的反應(yīng)呈陽性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPN檢索表只給了三個稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。初發(fā)酵和證實試驗： 1）兩步法進行了兩次乳糖發(fā)酵試驗。初發(fā)酵和證實實驗所用培養(yǎng)基不同，但都是為了證實培養(yǎng)物是否符合大腸菌群的定義，即“在37分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。 LST中提供了磷酸鹽緩沖體系，氯化鈉可維持滲透壓，月桂基硫酸鈉可抑制非大腸菌群的生長，這個緩沖蛋白胨乳糖肉湯允許“緩慢乳糖發(fā)酵（Slow lactose fermentations）”來促進菌體產(chǎn)氣。BGLB中膽鹽

23、和煌綠可以抑制革蘭氏陽性細(xì)菌和除了大腸菌群的很多革蘭氏陰性細(xì)菌。 2）初發(fā)酵陽性管，不能肯定就是大腸菌群細(xì)菌，經(jīng)過證實試驗后，有時可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明，食品中大腸菌群檢驗步驟的符合率，初發(fā)酵與證實試驗相差較大。因此，在實際檢測工作中，證實試驗是必需的。產(chǎn)氣量與倒管： 在乳糖發(fā)酵試驗工作中，經(jīng)常可以看到在發(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡（有時比小米粒還?。?，有時可以遇到在初發(fā)酵時產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。實驗表明，大腸菌群的產(chǎn)氣量，多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體，少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時，可以用手輕輕打動試管，如有氣泡沿管壁上浮，即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)

24、生，而應(yīng)作進一步試驗。 大腸桿菌測定EMB選擇性分離鑒別EMB平板典型大腸桿菌菌落特征：中心黑色或紫紅色，有或無綠色金屬光澤大腸桿菌測定EMB選擇性分離鑒別EMB是一種弱選擇性培養(yǎng)基，一些球菌也可在該培養(yǎng)基上生長；高壓滅菌可使得美藍(lán)還原從而使培養(yǎng)基的顏色呈不均一橘黃色，輕輕搖動培養(yǎng)基可以恢復(fù)原有的正常紫色，傾注平板前應(yīng)先搖勻；大腸桿菌在該培養(yǎng)基上并不一定總是呈現(xiàn)綠色的金屬光澤；該培養(yǎng)基受可見光易使其中的成分氧化，儲存及培養(yǎng)細(xì)菌時都應(yīng)在避光條件。菌名菌落形態(tài)大腸埃希氏菌 紫黑色，有綠色金屬光澤肺炎克雷伯氏菌粉色，中心色深陰溝腸桿菌粉色，中心色深弗氏志賀氏菌無色鼠傷寒沙門氏菌 無色糞鏈球菌無色大腸

25、桿菌測定革蘭氏染色基本原理： 革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。此法可將細(xì)菌分為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌兩大類。 革蘭氏染色的機理主要是利用兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)的不同。革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中含有較多的類脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少。當(dāng)用酒精或丙酮酸脫色時，類脂質(zhì)被溶解，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染后，又染上復(fù)染液的顏色。而革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁中肽聚糖的含量多而且交聯(lián)度大，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此細(xì)胞仍保留初染時的顏色。大腸桿菌測定革蘭氏染色Gram negativeGram positiveGram straining大腸桿菌測定革蘭氏染色基本步驟：將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染液，染1min，水洗；滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；滴加95%乙醇脫色約1530s,直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗；滴加番紅復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗、待干、鏡檢。結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。大腸桿菌測定生化鑒定Testpositivenegativebiotype1biotype2reagentIndole紅色環(huán)不變色+-KovacsMR紅色不變色+甲基紅V-P玫瑰紅色環(huán)不變色-V-P甲、乙液Citrate