EBV感染-PPT課件(PPT 37頁)

1、EB病毒感染的實驗室診斷方法 及合理運用第1頁，共37頁。兒童EBV感染診治中存在的問題EBV實驗室診斷方法的選擇和結(jié)果解讀 存在誤區(qū)IM的抗病毒治療較為混亂重癥EBV相關(guān)疾病（CAEBV、EBV-HLH） 等診斷和治療缺乏經(jīng)驗第2頁，共37頁。EpsteinBarr virus(EBV) 1964年發(fā)現(xiàn)，DNA病毒，皰疹 病毒 人群感染率高，終身潛伏感染， 具有感染-潛伏-活化的特性 腫瘤相關(guān)病毒，每年EBV相關(guān) 腫瘤死亡病例達15-20萬 與很多疾病相關(guān)，幾乎可引起 所有臟器和組織的相關(guān)疾病 細胞免疫非常重要Khan G et al. Infectious Agents and Cance

2、r, 2014, 9:38.第3頁，共37頁。EB病毒持續(xù)感染示意圖原發(fā)感染后， EBV 在人體B淋巴細胞建 立潛伏感染，只表 達潛伏抗原，受感 染者成為終生病毒 攜帶者EBV健康攜帶者咽 部不定時排毒 在機體免疫功能下 降和某些因素觸發(fā) 下，潛伏的EBV可 以被再激活，引起 病毒復(fù)制及臨床癥 狀Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319第4頁，共37頁。EBV感染的流行病學(xué)在我國，EBV的原發(fā)感染的高峰年齡在兒童，10歲時90%以上血清陽性轉(zhuǎn)化0.200.60.4EBV血清抗體陽性轉(zhuǎn)化率10.80-3m10y3m-1y1y-3y3y-6y 6y-10y年齡百分率CA-

3、IgG NA-IgG CA-IgM中華實驗和臨床病毒雜志，2008,22（1）：30-32北京兒童醫(yī)院資料第5頁，共37頁。傳染性單核細胞增多癥（Infectious mononucleosis，IM）慢性活動性EB病毒感染（Chronic active EBV infection，CAEBV）EB病毒相關(guān)性嗜血細胞綜合征（EBV-associated hemophagocytic syndrome, EBVAHS)伴性淋巴增殖綜合征（X-linked lymphoproliferative syndrom）鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma）Burkitts 淋巴瘤（B

4、urkitts lymphoma）何奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma）其他：腦炎，腎炎，間質(zhì)性肺炎，肝炎，多發(fā)性硬化第6頁，共37頁。臨床實踐診斷EBV感染時需要回答的問題 是否感染EBV? EBV感染的時相？ 是否EBV活動性感染？ 組織或器官中EBV感染的細胞定位如何？第7頁，共37頁。EBV感染相關(guān)的實驗室指標(biāo)血常規(guī)：淋巴細胞比例50%（學(xué)齡以上兒童）嗜異凝集抗體異型淋巴細胞EBV特異性抗體熒光定量PCR檢測EBV核酸EBERs原位雜交實驗：EBV感染受累的組織學(xué)證據(jù)特異性 指標(biāo)非特異 性指標(biāo)第8頁，共37頁。實驗室指標(biāo)一：嗜異凝集抗體血清嗜異凝集抗體檢測也稱“Monosp

5、ot”試驗，1932年引 入臨床實踐診斷傳染性單核細胞增多癥該為IgM抗體，在病程第12周出 現(xiàn)，持續(xù)約6個月在青少年原發(fā)性EBV感染中其陽性 率可達80-90，約10的青少年缺乏對嗜異性抗體的陽性反應(yīng)小于12歲者，EBV感染IM患者該試 驗的陽性率為25%-50%J Appl Clin Pediatr, 2007,22(22)N Engl J Med. 2010;362:1993-2000第9頁，共37頁。實驗室指標(biāo)二：異型淋巴細胞外周血異型淋巴細胞比例10%1、在西方國家，其診斷IM的敏感性為75%，特異性為92%2、學(xué)齡前兒童異型淋巴細胞比例較低。外周血異型淋巴細胞 比例 10%的病例在

6、學(xué)齡前兒童EBV-IM中只有41.8%；對于較 大年齡兒童異型淋巴細胞的診斷意義更大N Engl J Med. 2010;362:1993-2000World J Pediatr, 2011, 7(1): 45-49第10頁，共37頁。實驗室指標(biāo)三: EBV特異性抗體EBV-CA-IgM 檢測1、近期EBV感染的指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床2、EBV感染的血清學(xué)反應(yīng)復(fù)雜多樣，有的病例抗EBV-CA-IgM產(chǎn)生 延遲，有的持續(xù)缺失或長時間存在3、12%-17%大于16歲的青少年原發(fā)EBV感染后不能檢測到CA-IgM 抗體，且4歲以下幼兒CA-IgM抗體水平低，持續(xù)時間短，易見假陰性 結(jié)果Gao Li w

7、ei, et al. Chin J Evid Based Pediatr, 2011,6(6):467-470. Robertson P, J Med Virol, 2003,70(4): 617-623第11頁，共37頁。單份血清VCA-IgM在診斷 小年齡兒童原發(fā)性EBV感染IM的局限性Pediatrics International (2010) 52, 536540第12頁，共37頁。原發(fā)EBV感染的體液免疫原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn) 生針對衣殼抗原（capsid antigen，CA）IgG和IgM（抗 CA-IgG/IgM） 在急性感染的晚期，抗早期抗原（early angtig

8、en，EA）抗體出現(xiàn)在恢復(fù)期晚期，抗核抗原（nuclear antigen，NA）抗體 產(chǎn)生抗CA-IgG和抗NA-IgG可持續(xù)終身JMD, 2008, 10(4):279-292不同時間段的抗體譜不同第13頁，共37頁。5% 的EBV新近感染 抗CA抗（IgM）陰性在罕見的病例中抗CA 抗體(IgM)會持續(xù)陽性20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗體（IgG）陰性抗EBNA抗體(IgG)陰性體液免疫的特殊情況第14頁，共37頁。實驗室指標(biāo)四：EBV病毒核酸檢測Real-time PCR是目前最主要的監(jiān)測EBV載量的方法，可以指導(dǎo)治 療和判斷療效，如PTLD/EBV-HLH/CAEBV等樣

9、本：血樣本（包括全血、單個核細胞、或血清/血漿），非鼻 咽拭子或鼻咽吸取液，不同疾病所需的適宜樣本不同注意：Real-time PCR陽性，只能提示機體存在活動性EBV感 染或病毒活動性復(fù)制，不能鑒別是原發(fā)EBV感染還是既往EBV感染 再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，因此，單 純Real-time PCR陽性在IM診斷中價值有限第15頁，共37頁。實驗室指標(biāo)五：EBERS原位雜交試驗 EBV潛伏感染的細胞含有大量的EBER1/EBER2（EBERS） 轉(zhuǎn)錄子 每個EBV潛伏感染的細胞含有大約106拷貝EBERS，被認 為EBV潛伏感染的最好標(biāo)志物 原位雜交試驗檢測腫瘤細胞中E

10、BERS是診斷腫瘤是否EBV 相關(guān)的金標(biāo)準(zhǔn)第16頁，共37頁。陽性對照陰性對照EBV-EBERS陽性樣本陰性樣本第17頁，共37頁。不同EB病毒相關(guān)腫瘤中EBERS的檢出情況Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319.第18頁，共37頁。 是否感染EBV? EBV感染的時相？臨床實踐需要回答的問題（一）EBV血清抗體 譜檢測第19頁，共37頁。HH Balfour, et al. Clinical & Translational Immunology, 2015, 4(2) , e33.EBV抗體譜檢測，可以初步判斷是否感染EBV，以及感 染的大致時間如EBNA-IgG

11、陽性，提示機體至少已感染EBV近2-3個月第20頁，共37頁。免疫功能正常患者EBV血清學(xué)特點抗EBV抗體VCA-IgMVCA-IgGEBNA-IgG解釋陰性陰性陰性無免疫反應(yīng)陽性陰性陰性急性感染或非特異反應(yīng)1陽性陽性陰性急性感染陰性陽性陽性既往感染陰性陽性陰性急性感染或既往感染1陽性陽性陽性原發(fā)感染晚期或再激活1陰性陰性陽性既往感染或非特異反應(yīng)注：1 有待進一步確定World J Virol,2012,1(1):31-43.第21頁，共37頁。CAEBV患者EBV抗體檢測Chin Med J 2009; 122(3):262-266.CAEBV患者EBV抗體譜呈現(xiàn)多種類型，多數(shù)患者 EA-I

12、gG陽性，提示活動性感染第22頁，共37頁。EBV-HLH患者的EBV抗體檢測Chin Med J. 2010;123(11) :1426-1430.第23頁，共37頁。臨床實踐需要回答的問題（二） 機體是否存在EBV活動性感染？EBV核酸檢測 何種標(biāo)本送檢？血清/血漿？全血？PBMC?不同疾病需要的送檢標(biāo)本不同第24頁，共37頁。J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92.EBV既往感染的健康人群，血清/低血漿中檢測不到EBV- DNA ；但全血/PBMC標(biāo)本中常有拷貝的EBV-DNA第25頁，共37頁。Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319不同

13、EBV相關(guān)疾病中，EBV核酸在外周血中存在區(qū)間不同第26頁，共37頁。Expert Rev. Clin. Immunol. 2013, 9(2), 139151.第27頁，共37頁。 IM患者外周血中EBV載量在2周內(nèi)達到峰值，至病程14天，多數(shù)IM 患者血清中已檢測不到病毒核酸，病程22天后，所有IM血清中均 檢測不到EBV核酸J Med Virol, 2003, 70(4): 617-623但外周血單個核細胞中EBV核酸陽性可持續(xù)6個月以上，需要1年 或更長時間達到EBV健康攜帶者的全血EBV-DNA水平（1-50拷貝 EBV-DNA/106 個WBC）J Infect Dis, 2013

14、, 207: 80-88J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92標(biāo)本：血清或血漿，不建議使用全血或PBMC標(biāo)本重癥病例監(jiān)測EBV載量有助于鑒別EBV-HLH第28頁，共37頁。絕大多數(shù)CAEBV患者PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷貝/g DNA， CAEBV患者血漿/血清中EBV-DNA水平與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)CAEBV患者血漿和PBMC中EBV核酸載量存線性關(guān)系CAEBV患者EBV-DNA檢測Blood ,2001 , 98 : 280-286第29頁，共37頁。EBV-HLH患者外周血單個核細胞（PBMC）和血漿/血清均含有很高的 EBV-DNA載量，監(jiān)測EBV-HLH患者血清中EBV-DNA載量有助于評估療效EBV-HLH患者EBV-DNA檢測Leukemia & Lymphoma, 2002, 43: 173-179第30頁，共37頁。臨床實踐需要回答的問題（三） 組織或器官中EBV感染的細胞定位如何？EBERs檢測第31頁，共37頁。J Hepatol. 2006, 44(5):879-85.EBERRISH 顯示，EBERs陽性的細胞為浸潤 的淋巴細胞（如箭頭所 示），而肝細胞、膽管 上皮細胞和內(nèi)皮細胞中 未見EBV相關(guān)肝損害中，EBV感染的細胞為淋巴細胞第32頁，共37頁。臨床實踐診斷EBV感染時需要回答的問題 是否感染EBV?