《微生物學(xué)實驗》課件實驗一

1、微生物學(xué)實驗實驗要求課前充分預(yù)習(xí)，上課不無故缺席，及時上交實驗報告。實驗期間不得大聲喧嘩、服從老師的安排、注意安全。實驗器材專人專用，對儀器要愛護(hù)，損壞實行賠償制度。實驗菌種和物品未經(jīng)許可，不得攜出室外，用后的菌種按老師要求妥善處理。維護(hù)好實驗室的環(huán)境衛(wèi)生，實行值日生制度。實驗報告要求統(tǒng)一用A4紙手寫實驗報告封面格式 1、實驗課程名稱 2、實驗項目名稱 3、學(xué)生所在的專業(yè)、班級、姓名、學(xué)號 4、實驗日期 5、同組者姓名實驗報告格式 1、實驗?zāi)康?2、實驗原理 3、實驗儀器、溶液試劑 4、實驗步驟 5、實驗結(jié)果（如繪圖、列表等） 6、思考題實驗成績的組成 平常成績40 （實驗操作表現(xiàn)、實驗報告）

2、 操作考試30 筆試成績30實驗內(nèi)容顯微鏡的使用及酵母菌、放線菌的形態(tài)觀察細(xì)菌的單染色和革蘭氏染色霉菌的形態(tài)觀察微生物大小測定、顯微鏡直接計數(shù)法土壤中微生物的分離純化與活菌計數(shù)微生物生理生化反應(yīng)微生物的紫外誘變實驗一（一）顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用方法一、目的要求了解普通光學(xué)顯微鏡(復(fù)式顯微鏡)的構(gòu)造、基本原理、維護(hù)和保養(yǎng)的方法學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用方法二、光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)機(jī)械和支架系統(tǒng)照明系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng)三、油鏡的工作原理增加照明亮度增加顯微鏡的分辨率1.55顯微鏡的分辨率：顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。 D=/2NA=/2nsin(/2 ) D：分辨率NA：物鏡的數(shù)值

3、孔徑值：可見光的波長（平均0.55m) n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率：鏡口角（即入射角）四、顯微鏡的使用方法觀察前的準(zhǔn)備顯微鏡的安置光源調(diào)節(jié)根據(jù)個人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡 右眼看清調(diào)節(jié)左目鏡的視度調(diào)節(jié)圈扳動鏡管，調(diào)節(jié)至瞳孔間距顯微觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察（同焦現(xiàn)象）油鏡觀察在待觀察的樣品區(qū)域滴加香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺緩慢上升，使油鏡浸在鏡油中。顯微鏡用畢后的處理下降載物臺，取下載玻片；用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙沾取少量酒精乙醚洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后用干凈的擦鏡紙擦去殘留的洗液（三遍擦拭法）用擦鏡紙清潔物鏡及目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件；將鏡體各

4、部分復(fù)原。五、思考題用油鏡觀察時應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有何作用？什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？ 影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？ P47五、2.（）（3）（4）（二）酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別目的要求觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的實驗方法。基本原理 美藍(lán)是一種無毒性染料.氧化型呈現(xiàn)藍(lán)色,還原型呈現(xiàn)無色.用美藍(lán)對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色,代謝活力強(qiáng)的細(xì)胞具有較強(qiáng)的還原能力,能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型.因此,具有還原能力的酵母活細(xì)胞為無色,死細(xì)胞或代謝能力弱的衰老細(xì)胞為藍(lán)色.實驗器材菌種啤酒酵母溶液或試劑 0.1%呂氏

5、堿性美藍(lán)染色液儀器或其他用具顯微鏡，蓋玻片，載玻片，濾紙，擦鏡紙。實驗步驟制片在載玻片中央加一滴0.1%美藍(lán)取菌少許混勻蓋上蓋玻片靜置3min、0.5h觀察用高倍鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖根據(jù)顏色鑒別死活細(xì)胞活細(xì)胞：無色；死細(xì)胞：藍(lán)色實驗結(jié)果繪圖說明你所觀察到的酵母菌的形態(tài)特征及出芽生殖方式。記錄染色時間對酵母菌死活細(xì)胞數(shù)量的影響。思考題呂氏堿性美藍(lán)染色液作用時間的不同，對酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。（三）、放線菌的形態(tài)觀察目的要求學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌的基本方法。初步了解放線菌的形態(tài)特征?；驹?利用扦片法觀察自然生長狀態(tài)下放線菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲。實驗器材菌種細(xì)黃鏈霉菌培養(yǎng)基高氏號瓊脂培養(yǎng)基溶液或試劑0.1%美藍(lán)染色液儀器或其他用具顯微鏡，鑷子，載玻片，接種環(huán)等。扦片法倒平板取孢子劃線接種無菌操作將滅菌的蓋玻片以大約45扦在接種線上28倒置培養(yǎng)3-5d 取培養(yǎng)后的蓋玻片用0.1%美藍(lán)對蓋玻片染色后觀察油鏡下觀察基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子絲的卷曲狀況，以及分生孢子的形狀，并繪圖說明。油鏡下觀察的放線菌實驗結(jié)果繪圖說明你所觀察到的放線菌的形態(tài)特征。