科技獎(jiǎng)勵(lì)申報(bào)(禽流感動(dòng)物模型、免疫機(jī)理及疫苗研制ppt課件

1、肇慶大華農(nóng)生物藥品 廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)所 廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份 2021年11月禽流打動(dòng)物模型、免疫機(jī)理及疫苗研制與推行運(yùn)用 立項(xiàng)背景總體思緒 主要技術(shù)內(nèi)容 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)匯報(bào)提綱五六三二一四七相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)與獲獎(jiǎng)勵(lì)情況主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)目的與推行效益 主要完成人對(duì)工程的奉獻(xiàn)禽流感的危害經(jīng)濟(jì)損失宏大危害人類安康影響國(guó)家籠統(tǒng)和社會(huì)穩(wěn)定2005年11月8日，溫家寶在黑山防治高致病性禽流感醫(yī)療站探望醫(yī)療、防疫人員。一 立項(xiàng)背景1 迄今為止，全世界已有超越 4億只家禽染病死亡或慘遭撲殺，呵斥的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)200 億美圓我國(guó)2004年、05年、06年大規(guī)模迸發(fā)禽流感，養(yǎng)禽業(yè)損失150億美圓以上世界衛(wèi)生組織發(fā)出警

2、告，一場(chǎng)全球性的流感大流行將會(huì)導(dǎo)致200萬(wàn)700萬(wàn)人命喪黃泉人們心思恐慌，不敢吃雞，家禽業(yè)受損，出口受阻，旅游業(yè)受挫，行業(yè)經(jīng)濟(jì)全面遭到?jīng)_擊，影響社會(huì)穩(wěn)定糧農(nóng)組織的資料顯示，H5N1高致病性禽流感疫情于2003年迸發(fā)后，在全球己感染565人，導(dǎo)致331人死亡。今年9月，結(jié)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO)官員盧布羅夫日前發(fā)出警告，一種致命的“H5N1高致病性禽流感變種病毒在越南出現(xiàn)?，F(xiàn)有的一切疫苗對(duì)該病毒均無(wú)效果。1、我國(guó)地域遼闊，候鳥(niǎo)的遷簁致使禽流感長(zhǎng)期存在，加劇防疫的難度。2、禽流感毒株變異快，對(duì)疫苗防控技術(shù)提出新的挑戰(zhàn)。3、動(dòng)物禽流感疫苗消費(fèi)工藝落后，規(guī)范化程度低，亟待改良。4、研討人禽流感疫苗

3、和藥物缺乏哺乳動(dòng)物模型，有待摸清和建立哺乳動(dòng)物的免疫機(jī)理。針對(duì)以上問(wèn)題，進(jìn)展了“禽流打動(dòng)物模型、免疫機(jī)理及疫苗的研討肌肉變綠一 立項(xiàng)背景2禽流感防治存在的問(wèn)題二 總體思緒1、經(jīng)過(guò)蛋白重組技術(shù)，建立禽流感疫苗產(chǎn)業(yè)化的根底種毒和疫苗毒株，研制高致病性多變異型的高效疫苗，用于動(dòng)物禽流感的防控。2、利用造模毒株建立哺乳動(dòng)物模型,為人禽流感疫苗和藥物研討提供技術(shù)支持。3、研討新的消費(fèi)工藝，制定新的規(guī)范，為禽流感疫苗產(chǎn)業(yè)化提供檢驗(yàn)規(guī)范和制造規(guī)范。三 主要技術(shù)內(nèi)容三 主要技術(shù)內(nèi)容11、制備禽流感毒株挑選造模毒株確定鵝源禽流感H5N1病毒(A/Goose/Guangdong/NH/2003)是適宜的毒株，不用

4、經(jīng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞順應(yīng)，利用雞胚內(nèi)擴(kuò)增病毒后即可感染哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并在體內(nèi)增殖，表現(xiàn)出與人禽流感類似的臨床病癥。挑選疫苗毒株最終選取H5N1Re-1/4/5、H9SS和(SS/94)作為制備疫苗毒株，這些毒株毒力弱、免疫原性好，能突破母源抗體干擾，消費(fèi)種毒各項(xiàng)性能目的領(lǐng)先。三 主要技術(shù)內(nèi)容22、研討建立哺乳動(dòng)物模型及模型目的 1 利用造模毒株建立了近交系BALB/c小鼠和封鎖群ICR小鼠兩個(gè)小鼠模型。確定了近交系BALB/c小鼠和封鎖群ICR小鼠的接種劑量100uL ，可使感染小鼠死亡率到達(dá)73%；經(jīng)過(guò)不同接種途徑的研討，確定鼻腔接種后感染小鼠出現(xiàn)明顯的禽流感臨床疾病過(guò)程。 同時(shí)確定了小鼠模型的

5、臨床病癥、死亡率、病理變化、病毒復(fù)制、免疫反響等方面目的要符合人類感染禽流感疾病的根本特征 2 確定用“環(huán)甲膜穿刺術(shù)經(jīng)氣管接種為猴呼吸道接種方式，建立了恒河猴模型。該方法可以將接種物直接接種到肺內(nèi)，操作技術(shù)簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確，動(dòng)物損傷較小，不需較高防護(hù)設(shè)備。 同時(shí)確定了恒河猴模型的臨床病癥、體溫、呼吸頻率、感染器官、抗體程度、外周血白細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化、外周血T 淋巴細(xì)胞及其亞群的動(dòng)態(tài)變化、免疫因子、病理變化方面的目的，要與人禽流感疾病類似。三 主要技術(shù)內(nèi)容33、研討禽流感免疫機(jī)理小鼠模型免疫機(jī)理1主要表現(xiàn)T細(xì)胞免疫功能損傷，這種損傷與感染病程的開(kāi)展和轉(zhuǎn)歸相一致，細(xì)胞免疫功能目的下降時(shí)期也是病情嚴(yán)重時(shí)

6、期。到達(dá)恢復(fù)期各目的漸恢復(fù)正常。T細(xì)胞免疫功能低下是免疫病理改動(dòng)之一。2細(xì)胞因子表達(dá)失去平衡或過(guò)多的表達(dá)，都能夠?qū)λ拗鳟a(chǎn)生免疫病理?yè)p傷，推測(cè)這是H5N1禽流感引起哺乳動(dòng)物嚴(yán)重疾病的另一重要致病機(jī)制。恒河猴模型免疫機(jī)理主要表現(xiàn)為外周血淋巴細(xì)胞數(shù)和一些T淋巴細(xì)胞亞群在第1天出現(xiàn)一過(guò)性下降，T 淋巴細(xì)胞亞群CD3T淋巴細(xì)胞、CD3CD4+T淋巴細(xì)胞和CD3CD8+T 淋巴細(xì)胞也在感染的第1 天出現(xiàn)一過(guò)性的下降，感染后第7天出現(xiàn)抗體，并逐漸升高，11天后到達(dá)最高，至90天仍維持較高程度。抗H5N1抗體能有效維護(hù)并減輕病毒對(duì)機(jī)體的再次攻擊，抑制病毒增殖，為人禽流感疾病的免疫接種或抗體治療提供了直接根據(jù)。

7、三 主要技術(shù)內(nèi)容44、研制禽流感系列疫苗建立消費(fèi)種子庫(kù)研討質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)將根底毒種經(jīng)SPF雞胚復(fù)壯、增殖與傳代，建立種子批，經(jīng)病毒含量、血凝特性、毒力、平安性、免疫原性、特異性、純粹檢驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)均符合要求。同時(shí)，定期對(duì)不同代次的根底種毒和消費(fèi)用種毒對(duì)免疫原性相關(guān)基因HA和NA進(jìn)展測(cè)序并分析其序列能否變異，以確保種毒不發(fā)生變異。1確定多聯(lián)疫苗的質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)為“抗原濃縮和“乳化技術(shù)；2經(jīng)過(guò)比較Millipore的橫向切流、中空纖維、延續(xù)離心等進(jìn)展?jié)饪s抗原的方法，最終確定了抗原濃縮23倍是免疫維護(hù)效果與單苗一致的關(guān)鍵工藝。3研討不同乳化設(shè)備對(duì)乳化效果的影響，最終確定選擇了進(jìn)口乳化設(shè)備是最正確乳化

8、工藝的關(guān)鍵。按照該工藝消費(fèi)的疫苗，乳化顆粒均勻，穩(wěn)定性好，疫苗中抗原釋放速度合理。該種疫苗在2-8的保管期超越15個(gè)月，疫苗免疫雞后繼續(xù)期超越5個(gè)月。三 主要技術(shù)內(nèi)容5在實(shí)驗(yàn)室研制、中試研制獲得勝利的根底上，向農(nóng)業(yè)部申報(bào)新獸藥證書(shū)和消費(fèi)同意文號(hào)，本工程勝利研制并獲得2個(gè)新獸藥證書(shū)和5個(gè)消費(fèi)批文：H5+H9(N28+SS)、ND+IB+H9La Sota+M41+SS/94)、H5N1Re-1)、 H5N1Re-5)、 H5N1Re-5+ Re-4)、H9SS)中試消費(fèi)及臨床運(yùn)用申報(bào)新獸藥證書(shū)和消費(fèi)批文在實(shí)驗(yàn)室試制獲得勝利的根底上，在消費(fèi)車(chē)間按照制定的延續(xù)消費(fèi)不少于3批，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，申報(bào)獲得臨

9、床批文，對(duì)不同種類普通雞免疫，免疫數(shù)量不少于20000只，經(jīng)過(guò)察看免疫后的臨床病癥和檢測(cè)抗體程度，確定試制產(chǎn)品平安有效，同時(shí)最終確定免疫劑量、保管條件和保管期，建立質(zhì)量規(guī)范。4、研制禽流感系列疫苗三 主要技術(shù)內(nèi)容6 5、研討新工藝、新規(guī)范1采用多級(jí)挑選、保證抗原質(zhì)量： 胚蛋、孵化前期、后期、接種后和收獲前均對(duì)不合格的胚蛋進(jìn)展挑除；2挑選優(yōu)化疫苗配方，處理了免疫后出現(xiàn)疫苗殘留、腫塊、肌肉變綠等不良反響；3對(duì)疫苗乳化顆粒大小進(jìn)展了監(jiān)控，疫苗乳化顆粒大小為0.2-3微米；極大地延伸了疫苗保管期2年，遠(yuǎn)高于國(guó)家規(guī)范1年。提出了原資料的來(lái)源和質(zhì)量要求改良消費(fèi)工藝1經(jīng)過(guò)研討最終確定采用SPF或非免胚蛋培育

10、病毒，能極大地提高病毒滴度并降低了外源病毒的污染；2研討、挑選國(guó)內(nèi)外油佐劑，最終確定采用進(jìn)口佐劑，相對(duì)傳統(tǒng)消費(fèi)工藝疫苗免疫后，HI抗體程度提高1-2滴度。四 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)四 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)11、在國(guó)內(nèi)初次研討哺乳動(dòng)物禽流感免疫機(jī)理，率先建立禽流感感染模型及模型目的。工程查新結(jié)論 除本工程的相關(guān)研討人員發(fā)表的論文外，未見(jiàn)到國(guó)內(nèi)和國(guó)外有與本委托工程“禽流感H5N1病毒初次和再次感染中免疫機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研討中較早且系統(tǒng)測(cè)定禽流感H5Nl病毒的哺乳動(dòng)物BABL/C小鼠模型的CD3+T、CD4+T、CD8+T細(xì)胞免疫和IL-2、IL-4、IL-10、 IL-18、TNF-與IFN-細(xì)胞因子變化的創(chuàng)新點(diǎn)一樣的文獻(xiàn)報(bào)

11、道，創(chuàng)新點(diǎn)一樣的文獻(xiàn)、專利和成果報(bào)道。四 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)22、發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物及單抗物質(zhì)有效防治禽流感。工程查新結(jié)論 除本工程的相關(guān)研討人員發(fā)表的論文外，未見(jiàn)到國(guó)內(nèi)有與本委托工程中直接利用鵝源禽流感H5N1病毒感染哺乳動(dòng)物、在未經(jīng)預(yù)先順應(yīng)的情況下經(jīng)過(guò)鼻腔接種ICR小鼠和BALB/c小鼠或經(jīng)過(guò)“環(huán)甲膜穿刺術(shù)經(jīng)氣管注射感染恒河猴的造模方法、小鼠模型及恒河猴模型、模型目的等創(chuàng)新點(diǎn)一樣的文獻(xiàn)、專利和成果報(bào)道。植物黃酮類化合物的用途表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯微囊顆粒及其制備工藝四 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)33、研制了防控禽流感的系列疫苗禽流感H5+H9二價(jià)滅活疫苗N28+SS株雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感H9亞型三聯(lián)活

12、疫苗La Sota株+M41株+SS/94株四 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)44、研討新工藝，制定新規(guī)范，改善行業(yè)規(guī)范。指標(biāo)原標(biāo)準(zhǔn)新標(biāo)準(zhǔn)新標(biāo)準(zhǔn)效果雞胚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)SPF或非免胚蛋毒價(jià)高、無(wú)外源病毒油佐劑無(wú)標(biāo)準(zhǔn)4項(xiàng) 芳烴指數(shù)、粘度、滅活技術(shù)不適應(yīng)滅活劑濃度、溫度提高抗原免疫原性濃縮技術(shù)無(wú)標(biāo)準(zhǔn)EID501.0,HA2免疫后，抗體水平提高2-3Log2,保護(hù)期6個(gè)月粘度8秒/ml6秒/ml提前7天抗體有效保護(hù)，無(wú)副反應(yīng)五 主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)目的與推行效益1主要技術(shù)目的疫苗指標(biāo)名稱新標(biāo)準(zhǔn)原行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)原材料列入目錄，有技術(shù)指標(biāo)無(wú)抗原滴度HA9.0；EID508.0 HA8.0；EID507.0 疫苗顆粒度0.2-3微米無(wú)內(nèi)毒素提出質(zhì)量

13、標(biāo)準(zhǔn)，完善2005版疫苗規(guī)程黏度6秒8秒保存期2年1年攻毒保護(hù)全部健活不小于4/5免疫后抗體水平HI不小于9HI不小于6小鼠和恒河猴模型感染禽流感病毒后，其病理病癥應(yīng)符合人類感染禽流感疾病的根本特征，勝利建立了禽流感的動(dòng)物模型。建立了抗原濃縮技術(shù)、填補(bǔ)了動(dòng)物疫苗細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)、突破了乳劑疫苗的顆粒度，處理了乳劑疫苗的不穩(wěn)定性和分層，疫苗維護(hù)期延伸至2年，完善了疫苗消費(fèi)新規(guī)范。附：疫苗質(zhì)量新規(guī)范主要經(jīng)濟(jì)目的2021-2021年工程經(jīng)濟(jì)效益年份新增利潤(rùn)新增稅收創(chuàng)收外匯節(jié)支總額20083461.892281.3337.8018672.3220094646.852238.4095.8220400.

14、3120106863.732714.29128.8117749.33累計(jì)14972.477234.03262.4356821.96單位：萬(wàn)元/萬(wàn)美圓五 主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)目的與推行效益2 2003-2021年共銷售禽流感疫苗156.24億羽份，年均增長(zhǎng)率34%；實(shí)現(xiàn)銷售收入11.44億元，年均增長(zhǎng)28%。五 主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)目的與推行效益3主要經(jīng)濟(jì)目的2003-2021年禽流感疫苗銷售量?jī)|羽份2003-2021年禽流感疫苗銷售收入萬(wàn)元08-10年H5亞型禽流感疫苗推行運(yùn)用情況萬(wàn)羽份五 主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)目的與推行效益4越南注冊(cè)證埃及注冊(cè)證08-10年禽流感疫苗出口產(chǎn)品情況萬(wàn)羽份五 主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)目的與推行效益5

15、禽流感疫苗是防控疫情的關(guān)鍵，為養(yǎng)禽業(yè)的消費(fèi)平安保駕護(hù)航。控制疫情發(fā)生，降低動(dòng)物對(duì)人感染的風(fēng)險(xiǎn)。近3年銷售禽流感疫苗47.33億毫升，減少禽類捕殺損失1154億元，節(jié)省治療費(fèi)用5億元 H5：69.95億羽份3斤/只5.5元/斤=1154.18億元 H9：24.7億羽份0.3-0.07元/只=5.68億元保證養(yǎng)禽業(yè)安康開(kāi)展，添加農(nóng)民收入，推進(jìn)“三農(nóng)任務(wù)實(shí)施。社會(huì)效益五 主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)目的與推行效益6六 相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)與獲獎(jiǎng)勵(lì)情況1獲得發(fā)明專利2個(gè)：-植物黃酮類化合物的用途授權(quán)號(hào)：ZL 200410074592.8； -表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯微囊顆粒及其制備工藝授權(quán)號(hào)： ZL 200710165270

16、.8獲得新藥證書(shū)2個(gè)：-禽流感(H5+H9)二價(jià)滅活疫苗 證號(hào)： 2006新獸藥證字33號(hào)； -雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感H9亞型三聯(lián)滅活疫苗La Sota株+M41株+SS/94株 證書(shū)號(hào)： 2021新獸藥證字15號(hào)獲得消費(fèi)批文5個(gè)：-禽流感滅活疫苗H9亞型，SS株 證號(hào):獸藥生字2021190032080； -雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感H9亞型三聯(lián)滅活疫苗La Sota株+M41株+SS/94株 證號(hào):獸藥生字2021190032168 -重組禽流感病毒滅活疫苗H5N1亞型，Re-1株) 證號(hào):獸藥生字2021190022098 -重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗H5N1，Re-5株+Re-4株 證號(hào):農(nóng)醫(yī)藥便函202127號(hào) -禽流感油乳劑滅活疫苗H5亞型，N28株) 證號(hào):獸藥生字2006190022077共發(fā)表論文合計(jì)33篇，其中SCI收錄2篇，他引40次兩位中國(guó)工程院院士評(píng)價(jià)由中國(guó)工程院院士劉秀梵和夏咸柱院士給予以下評(píng)價(jià)：本工程技術(shù)到達(dá)國(guó)內(nèi)領(lǐng)先程度，為禽流感防治研討提供了重要支持，為人類禽流感的防治邁進(jìn)一個(gè)新臺(tái)階，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益良好。六 相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)與獲獎(jiǎng)勵(lì)情況22021-2021年疫苗獲廣東省名牌產(chǎn)品六 相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)與獲獎(jiǎng)勵(lì)情況32021年3月8日在深圳證券買(mǎi)賣(mài)所創(chuàng)業(yè)板上市，股票代碼：3001862004年獲得全國(guó)農(nóng)牧漁業(yè)豐收獎(jiǎng)序號(hào)姓名主