實驗二血乳酸的測定及其應(yīng)用

1、實驗二 血乳酸的測定及其應(yīng)用 通過實驗使學(xué)生掌握體內(nèi)血乳酸的測定方法及掌握血乳酸指標(biāo)在運(yùn)動實踐中的應(yīng)用和意義，為體育教學(xué)和運(yùn)動訓(xùn)練提供指導(dǎo)。鞏固離心機(jī)、可調(diào)微量移液器等儀器的基本操作。掌握實驗對象取材、標(biāo)本處理的方法與生化分析儀的操作方法。 一、 實驗?zāi)康?以NAD+為氫受體，LDH催化乳酸 脫氫生成丙酮酸，使NAD+轉(zhuǎn)化成NADH。其中PMS遞氫使NBT還原為紫色呈色物，呈色物的吸光度在530nm時與乳酸含量成線性關(guān)系。二、實驗原理 三、實驗器材與試劑3 實驗器材與試劑實驗儀器 1. 實驗儀器 采血針、吸血管、移液管、水浴鍋、離心機(jī)、生化分析儀等 2. 試劑盒（南京建成生物工程研究所）四、實

2、驗步驟采血制備上清液：指尖采血40l，全血加入0.24ml的蛋白沉淀劑混勻，3500400轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清待測。運(yùn)動方案：用功率自行車進(jìn)行大強(qiáng)度運(yùn)動訓(xùn)練建立運(yùn)動實驗?zāi)Ｐ停ㄗ孕性O(shè)計）?？瞻坠軜?biāo)準(zhǔn)管測定管蒸餾水（ml）0.023mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液（ml）0.02上清液（ml）0.02酶工作液（ml）111顯色劑（ml）0.20.20.2混勻，37水浴準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘 終止液（ml）222混勻，530nm，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度 標(biāo)準(zhǔn)濃度為3mmol/L，稀釋倍數(shù)為7倍計算公式： 測定 OD值空白管OD值 標(biāo)準(zhǔn)濃度血乳酸（mmol/L） = - (3 mmol/L) 稀釋倍數(shù)(7倍) 標(biāo)準(zhǔn) OD值空白管OD值五、實驗結(jié)果 六、注意事項6 注意事項1、設(shè)計運(yùn)動方案時，應(yīng)注意檢索文獻(xiàn)資料，注意運(yùn)動 時間與強(qiáng)度的關(guān)系，注意研究對象的物種差異。2、嚴(yán)格按照實驗方法與步驟進(jìn)行操作。3、做好實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。1、實驗?zāi)康?、實驗步驟3、實驗結(jié)果：公式計算4、實驗結(jié)果分析：乳酸是糖酵解供能系統(tǒng)的終產(chǎn)物，又是有氧代謝系統(tǒng)的重要氧化物質(zhì)，運(yùn)動時乳酸主要在骨骼肌中生成，可在肝內(nèi)經(jīng)糖異生途徑轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?，在供能體系中占有重要地位，可直接用運(yùn)動后血乳酸的濃度來評定無氧代謝的能力。如400 m跑后，血乳酸低于10 m