血糖測定-鄰甲苯胺課件(PPT 26頁)

1、血液中葡萄糖的測定 鄰甲苯胺法 1PPT學(xué)習(xí)交流第1頁，共26頁。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?(1)了解血糖的概念。(2) 掌握血糖的測定方法鄰甲苯胺法。2PPT學(xué)習(xí)交流第2頁，共26頁。二、 實(shí)驗(yàn)原理血糖及正常血糖水平:血糖：指血液中的葡萄糖.正常血糖濃度： 空腹波動在3.896.7mmol/L（70110mg/dl） 餐后2h內(nèi)應(yīng)7.8mmol/L（140mg/dl）。 3PPT學(xué)習(xí)交流第3頁，共26頁。糖的重要生理功能4PPT學(xué)習(xí)交流第4頁，共26頁。血糖的來源、去路 5PPT學(xué)習(xí)交流第5頁，共26頁。6PPT學(xué)習(xí)交流第6頁，共26頁。 7PPT學(xué)習(xí)交流第7頁，共26頁。高血糖癥與糖尿病、高血糖癥:空

2、腹血漿血糖（FPG）6.7 mmol/L（130mg/dl）生理性：包括飲食性（高糖飲食）或情感性（情緒緊張，腎上腺分泌增加）病理性：見于糖尿?。粌?nèi)分泌腺（甲狀腺、腎上腺皮質(zhì)或髓質(zhì)、胰島細(xì)胞功能亢進(jìn)）；顱內(nèi)壓升高刺激血糖中樞；嘔吐、腹瀉、高熱等引起的脫水。尿糖：若血糖濃度高于腎糖閾值9.0mmol/L，出現(xiàn)尿糖。8PPT學(xué)習(xí)交流第8頁，共26頁。糖尿病（diabetes mellitus,DM） 定義：是一種慢性、復(fù)雜的代謝紊亂性疾病，系胰島素相對或絕對不足，或利用缺陷引起。臨床特征：血糖持續(xù)升高，甚至出現(xiàn)糖尿。長期患有糖尿病常有脂類、蛋白質(zhì)代謝紊亂以及眼、腎的微血管病變及神經(jīng)病變等并發(fā)癥。嚴(yán)

3、重者還可出現(xiàn)水、電解質(zhì)紊亂及酸堿平衡紊亂，表現(xiàn)為高脂血癥，酮癥酸中毒等，重者可致死亡。9PPT學(xué)習(xí)交流第9頁，共26頁。糖尿病的分類IDDM：也稱型糖尿病，好發(fā)于青春期，對胰島素敏感。NIDDM： 型，常見于中年肥胖病人，病變在于靶細(xì)胞膜上的胰島素受體的數(shù)目減少或者缺陷，因而對胰對胰島素不敏感。繼發(fā)性糖尿病：如嗜鉻細(xì)胞瘤、庫欣病等，或其它因素。 10PPT學(xué)習(xí)交流第10頁，共26頁。兩類原發(fā)性糖尿病的特征 特 征 1型 2型基本病因 遺傳+環(huán)境發(fā)病機(jī)制 自身免疫性疾病 生物活性降低占DM% 15% 85%（可發(fā)展為1型）發(fā)病年齡 通常20歲 40歲身體肥胖 罕見 多見血胰島素 （絕對不足）或（

4、相對不足）病情及酮癥 較重、常見 較輕、少見 治療 胰島素敏感 控制飲食、減肥11PPT學(xué)習(xí)交流第11頁，共26頁。無機(jī)化學(xué)法有機(jī)化學(xué)法酶法血糖的測定12PPT學(xué)習(xí)交流第12頁，共26頁。（一）無機(jī)化學(xué)法（氧化還原法） 方法 類型 原 理 用途及備注 班氏法 半定量 G+Cu+Cu2O 尿糖測定（Benedict） 磷鉬酸法 定量 G+Cu+Cu2O 歷史意義（Folin-Wu）分光 Cu+ 磷（砷）鉬酸鹽 操作復(fù)雜、需制濾液、 砷鉬酸法 同上 藍(lán)色絡(luò)合物 特異性差、 新銅試劑法 （660nm） 受還原物質(zhì)影響結(jié)果偏高10% 堿性高鐵 同上 G+Fe(CN)6-3 Fe(CN)6-4 歷史意義

5、氰化物法 黃色 無色 Technicon曾用13PPT學(xué)習(xí)交流第13頁，共26頁。（二）有機(jī)化學(xué)法（縮合法）方法 類型 原 理 用途及備注鄰甲苯胺 定量 G+鄰甲苯胺G基胺 操作簡便、法（630nm） 無需濾液、特異性較高，中小醫(yī)院使用普遍，很少用于自動14PPT學(xué)習(xí)交流第14頁，共26頁。鄰甲苯胺法15PPT學(xué)習(xí)交流第15頁，共26頁。（三）酶 法方法 類型 原 理 用途及備注己糖激酶 定量 G+ATPG-6-P+ADP 血清尿液腦脊液、（HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 公認(rèn)參考方法 動態(tài) GA-6-P + NADPH 操作簡便，特異 終點(diǎn) （340nm） 性和靈敏性均高手工、自

6、動化分析葡萄糖氧 同上 G+O2 GA+H2O2 推薦常規(guī)方法化酶（POD） H2O2 + 染料有色染料 偶聯(lián)法 （還原型） （氧化型） 可制試紙片定量（Trinder） （4-氨基安替比林+酚 半定量篩選試驗(yàn) 紅色琨類化合物505nm）16PPT學(xué)習(xí)交流第16頁，共26頁。方法 類型 原 理 用途及備注葡萄糖氧 定量 G+O2 GA+H2O2 與HK法有最佳化酶氧消 電化學(xué) 用O2電極作極譜測定， 相關(guān)性耗法 動態(tài) 求O2的消耗量 （CX3生化儀） 終點(diǎn)葡萄糖脫 定量 G + NAD+GA + NADH 偶有使用氫酶（GDH）分光 （340nm）可自動化分析法 動態(tài)17PPT學(xué)習(xí)交流第17頁

7、，共26頁。刺血針18PPT學(xué)習(xí)交流第18頁，共26頁。20 : 01 9.10M4.5 mmol血糖儀19PPT學(xué)習(xí)交流第19頁，共26頁。二、實(shí)驗(yàn)原理 葡萄糖在熱的醋酸溶液中，與鄰甲苯胺縮合成雪夫氏堿(Schiff base)。 雪夫氏堿呈蘭綠色，其最高吸收峰為630nm波長，顏色深淺與葡萄糖含量成正比。反應(yīng)式如下:20PPT學(xué)習(xí)交流第20頁，共26頁。三、實(shí)驗(yàn)器材分光光度計(jì)（630nm），比色皿 計(jì)算紙（9 cm9 cm）3. 水浴鍋4. 10ml容量瓶四、實(shí)驗(yàn)試劑 1. 鄰甲苯胺溶液 2.5g硫脲溶于冰醋酸，加入鄰甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸定容至1升2. 葡萄糖

8、標(biāo)準(zhǔn)母液 （10mg/ml，用飽和苯甲酸溶液配制）3. 血清 （100ml）21PPT學(xué)習(xí)交流第21頁，共26頁。血液經(jīng)抗凝處理后的全部血液為全血；離心除去血細(xì)胞后所得到的淡黃色液體為血漿。 如血液不經(jīng)抗凝處理，讓他自行凝固，則在抽血后的一段時間內(nèi)，血液會自動在一系列凝血因子的作用下發(fā)生凝集，血液首先凝固成一個整體，再經(jīng)過一段時間或用離心機(jī)離心，血液中凝固的部分會與一些清澈淡黃色的液體分離開，這些液體稱為血清。血清與血漿從表面上看似乎沒有什么不同，但其內(nèi)在的主要區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原，是未經(jīng)抗凝處理過的血液凝固后得到的。血清多用于血液生化、免疫等方面的測定；血漿多用于凝血等方面的測定；全血

9、則多用在血細(xì)胞、血常規(guī)、血沉等方面的測定。22PPT學(xué)習(xí)交流第22頁，共26頁。五、實(shí)驗(yàn)步驟取5支10ml容量瓶，標(biāo)號，依次加入葡萄糖母液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0ml，用飽和苯甲酸稀釋至10ml，混勻（則上述溶液100ml葡萄糖含量為25，50，100，200，300mg ）；混勻后，置沸水中 15分鐘，立即移入冷水浴中冷卻；以0號管調(diào)零，在630nm 處比色（見下表），以各管的 吸光度為縱坐標(biāo)，相應(yīng)管中葡萄糖含量（mg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)測定管吸光度查找含量。23PPT學(xué)習(xí)交流第23頁，共26頁。24PPT學(xué)習(xí)交流第24頁，共26頁。標(biāo)準(zhǔn)曲線（standard curve）是指通過測定一系列已知組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的某理化性質(zhì)，而得到的性質(zhì)的數(shù)值曲線。 標(biāo)準(zhǔn)曲線是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的物理/化學(xué)屬性跟儀器響應(yīng)之間的函數(shù)關(guān)系。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的目的是推導(dǎo)待測物質(zhì)的理化屬性。 常用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析，通常情況下的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線是一條直線。 25PPT學(xué)習(xí)交流第25頁，共26頁。六、注意事項(xiàng) 1. 本法不需要除去蛋白質(zhì)，鄰甲苯胺試劑只與醛糖顯色，血液中其他還原性物質(zhì)基本上無影響。 2. 鄰甲苯胺試劑與葡萄糖顯色的深淺及其穩(wěn)定性與試劑中鄰甲苯胺濃度、冰醋酸濃度、加熱時間有關(guān)