醫(yī)藥-臨床-護(hù)理血痕檢驗(yàn)ppt課件

1、歡迎進(jìn)入學(xué)習(xí) 課堂第十二章 血痕檢驗(yàn)血液在人體外干燥以后所形成的斑跡叫做血痕。血痕特點(diǎn)： 1 分布廣泛，是最常見(jiàn)的法醫(yī)物證，占總量90%，具有重要的法醫(yī)學(xué)意義 推測(cè)案件的性質(zhì)-自殺、他殺、災(zāi)害 推測(cè)死亡的原因-是否失血引起的死亡 認(rèn)定犯罪嫌疑人-遺傳標(biāo)記的檢測(cè) 2 易受影響，發(fā)生降解、腐敗。 紅細(xì)胞被破壞、血清干燥無(wú)法分離-常規(guī)ABO血型檢測(cè)方法的不適用 大分子的蛋白質(zhì)抗原和DNA被破壞-及時(shí)發(fā)現(xiàn)和提取，及時(shí)檢驗(yàn)。 檢驗(yàn)?zāi)康?1親子鑒定-是通過(guò)對(duì)人類遺傳標(biāo)記的檢測(cè)，根據(jù)遺傳規(guī)律分析，對(duì)有爭(zhēng)議的父母與子女血緣關(guān)系的鑒定 2個(gè)人識(shí)別-確定某個(gè)人是誰(shuí)、某人與另一個(gè)人是否同一人、生物性檢材是否源于某個(gè)

2、體的鑒定 檢驗(yàn)程序 由于生物性檢材的主要特點(diǎn)在于環(huán)境條件的作用使它具有某些不確定性，因此。法醫(yī)物證檢驗(yàn)一般是通過(guò)由簡(jiǎn)單到復(fù)雜、逐步排除、逐步縮小范圍的實(shí)驗(yàn)分析策略實(shí)現(xiàn)個(gè)人識(shí)別的 一、血痕的肉眼檢查 血痕的現(xiàn)場(chǎng)勘查主要是觀察血痕存在的部位，顏色、形狀、范圍和分布特征 部位：室內(nèi)-注意把手、水龍頭、毛巾、磚縫 兇器-刀柄的縫隙 人體-指甲縫、衣服皺褶、袖口、扣孔、鞋邊 顏色：一般呈暗紅色，有光澤。隨后逐漸變成暗色、褐色或灰褐色 根據(jù)血痕的干燥程度和顏色，大致推測(cè)血痕經(jīng)過(guò)的時(shí)間 形狀：滴落高度 0.1m以內(nèi)高度滴落 0.5m 高 度 滴 落 1 m 高 度 滴 落 行走方向 出血部位 范圍： 二、血

3、痕的種類鑒別 【預(yù)備試驗(yàn)】 原理：通過(guò)測(cè)定血痕中的血紅蛋白及其衍生物的過(guò)氧化物酶活性，達(dá)到篩查血痕 特點(diǎn)：靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、快速,特異性差 方法：聯(lián)苯胺試驗(yàn) 【確證試驗(yàn)】 原理：主要根據(jù)檢材中是否含有血紅蛋白或其衍生物確定是否是血痕 特點(diǎn)：特異性好，靈敏度差 三、血痕的種屬鑒定 動(dòng)物血中或某些細(xì)菌含有某些與人類血液遺傳標(biāo)記類似的物質(zhì) ABO 靈長(zhǎng)類動(dòng)物（猩猩、長(zhǎng)臂猿）有A、B類似的血型物質(zhì) 低 等 動(dòng)物（狗、豬、樣、兔）有AB血型物質(zhì) 微 生 物（肺炎雙球菌14型-A、大腸桿菌O86-B） Rh 低等靈長(zhǎng)類動(dòng)物（獼猴、廣鼻猴）有Rh抗原物質(zhì) MN 靈長(zhǎng)類動(dòng)物 DNA 相似的DNA片斷血清學(xué)方

4、法-原抗體體外反應(yīng) 反應(yīng)特點(diǎn)： （1）特異性：抗原分子上的抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)相互適 應(yīng)所決定 （2）可逆性：表面非共價(jià)鍵結(jié)合，在一定條件下可解離，解離后 性質(zhì)不變 （3）比例性：抗原抗體結(jié)合是否出現(xiàn)可見(jiàn)的反應(yīng)現(xiàn)象，與兩者比 例密切相關(guān)影響因素：條件 溫 度：一般在37度-冷鹽水洗滌，56度解離-實(shí)驗(yàn)原理 電解質(zhì)：最適0.85%鹽水，中和分子表面電荷，使由親水疏水 酸堿度：最適Ph68，等電點(diǎn)發(fā)生凝集抗原 質(zhì)的變化：蛋白變性分解（生物因素、化學(xué)因素、物理因素） 量的變化：抗原量的減少抗體 特異性：刺激機(jī)體產(chǎn)生特定的免疫應(yīng)答，并與其產(chǎn)物產(chǎn)生特異結(jié)合 效 價(jià)：出現(xiàn)明顯抗原抗體反應(yīng)的抗血清最高

5、稀釋倍數(shù)的倒數(shù) 【沉淀反應(yīng)】 1 實(shí)驗(yàn)原理 可溶性抗原與相應(yīng)抗體在適當(dāng)電解質(zhì)存在條件下發(fā)生特異性結(jié)合，當(dāng)抗原抗體比例適合時(shí)，可形成肉眼可見(jiàn)的抗原抗體復(fù)合物沉淀。 2 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 抗血清 種類選擇：抗人血清蛋白血清-只有種屬特異性，而無(wú)器官特異性 抗人血紅蛋白血清-既有種屬特異性，也有器官特異性 種屬特異性：指抗體只對(duì)某一物種成分發(fā)生特異反應(yīng)的特性。器官特異性：指抗體只對(duì)某一器官成分發(fā)生特異反應(yīng)的特性。 質(zhì)量鑒定：合格標(biāo)準(zhǔn)：特異性好、效價(jià)高、外觀清澈透明 【免疫層析】免疫膠體金試驗(yàn) 原理：將各種反應(yīng)試劑以條帶狀固定在同一試紙條上，待檢標(biāo)本加在試紙條的一端，通過(guò)毛細(xì)作用在層析條上滲濾、移行并與膜上吸

6、附有抗人血紅蛋白抗體的免疫膠體金顆粒結(jié)合后，樣品中的待測(cè)物同層析材料上針對(duì)待測(cè)物的受體（如抗原或抗體）發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。層析過(guò)程中免疫復(fù)合物被截留、聚集在層析材料的一定區(qū)域（檢測(cè)帶）。 膠體金顆粒由金化合物制備而成，帶負(fù)電荷，顏色呈桔紅色到紫紅色，可作為抗體染料結(jié)合物，將抗體免疫球蛋白吸附在表面，成為免疫膠體金。 【ELISA】-間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 原理：將抗原或抗體包被在固相載體上，使免疫反應(yīng)在固相載體上進(jìn)行。然后借助抗體上標(biāo)記的酶活性，使底物被催化后形成有顏色的產(chǎn)物。 方法： 【DNA檢驗(yàn)】 Alu序列： 特征：重復(fù)單位300bp，其中170bp附近有限制性內(nèi)切酶Alu的識(shí)別序列AGC

7、T 方法：PCR-ASO PCR-SSP 130bp的特異性條帶 28SrRNA： 特征：保守區(qū)中的可變區(qū)進(jìn)化較快，種屬差異大 方法：擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度108、104、101、99bp 細(xì)胞色素C基因序列 特征：存在于線粒體DNA中 方法：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物981bp， 三、血痕的遺傳標(biāo)記檢測(cè) 遺傳標(biāo)記選擇原則： 1 具有良好的遺傳多態(tài)性、 2 穩(wěn)定性好 3 檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)化、簡(jiǎn)便快速、結(jié)果重復(fù)性好 【紅細(xì)胞血型測(cè)定】 ABO血型是法醫(yī)學(xué)物證檢驗(yàn)個(gè)人識(shí)別的傳統(tǒng)檢測(cè)項(xiàng)目，迄今廣泛應(yīng)用于基層法醫(yī)實(shí)踐。 抗原特征：抗原性強(qiáng)-紅細(xì)胞表面分布的抗原決定簇?cái)?shù)目多，少量檢材可以分型 抗原穩(wěn)定-抗原為多糖，對(duì)高溫、腐敗等高度耐受，可保存相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間 分布廣泛-不僅紅細(xì)胞上有，其他人體組織細(xì)胞也ABO抗原 分型難點(diǎn)：干燥使紅細(xì)胞干癟變形、沒(méi)有游離紅細(xì)胞，不能用直接凝集反應(yīng)分型，干燥使血痕中的水分消失，無(wú)法分離血做反實(shí)驗(yàn) 常用方法： 【血清型測(cè)定】HP、GC、ORM、AHSG、TF、PI HP型：采用氯仿提取血紅蛋白，消除血紅蛋白的影響 GC型：4mol/L鹽酸胍處理血痕，可使GC-actin復(fù)合物解離，恢復(fù)正常電泳遷移率 【紅細(xì)胞酶型測(cè)定】 系統(tǒng)選擇：個(gè)人識(shí)別幾率和穩(wěn)定性 【DNA 多態(tài)性分析】 DNA的提取 首選 有 機(jī) 溶 劑-提取的DNA純度較高，