偽狂犬抗體檢測(cè)的四個(gè)誤區(qū)碩騰

1、解讀豬偽狂犬病毒抗體檢測(cè)中的四個(gè)誤區(qū)隨著我國(guó)養(yǎng)殖水平與養(yǎng)殖技術(shù)人員素質(zhì)的不斷提高，在疾病診斷方面，越來(lái)越多的動(dòng) 保企業(yè)、飼料企業(yè)以及養(yǎng)殖公司（戶）開始重視實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)這一診斷工具。很多人對(duì)實(shí)驗(yàn)室 的檢測(cè)結(jié)果都具備一定的分析能力，但是，筆者在服務(wù)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有一些人經(jīng)常會(huì)誤讀檢測(cè) 結(jié)果，誤讀的結(jié)果進(jìn)一步誤導(dǎo)養(yǎng)殖者做出錯(cuò)誤的決定。其中，針對(duì)偽狂犬病毒（PRV）抗體 的解讀就存在幾個(gè)典型的誤區(qū)。在解釋這幾個(gè)誤區(qū)前，筆者簡(jiǎn)單介紹下偽狂犬病毒常見的三種抗體:抗糖蛋白gB抗體、 抗糖蛋白gE抗體以及中和抗體。PRV不同毒株的毒力千差萬(wàn)別。毒力不同致使疾病的嚴(yán)重程度、帶毒時(shí)間長(zhǎng)短、帶毒量 以及組織嗜性不同。PR

2、V受多基因的控制，這些基因單個(gè)或多個(gè)缺失可使PRV毒力減弱。與 毒力相關(guān)的病毒蛋白包括病毒囊膜糖蛋白、病毒編碼的酶以及非必需的衣殼相關(guān)蛋白。根據(jù) 糖蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)液病毒復(fù)制中的不同作用，將其分為非必需糖蛋白（gC、gE、gG、gI、g M以及gN）和必需糖蛋白（gB、gD、gH、gK以及gL）。在病毒毒力方面，糖蛋白主要是介 導(dǎo)PRV黏附至靶細(xì)胞。表1列出了一些糖蛋白的功能。名稱必需幅蛋白粘附史穿透力神經(jīng)擴(kuò)展性是+否+J是+1+礴否+表1 PRV糖蛋白的特性注：“ + ”表示有重要功能，+”表示有非必需功能或調(diào)節(jié)功能。由病毒的糖蛋白gB和gE刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，抗體分別為抗gB抗

3、體 與抗gE抗體（以下分別簡(jiǎn)稱為“gB抗體”、“gE抗體”）。在PRV入侵三叉神經(jīng)和嗅神經(jīng)通路上，糖蛋白gE是一個(gè)關(guān)鍵性的蛋白質(zhì)。PRV gE基因 的缺失可以顯著降低病毒的毒力，使得神經(jīng)元細(xì)胞感染受到限制，所以活疫苗一般都是缺失 gE基因。既然PRV缺失gE基因，那么由此活疫苗復(fù)制出來(lái)的疫苗毒株不含糖蛋白gE，進(jìn)而 在體內(nèi)無(wú)法刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的gE抗體。凡能與病毒結(jié)合，使其失去感染力的抗體稱為中和抗體。病毒可以刺激機(jī)體產(chǎn)生中和 抗體，而中和抗體又與病毒結(jié)合后使病毒失去吸附細(xì)胞的能力，從而喪失感染力；病毒與其 特異性的中和抗體相遇之后發(fā)生的作用，類似于化學(xué)中的相應(yīng)酸堿相遇之后發(fā)生的中和反 應(yīng)，所

4、以稱這種作用為中和作用。而根據(jù)抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學(xué)試驗(yàn)稱 為中和試驗(yàn)。知道了 gB抗體、gE抗體以及中和抗體是什么之后，筆者向讀者提出以下幾個(gè)問(wèn)題：1、豬體內(nèi)的gB抗體一定代表的是疫苗免疫產(chǎn)生的抗體嗎？這個(gè)問(wèn)題的答案是：不一定?；蛘吖P者換個(gè)問(wèn)法：既然疫苗毒株感染豬可以產(chǎn)生gB抗 體，那么野毒毒株感染豬是不是也可以產(chǎn)生gB抗體？答案是肯定的。因?yàn)槿绫?所示囊膜糖蛋白gB是PRV復(fù)制必需的糖蛋白，所以作為活疫苗或者野毒株 都存在囊膜糖蛋白gB，因此不管是活疫苗免疫接種還是野毒感染都會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生gB抗體。 當(dāng)豬群是偽狂犬野毒陽(yáng)性時(shí)，其體內(nèi)的gB抗體很可能是由疫苗免疫產(chǎn)生的gB抗體

5、和野毒感 染產(chǎn)生的gB抗體共同組成。只有在排除野毒感染的情況下，gB抗體才代表的是疫苗免疫產(chǎn) 生的抗體。此時(shí)，請(qǐng)讀者問(wèn)下自己是否曾經(jīng)浪費(fèi)錢對(duì)偽狂犬野毒陽(yáng)性豬群檢測(cè)過(guò)gB抗體呢？如果 非要檢測(cè)，那請(qǐng)先確定豬群或豬只無(wú)偽狂野毒感染，也即先確定樣品的gE抗體檢測(cè)結(jié)果為 陰性時(shí)，才檢測(cè)gB抗體。2、豬體內(nèi)存在gE抗體是否就表示該豬存在野毒感染？很多人在解讀檢測(cè)結(jié)果時(shí)，只要看到gE抗體，就把其看成偽狂犬野毒感染，其實(shí)這種 判讀是片面的。當(dāng)然gE抗體一定是野毒感染產(chǎn)生的抗體（免疫的疫苗是gE基因缺失疫苗）， 這一點(diǎn)沒錯(cuò)。但是我們往往會(huì)忽略一種情況：當(dāng)母豬感染野毒后產(chǎn)生的gE抗體同樣可以通 過(guò)母乳傳遞給哺乳

6、仔豬，而且母源gE抗體比較強(qiáng)，經(jīng)?？梢匝永m(xù)到1014周齡左右。經(jīng)常 會(huì)有人拿到檢測(cè)報(bào)告來(lái)問(wèn)筆者，怎么產(chǎn)房仔豬、保育豬野毒感染這么嚴(yán)重？同樣，請(qǐng)問(wèn)讀者當(dāng)明明知道豬場(chǎng)是偽狂犬野毒陽(yáng)性場(chǎng)時(shí)，是否還在浪費(fèi)錢檢測(cè)產(chǎn)房仔 豬或者保育前期仔豬的gE抗體呢？ 一般來(lái)說(shuō)，此時(shí)檢測(cè)商品豬gE抗體的主要目的是看gE 抗體在商品豬的轉(zhuǎn)陽(yáng)時(shí)間或者育肥豬是否轉(zhuǎn)為陰性。因此，筆者建議一般采取10周齡之后 豬群的血樣進(jìn)行檢測(cè)，如10周齡、14周齡、18周齡、22周齡、26周齡商品豬的血樣。3、豬體內(nèi)的gB抗體水平高低能否完全代表疫苗的保護(hù)效果好壞？在體液免疫方面， 豬只的免疫保護(hù)靠什么抗體？PRV的一系列糖蛋白、非糖蛋白和結(jié)

7、構(gòu)蛋白的抗體都可以抑制病毒在體內(nèi)或體外的復(fù) 制，但是它們起到的作用程度不一。豬病學(xué)第九版中的研究表明針對(duì)gC和gD的補(bǔ)體依賴性病毒中和抗體是最有效的。 因?yàn)?，gC抗體具有抑制病毒在靶細(xì)胞上黏附的作用，而gD抗體具有抑制病毒穿入的作用， 從而阻斷了感染的第一階段；在恢復(fù)期，抑制病毒復(fù)制的主要抗體是針對(duì)gC的抗體。gB抗 體也可以促進(jìn)豬的免疫保護(hù)作用。另外，2013年46月，浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所在研究不同品牌疫苗誘導(dǎo)流 行毒株中和抗體能力的同時(shí)，研究了gB抗體與流行毒中和抗體的關(guān)系。其中就存在誘導(dǎo)gB 抗體最好的試驗(yàn)組誘導(dǎo)的中和抗體很不好的現(xiàn)象。這似乎說(shuō)明gB抗體和目前流行毒株的中 和抗

8、體相關(guān)性不強(qiáng)。而正如前文提到的中和抗體是能夠與病毒結(jié)合，使其失去感染力的抗體。這是最直接 的抑制病毒復(fù)制的重要途徑。當(dāng)然中和抗體不是依靠某個(gè)抗體決定的，它是由多個(gè)抗體共同 作用的結(jié)果（如上文提到的gC抗體和gD抗體等）。衡量中和抗體水平高低的一個(gè)方法即是 中和試驗(yàn)，通過(guò)中和試驗(yàn)可以測(cè)出血清中和病毒的中和效價(jià)，效價(jià)越高說(shuō)明中和病毒的能力 越強(qiáng)。4、只要是進(jìn)口 PRV疫苗，效果都差不多？疫苗效果的好與壞，不是靠感覺而是靠評(píng)估方法來(lái)客觀評(píng)估的，其中常用的一個(gè)評(píng)估 疫苗產(chǎn)生中和抗體效價(jià)的方法是中和試驗(yàn)，通過(guò)中和試驗(yàn)就可以客觀地評(píng)價(jià)疫苗產(chǎn)生的抗體 中和病毒的能力。廣東源豐農(nóng)業(yè)有限公司（國(guó)家生豬核心育種場(chǎng)

9、，偽狂犬病毒陰性場(chǎng)）為了 客觀評(píng)估不同進(jìn)口疫苗產(chǎn)生的抗體對(duì)流行毒株的中和能力而進(jìn)行了中和試驗(yàn)。具體試驗(yàn)如 下：2014年，廣東源豐農(nóng)業(yè)有限公司選擇了 4種著名的、不同品牌的進(jìn)口 PRV疫苗，分別 做了母豬試驗(yàn)和生長(zhǎng)豬試驗(yàn)。該場(chǎng)共約有5000頭基礎(chǔ)母豬，分多條生產(chǎn)線飼養(yǎng)。母豬試驗(yàn)：一條線免疫P苗、一條線免疫F苗、其余免疫M(jìn)苗（M、F為Bartha-K61 毒株，P為Bucharest株）。分組免疫后6個(gè)月，從三組分別隨機(jī)抽取10頭、10頭、14頭 母豬的血清用PRV流行毒株（HuBei株）做中和試驗(yàn)，結(jié)果見表2。為了更直觀地表示抗體 水平的高低，本試驗(yàn)用能夠中和病毒的最高血清稀釋倍數(shù)來(lái)表示樣品的

10、中和抗體水平，例如， 血清抗體值為“8”，則表示該血清的中和抗體效價(jià)為1 ： 8。貿(mào)苗免疫組抗體值數(shù)量P苗免疫組杭休值數(shù)量F苗免疫組抗體值數(shù)量3216412562161&3165S3645322444116321822-4泌8T6倍，掀32-64 倍，幾何平均值，6M倍-皿 8-16 倍-M0% 3A64倍二1的 幾何平均值；138-16 倍二 34 性 32-64 倍SC% 128-256 倍二 14.3*幾何平均值】59表2 M、P、F苗試驗(yàn)組母豬免疫疫苗6個(gè)月后的中和試驗(yàn)結(jié)果生長(zhǎng)豬試驗(yàn)：試驗(yàn)分為4組，每組10頭豬，分別免疫M(jìn)、P、B、F等不同品牌的PRV 疫苗（M、P、F同母豬試驗(yàn)疫苗，

11、B為另一個(gè)Bartha-K61毒株進(jìn)口疫苗）；免疫程序?yàn)?1 周齡和15周齡兩次免疫，15周齡免疫后收集血清用PRV流行毒株（HuBei株）做血清中和 試驗(yàn)，結(jié)果見表3。I苗免痍蛆P苗免忍aB苗免翩V苗免疫ifl抗體值敵量抗休值教筮抗休他 裁量抗休值 數(shù)量81421618141e8B14221212S0707023理有中利抗休2部有中和抗體3兇有中和抗休80%有申和抗休幾何平均1-52幾何平均尚1.32幾何平均值；1- 74幾何平Kfi： 2. 30表3各試驗(yàn)組生長(zhǎng)豬免疫2次疫苗后5周的中和試驗(yàn)結(jié)果由表2、表3可知，無(wú)論是在母豬試驗(yàn)還是在生長(zhǎng)豬試驗(yàn)中，不同品牌的PRV疫苗（M、 B、F疫苗同為Bartha-K61毒株）免疫誘導(dǎo)豬只產(chǎn)生的流行毒中和抗體水平差異顯著?？傊?，首先要知道gB抗體、gE抗體以及中和抗體是怎么來(lái)的；其次，我們也要清楚只 有在排除偽狂野毒感染的情況下檢測(cè)gB抗體才具有指示疫苗抗體產(chǎn)生的意義；再次，我們 要知道哺乳仔豬也可以從母豬獲得母源gE抗體，