植物生理學(xué)大實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一 植物激素對(duì)植物形態(tài)建成的作用

1、生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)?zāi)K二植物生理學(xué)大實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)一 植物激素對(duì)植物形態(tài)建成的作用目的與要求 了解不同比例的生長(zhǎng)素和激動(dòng)素對(duì)煙草髓愈傷組織形成和分化的影響，并學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)的技術(shù)。原理 植物各器官的分化，首先是細(xì)胞的極化過程。植物體的每一個(gè)細(xì)胞都由受精卵分裂而來，即使高度分化的細(xì)胞，也保留著遺傳上的全能性，即在每一個(gè)細(xì)胞中，包含著產(chǎn)生一個(gè)完整有機(jī)體的全部基因。 在煙草髓組織培養(yǎng)中，激動(dòng)素和生長(zhǎng)素在愈傷組織的形成和分化中，有相互作用。產(chǎn)生大量的愈傷組織，需要有生長(zhǎng)素和激動(dòng)素。在一定濃度范圍內(nèi)，生長(zhǎng)素/激動(dòng)素的比例高時(shí)，產(chǎn)生根；生長(zhǎng)素/激動(dòng)素比例低時(shí)，產(chǎn)生芽；在二者的比例子居間時(shí)，愈傷組織占優(yōu)勢(shì)。2 材

2、料與設(shè)備一、材料 40-60厘米高、生長(zhǎng)健壯的煙草植株二株。二、設(shè)備 高壓滅菌鍋 培養(yǎng)室 超凈工作臺(tái) 三角瓶（100毫升） 培養(yǎng)皿 手術(shù)刀 封口膜 長(zhǎng)柄鑷子 手術(shù)剪 消毒棉3試 劑各種母液（1）1毫克/毫升的生長(zhǎng)素溶液（2）1毫克/毫升的激動(dòng)素溶液（3）1毫克/毫升維生素B1（鹽酸硫胺素）水溶液（4）20毫克/毫升的肌醇溶液（5）稱取下列試劑，溶于水后定容到250毫升。 H3BO3 0.31克 KH2PO4 8.5克 KI 0.0415克 Na2MoO42H2O 0.0125克 CoCl 26H2O 0.00125克（6）稱取下列試劑，溶于水后定容到250毫升。 MgSO47H2O18.5克

3、MnSO4H2O0.845克 ZnSO47H2O0.43克 CuSO45H2O 0.00125克（7）稱取下列試劑，溶于水后定容到500毫升。 Na2EDTA 1.86克 FeSO47H2O1.39克4愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基（RM-1965培養(yǎng)基） 每一升培養(yǎng)基含有： 母液（5） 5毫升 鹽酸硫胺素 0.4毫升 母液（6） 5毫升 生長(zhǎng)素 2毫升 母液（7） 10毫升 激動(dòng)素 0.30毫升 NH4NO3 1.65克 肌醇 5毫升 KNO3 1.9克 蔗糖 30克 CaCl2 0.33克 瓊脂 10克 用1M的氫氧化鈉調(diào)pH至5.65.8。每瓶裝50毫升，于高壓滅菌 鍋中滅菌121,15-20分鐘，

4、冷卻后備用。5愈傷組織分化培養(yǎng)基 除生長(zhǎng)素和激動(dòng)素按下面的濃度加入外，培養(yǎng)基的其他成分和濃度，同RM-1965培養(yǎng)基。培養(yǎng)基分成六個(gè)處理，每個(gè)處理有五個(gè)重復(fù)。 生長(zhǎng)素濃度（毫克/升） 激動(dòng)素濃度（毫克/升） （1） 0 0 （2） 0 0.2 （3） 2 0 （4） 2 0.2 （5） 2 0.02 （6） 0.02 2 調(diào)整pH、分裝及滅菌的步驟同誘導(dǎo)培養(yǎng)基。6操作程序一、愈傷組織的誘導(dǎo)1煙草莖段的滅菌 取約2尺高的煙草植株地上部分，去葉，去頂，刷洗干凈。切成7厘米長(zhǎng)的小段，分別用70%的乙醇和5%次氯酸鈉溶液浸泡消毒，置于無菌培養(yǎng)皿中備用。2煙草髓的制備 在無菌超凈工作臺(tái)中，用鑷子夾住煙草

5、莖切段的頂端，另取無菌手術(shù)刀將切段四周的皮層組織切掉，直至露出煙草髓組織，然后用手術(shù)刀將髓的兩端各切出0.5厘米去掉，再將中間一段切成2毫米左右厚的小圓片，切割時(shí)要注意煙草形態(tài)學(xué)的上下方向。3接種 用長(zhǎng)柄鑷子向裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的三角瓶中，接入三個(gè)髓片，使其形態(tài)學(xué)的上端朝下緊貼在培養(yǎng)基上，封好封口膜。4培養(yǎng) 將接種完畢的材料置于培養(yǎng)室中，28下培養(yǎng)。一周后，可明顯地看到圓片的周圍和上表面漸漸地形成愈傷組織。7操作程序二、器官的再分化 在無菌條件下，用長(zhǎng)柄鑷子將誘導(dǎo)出的愈傷組織取出，用手術(shù)刀小心地切成約222毫米3的小塊，并分別轉(zhuǎn)入RM分化培養(yǎng)基中，置于28培養(yǎng)室中自然光照下培養(yǎng)。每周觀察培養(yǎng)物，記錄其生長(zhǎng)及變化情況。五周后總結(jié)觀察結(jié)果。8結(jié)果記錄1愈傷組織出現(xiàn)的時(shí)間。2根和芽出現(xiàn)的時(shí)間。3統(tǒng)計(jì)根、芽及全苗數(shù)。處理號(hào)根數(shù)芽數(shù)全苗數(shù)（1）（2）（3）（4）（5