醫(yī)用化學(xué)實驗課件

1、醫(yī) 用 化 學(xué) 實 驗生物化學(xué)教研室張麗娜實驗課注意事項： 不遲到，不早退，做好課前預(yù)習(xí)工作 穿好白大褂 使用煤氣時注意安全 試劑用后及時歸位保持嚴(yán)肅認(rèn)真的實驗態(tài)度 及時記錄實驗結(jié)果，按時完成實驗報告實驗報告格式：1、實驗?zāi)康?、實驗原理3、實驗操作4、實驗結(jié)果（真實、客觀）5、討論（實驗報告的核心）6、意見與建議（可選擇）實驗一 醫(yī)化實驗基本操作玻璃儀器的洗滌吸量管的使用 注意：右手食指按住吸量管口溶液的混勻 指彈混勻、攪拌混勻、倒轉(zhuǎn)混勻、旋渦混合器混勻等實驗二 電離平衡與緩沖溶液實驗?zāi)康?1、掌握同離子效應(yīng)的原理 2、學(xué)習(xí)通過韓-哈方程式配制緩沖溶液 3、觀察稀釋對緩沖溶液pH值的影響 4

2、、學(xué)習(xí)吸量管及pH計的使用 1、同離子效應(yīng)實驗原理HAc H+ + Ac-NaAc Na+ + Ac-例： 同離子效應(yīng)使得HAc的電離度降低，溶液的pH升高 酸堿指示劑：紅橙黃紅淡紅黃無色綠藍(lán)3.14.481067.6甲基橙酚酞溴麝香草酚藍(lán)pH = pKa + lg鹽酸韓-哈方程式也可表示為：（鹽的摩爾數(shù)） （酸的摩爾數(shù)）n鹽/V溶液n酸/V溶液當(dāng)酸與鹽混合前的濃度相等時：= pKa + lg V鹽 V酸pH= pKa + lg n鹽 n酸pH2、緩沖溶液 緩沖溶液加水稀釋時，鹽濃度與酸濃度作相同 比例稀釋，因此，緩沖溶液的pH幾乎不因稀釋 而改變。 緩沖溶液的緩沖能力有一定限度，超過該限度

3、緩沖溶液的pH也會發(fā)生較大改變實驗操作1、同離子效應(yīng)（1）各1支 + NH3 . H2O 2ml+ 1滴酚酞 1滴NH4Cl 1滴H2O搖勻觀察結(jié)果1ml=15滴（2） 各1支 + 醋酸 2ml+ 1滴甲基橙 1滴NaAc 1滴H2O搖勻觀察結(jié)果2、緩沖溶液（1）0.1mol/L KH2PO40.1mol/L Na2HPO4 8 ml 2 ml 5 ml 5 ml 2 ml 8 ml精密pH試紙檢測pH計檢測韓-哈方程式計算測完pH值后2管保留用吸量管進(jìn)行操作大試管3支另取2支小試管，以上面試管2里的緩沖液進(jìn)行實驗2號緩沖液2 ml1 ml蒸餾水0 ml1 ml溴麝香草酚 藍(lán)各1滴（2）（3）

4、另取3支小試管，以上面試管2里的緩沖液進(jìn)行實驗2號緩沖液2 ml2 ml2 ml溴麝香草酚藍(lán)各2滴，混勻NaOH 3滴，搖勻，觀察結(jié)果繼續(xù)滴加，記錄變色時所加NaOH滴數(shù)HCl 3滴，搖勻，觀察結(jié)果繼續(xù)滴加，記錄變色時所加HCl滴數(shù)2號管緩沖液測好pH后切勿立即倒去吸量管的使用pH計的使用 注意事項：1、看清刻度，選擇適當(dāng)容量的吸量管2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管 口，穩(wěn)住液面3、拿吸量管的時候，刻度面向自己4、讀刻度時，眼睛與刻度線同一水平，以 下凹面為準(zhǔn)5、吸取另外一種試劑時，要潤洗 吸量管的使用實驗三 功能基反應(yīng)實驗?zāi)康?、掌握幾功能基的主要化學(xué)性質(zhì)2、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇

5、互變異構(gòu)現(xiàn)象1、雙鍵與鹵素的加成反應(yīng)實驗原理C=C + Br2 -CH-CH- BrBr 紅棕色的溴褪色，可用于鑒定有機(jī)物中 是否存在不飽和鍵2、酚性羥基的反應(yīng)（1）苯酚的弱酸性（2）酚性羥基與FeCl3的顯色反應(yīng)苯酚FeCl3紫色絡(luò)合物 可用于鑒別酚和醇3、醛基的反應(yīng) O | R-C-H + 2Cu（OH）2 O | R-C-OH + Cu2O + 2H2O磚紅色沉淀（班氏試劑） 酮無此反應(yīng)，故可用于鑒別醛和酮4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構(gòu)現(xiàn)象 使三氯化鐵溶液呈紫紅色反應(yīng)具有烯醇式結(jié)構(gòu) 與苯肼反應(yīng)生成苯腙，顏色？ 使紅棕色溴的四氯化碳溶液褪色具有雙鍵結(jié)構(gòu) O O | |CH3-C-CH2

6、- C-O-C2H5說明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式兩種異構(gòu)體的混合物，兩者之間相互轉(zhuǎn)變，處于動態(tài)平衡。 O O | |CH3-C-CH2-C-O-C2H5 OH O | |CH3-C = CH-C-O-C2H5室溫時 酮型（93%） 烯醇型（7%） 凡兩種或兩種以上的異構(gòu)體能互相轉(zhuǎn)變，并以 動態(tài)平衡存在的現(xiàn)象互變異構(gòu)現(xiàn)象5、尿素的化學(xué)性質(zhì)OH-紫紅色物質(zhì)縮二脲反應(yīng)：縮二脲 + CuSO4（少量）1、烯基的反應(yīng)實驗操作+ 硬脂酸10滴+ 油酸10滴+ 植物油10滴逐滴加入5%Br2的CCl4溶液，不斷振蕩試管，記錄結(jié)果 不是溴水2、酚性羥基的反應(yīng)（1）+ 液體苯酚2滴 水5滴，搖勻+ 10%Na

7、OH 2 滴 搖勻，觀察（2）+ 0.5%苯酚溶液10滴+ 0.5%水楊酸溶液10滴+ 苯甲醇10滴各加入1%FeCl31滴，觀察結(jié)果3、醛基反應(yīng)（大試管6支）試劑（滴） 1 2 3 4 5 640%乙醛液 5 10%NaOH 5 丙酮液 4 1%葡萄糖 4 1%果糖 4 1%蔗糖 4 42mol/L鹽酸 10班氏試劑 10 10 10 10 10 1-5管于沸水中加熱3分鐘，觀察結(jié)果；6號管加蒸餾水10滴，于沸水中加熱10分鐘，不時振蕩，再加10%NaOH10滴，班氏試劑10滴混勻，于沸水中再加熱3分鐘，與5號管比較，記錄結(jié)果4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互變異構(gòu)現(xiàn)象（1）+ 10%乙酰乙酸 乙

8、酯2滴+ 2，4-二硝基苯肼10 滴，振蕩，觀察結(jié) 果，寫出反應(yīng)式（2）+ 10%乙酰乙酸 乙酯10滴+ 1%FeCl31滴，觀察結(jié)果再加溴水1滴，觀察變化，并加以解釋5、尿素的化學(xué)性質(zhì)+ 尿素1匙小火加熱，待尿素熔化紅色石蕊試紙放置管口，觀察變化繼續(xù)加熱待管內(nèi)物質(zhì)凝固后冷卻試管，加水2ml玻棒攪動促溶，吸取上層溶液于另一試管中再加入10%NaOH 、1%CuSO4各1滴，觀察變化注意事項1、注意區(qū)分以下試劑： 液體苯酚5%苯酚溶液 5%Br2的CCl4溶液溴水2 、液體苯酚預(yù)先加熱，盛放其的試管也要預(yù)熱3、縮二脲反應(yīng)中試管冷卻后再加水，并用玻棒 輕輕攪動 4、揮發(fā)性試劑全部擺放在邊臺上，用后

9、及時歸位 實驗三 動物組織中核酸的提取與鑒定實驗?zāi)康模?、掌握組織中的核酸的提取與鑒定2、掌握離心機(jī)的使用3、熟悉加樣器的使用實驗原理 1、提取原理： a: DNA和RNA大部分與Pro結(jié)合成核蛋白。 b: 核蛋白可被三氯醋酸沉淀下來。 c: 10%NaCl溶液從沉淀中提取核酸，生成核酸 的鈉鹽d: 乙醇把核酸鈉沉淀下來 核苷（B-R）磷酸（P）2、鑒定原理核酸核苷酸 基堿（B）戊糖（R）核酸的基本組成單位嘌呤（A G）嘧啶核糖（C U）脫氧核糖（C T）a:磷酸+鉬酸銨 磷鉬酸 鉬藍(lán)b:嘌呤+AgNO3 絮狀嘌呤銀c:核糖 糠醛 綠色化合物d: 脫氧核糖 -羥基-酮基戊醛 藍(lán)色化合物氨基萘酚

10、磺酸H+3，5-二羥基甲苯H+二苯銨操作步驟1、提取步驟制備肝組織勻漿： 脫臼處死或斷頭處死 剖腹取全部肝組織 生理鹽水沖洗血污，吸干凈 三氯醋酸2ml 分散勻漿機(jī)勻漿分離提取于全部勻漿內(nèi)加入生理鹽水2ml，玻棒混勻靜置3min， 3000rpm 3min, 棄上清沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒攪拌取出冷卻，3000rpm 3min取上清，逐滴95%酒精2管，混勻靜置5min，3000rpm 5min棄上清，得白色核酸鈉核酸的水解： 短試管內(nèi)加入5%H2SO4 3.5ml 玻棒攪勻 沸水浴中10min成分的鑒定管號水解液5%H2SO4濃氨水5%AgNO3測定管 20d 2

11、3d 10d對照管 20d23d 10d沸水浴35min，觀察結(jié)果，靜置15min,觀察結(jié)果嘌呤的鑒定磷酸的鑒定管號水解液5%H2SO4鉬酸銨試劑氨基萘酚磺酸測定管 10d 5d 20d對照管 10d5d 20d放置3min，沸水浴35min，觀察顏色差異核糖的鑒定管號水解液5%H2SO43，5-二羥基甲苯測定管 4d 6d對照管 4d6d沸水浴510min，觀察顏色差異脫氧核糖的鑒定管號水解液5%H2SO4二苯胺試劑測定管 20d 30d對照管 20d30d沸水浴510min，觀察顏色差異注意事項1、做鑒定部分時盡量用大試管，所有標(biāo) 號朝試管上方2、玻璃棒攪拌要輕柔3、膠頭滴管使用要注意順序

12、，避免污染 移液槍的使用1、看清最大刻度，選擇適當(dāng)容量的移液槍（最大刻度和讀數(shù)的關(guān)系）2、先調(diào)好刻度3、打至第一檔吸入試劑4、打出試劑時要按至第二檔5、使用加樣器時要慢、穩(wěn)，不要有氣泡出 現(xiàn)離心機(jī)的使用 臺秤平衡 對稱插入 定時定速實驗四 蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)及等電點的測定實驗?zāi)康模?、掌握雙縮脲法、茚三酮法、Folin法定性檢查蛋白質(zhì)的方法 2、驗證幾種蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的現(xiàn)象及酸堿性環(huán)境的影響 3、了解蛋白質(zhì)等電點測定 一、蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)實驗原理： 雙縮脲反應(yīng)：含有CONH 、 CSNH、CH2NH等基團(tuán)的化合物在濃堿液中與硫酸銅生成紫紅色復(fù)合物。茚三酮反應(yīng)：含有自由氨基的化合物與茚三酮共熱，生成紫色化合物。Folin法： 酚性羥基在堿性環(huán)境中，與酚試劑生成鉬藍(lán)操作步驟（1）+ 1：10雞蛋白2滴1%CuSO4 1滴 + 10%NaOH 5 滴 混勻，觀察顏色（2）+ 1：10雞蛋白4滴 + 蒸餾水10滴+0.1%茚三酮乙醇8滴，混勻，觀察顏色 蒸餾水6滴+ 10%NaOH3 滴，酚試劑1滴，混勻，觀察顏色+ 1：10雞蛋白2滴+ 0.25%白明膠 0.25%酚溶液 0.25%酪氨酸二、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng) 實驗原理：1、鹽析：破壞水化膜，中和電荷常用中性鹽：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl2、重金