中藥藥理學(xué)-第五章-中藥藥理的研究方法課件

1、 第五章 中藥藥理的研究方法 第一節(jié) 中藥藥理學(xué)研究的思路與方法一、中藥藥理學(xué)研究的基本知識1、研究用樣品 復(fù)方、單味藥、有效部位群及有效單體。藥理實驗前必須注意中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化。2、實驗用動物 選擇合適的種類及品系的動物是正確評價藥物作用的基礎(chǔ)。選用與人體的結(jié)構(gòu)、機能、代謝、疾病特點相近似的實驗動物。小鼠和大鼠常用動物，豚鼠過敏試驗，家兔熱源檢查和解熱試驗，貓、狗、大鼠血壓試驗，鴿子、狗、貓催吐試驗。 3、劑量和分組的設(shè)定 主要藥效研究的各種試驗至少設(shè)3個劑量組。能夠測出的受試藥物1/10-1/5；制劑毒性小，測不出 -人用劑量折算動物用量。粗略的等效倍數(shù)為1（人）、3-4（狗和猴），5-6（

2、貓、兔），6-8（大鼠、豚鼠），10-12（小鼠）隨機、對照和重復(fù)是科學(xué)實驗基本原則。主要藥效試驗常需設(shè)下列對照組： （1）正常對照組，又稱”空白對照組“或”陰性對照組“，即除不用被研究的藥物外，對照組的動物要經(jīng)受同樣的處理，如給生理鹽水，當(dāng)藥物中若含有特殊溶媒或基質(zhì)者，對照組應(yīng)接受相同容量的溶媒或基質(zhì)。 （2）陽性對照組，是最常用的一種對照方法，也稱有效對照或積極對照。以現(xiàn)行最有效或臨床上最常用的藥物或治療方法為對照。 陽性對照藥設(shè)置目的是檢查試驗體系是否可靠和比較所研究藥物的作用特點。陽性藥應(yīng)是國家藥典或部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)生產(chǎn)的有批號的藥物。功效主治、劑型、給藥途徑應(yīng)與受試藥相似，兩者才有

3、可比性。（3）模型對照組除不用藥以外，其他處理與給藥組相同。 一個藥理實驗需設(shè)56個實驗組，1014只動物（大鼠或小鼠）,體重、性別要有隨機性，需要分批進(jìn)行實驗時要注意各組動物之間的平行操作。主要藥效實驗需要重復(fù)。如抗腫瘤藥物，其驅(qū)邪作用要求重復(fù)三批，降血糖實驗也要求重復(fù)。4、藥效學(xué)指標(biāo)的選擇原則：（1）針對性強，要緊密結(jié)合主要病因病機，能夠反映臨床治療意義；（2）敏感，對于病情及證候的任何變化以及藥物的防治作用，能敏感、準(zhǔn)確反映出來；（3）穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，結(jié)果才可靠。二、中藥藥理學(xué)研究思路與方法學(xué)進(jìn)展（一）研究思路 1、提高中藥藥理基礎(chǔ)研究水平 以療效為核心，從中藥分子與生命分子的相互作用找

4、切入點，以分子群體的變化來揭示中藥分子調(diào)解規(guī)律，大力開展中藥分子藥理學(xué)研究。2、深入進(jìn)行中藥藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機制相關(guān)性研究途徑之一：研究單體有效成分，利用各種現(xiàn)代篩選模型和篩選技術(shù)，以其中一種或幾種有效成分作為定性、定量指標(biāo)進(jìn)行研究，明確其與藥效“量效相關(guān)”的有效成分。石菖蒲中樞神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障欖香素、細(xì)辛醚 途徑之二：以單位中藥或小復(fù)方中藥為研究對象，采用各種提取分離及分析技術(shù)，以選定有效成分為指標(biāo)，進(jìn)行研究。大承氣湯游離和結(jié)合蒽醌傳統(tǒng)煎法。 中藥中多種藥用部位或一種有效部位中的多種藥用成分，同樣可以利用各種現(xiàn)代篩選模型和技術(shù)，以一種藥理作用為主要因素，研究部位間、成分間或部位與成分

5、之間的相互促進(jìn)、相互抑制的協(xié)同關(guān)系，初步闡明現(xiàn)代中藥不同于西藥而發(fā)揮綜合治療作用的機制。 3、加強與中藥功效相關(guān)的系統(tǒng)藥理作用研究 綜合運用整體動物疾病模型、病證結(jié)合模型以及利用多種生物學(xué)等方法建立的細(xì)胞模型進(jìn)行中藥功效相關(guān)的系統(tǒng)藥理作用研究，對全面揭示中藥作用的實質(zhì)具有重要意義。（二）中藥藥理研究方法學(xué)進(jìn)展 1、中藥血清藥理學(xué)、腦脊液藥理學(xué) 中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口給動物灌服一定時間后采集動物血清，分離血液，用含有藥物成分的血清進(jìn)行體外試驗的一種方法。2、分子生物學(xué)與生物芯片技術(shù) 基因芯片技術(shù)（核酸雜交原理）：待分析樣品通過與芯片中已知堿基序列的片段互補雜交，從而確定樣品中的核算序列和性質(zhì)，對基因

6、表達(dá)的量及其特性進(jìn)行分析。可將中藥作用的所有靶基因全部顯示出來，通過基因表達(dá)譜和表達(dá)產(chǎn)物的差比性分析，揭示中藥復(fù)方的作用靶點、作用環(huán)節(jié)和作用過程。 3、現(xiàn)代智能色譜、波譜技術(shù)和中藥藥理研究結(jié)合 中藥化學(xué)、化學(xué)分析及中藥藥理研究結(jié)合。 高效液相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜-電噴霧離子化質(zhì)譜法、高效液相色譜-核磁共振法、高效毛細(xì)血管電泳-質(zhì)譜法及分子生物色譜技術(shù)，提高中藥復(fù)方活性物質(zhì)的篩選率。 第二節(jié) 中藥復(fù)方藥理學(xué)研究一、中藥復(fù)方配伍研究方法（一） 拆方研究有助于中藥復(fù)方配伍合理性的闡明 1、單味研究法 十全大補湯提高免疫力，拆方實驗地黃 2、藥對研究法 六味地黃湯（五個藥對）：一補一瀉（地黃+

7、澤瀉、山茱萸+丹皮、山藥+茯苓）；三補三瀉（地黃+山茱萸+山藥、澤瀉+丹皮+茯苓）。 3、藥物組間關(guān)系研究法 四物湯補血，四君子湯補氣，二者合用，四君子湯抗貧血作用增強。補氣藥可增強補血藥的補血效能，中醫(yī)“補氣生血”理論。 4、撤藥分析法 黃芩湯（黃芩、芍藥、甘草、大棗） 5、聚類分析法 以性味歸經(jīng)為特征，數(shù)學(xué)模型，統(tǒng)計分析。半夏瀉心湯。 6、正交設(shè)計法 正交設(shè)計表將一個方劑中的藥物（因素）和劑量（水平）按一定規(guī)律設(shè)置。 7、均勻設(shè)計法 均勻設(shè)計表。 （二）與中醫(yī)證候研究結(jié)合探索中藥復(fù)方藥效的優(yōu)勢 四君子湯脾虛型便秘及腹瀉（臨床） 胃腸運動雙向調(diào)節(jié)作用（三）與中藥復(fù)方組合化學(xué)結(jié)合開展藥理學(xué)研究

8、 以中藥復(fù)方為天然組合化學(xué)庫，在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下確定能反映該方劑主治病證的藥理學(xué)指標(biāo)，通過組分或單體成分的組合篩選，找出其活性最強的組分構(gòu)件，確定方劑“有用分子的構(gòu)成”。 二、復(fù)方藥效系統(tǒng)評價研究1、與臨床研究相結(jié)合進(jìn)行復(fù)方整體藥效的評價 從整體功效入手，與臨床研究相結(jié)合，探討中藥復(fù)方多途徑、多靶點的作用環(huán)節(jié)。2、合理利用動物模型，客觀揭示中藥復(fù)方的作用機制 中醫(yī)的“證”涉及多系統(tǒng)、多臟器、多種組織的病變，中藥復(fù)方是對證治療，和化學(xué)藥物治病原理不同。但目前大多借鑒西醫(yī)學(xué)現(xiàn)有的動物模型，其特色及優(yōu)勢在動物實驗中難以得到體現(xiàn)和發(fā)揮。 證的動物模型的缺陷動物模型少研究難度很大認(rèn)同度差 人和動物在生理生化機能等方面盡管有許多相同之處，在形體、語言、反應(yīng)等有很大差別。甲狀腺激素處理-陰虛模型動物（體重減輕、體溫升高、心率加快，飲水與耗氧增加）；皮下注射腎上腺素合并冰水浸泡-急性血瘀（全血黏度和