剖析中藥的檢查知識

1、剖析中藥的檢查知識中藥的檢查藥材和飲片通常都檢查什么？中藥制劑通常都檢查什么？中藥的檢查與化藥的檢查有何區(qū)別？中藥材及其炮制品的檢查普遍檢查雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分一些檢查重金屬、砷鹽、干燥失重、熾灼殘渣、溶劑殘留、樹脂殘留農(nóng)藥殘留、黃曲霉素、二氧化硫、有害元素特殊檢查：西洋參-人參、大黃-土大黃苷、烏頭-雙酯型生物堿比較中藥的檢查與化藥的檢查有何異同？雜質(zhì)限量計算一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查重金屬砷鹽鐵鹽有害元素干燥失重水分熾灼殘渣灰分農(nóng)藥殘留黃曲霉素二氧化硫雜質(zhì)的來源一是由中藥材原料中帶入； 二是在生產(chǎn)制備過程中引入； 三是貯存過程中受外界條件的影響，制 劑的理化性質(zhì)改變而產(chǎn)生。 一般

2、雜質(zhì)檢查方法雜質(zhì)檢查法水分灰分測定法鐵鹽干燥失重?zé)胱茪堅亟饘偕辂}樹脂殘留農(nóng)藥殘留黃曲霉素S02有害元素雜質(zhì)檢查法藥材中混存的雜質(zhì)系指下列各類物質(zhì)： 一、來源與規(guī)定相同，但其性狀或部位與規(guī)定不符； 二、來源與規(guī)定不同的物質(zhì)； 三、無機(jī)雜質(zhì)，如砂石、泥塊、塵土等。 雜質(zhì)檢查法檢查方法1. 取規(guī)定量的供試品，攤開，用肉眼或放大鏡（510倍）觀察，將雜質(zhì)揀出；如其中有可以篩分的雜質(zhì)，則通過適當(dāng)?shù)暮Y，將雜質(zhì)分出。 2. 將各類雜質(zhì)分別稱重，計算其在供試品中的含量（%）。 雜質(zhì)檢查法【注意】1.藥材中混存的雜質(zhì)如與正品相似，難以從外觀鑒別時，可稱取適量，進(jìn)行顯微、化學(xué)或物理鑒別試驗，證明其為雜質(zhì)后，計入

3、雜質(zhì)重量中。 2.個體大的藥材，必要時可破開，檢查有無蟲蛀、霉?fàn)€或變質(zhì)情況。 3.雜質(zhì)檢查所用的供試品量，除另有規(guī)定外，按藥材取樣法稱取。水分測定法 第一法(烘干法) 適用于不含或少含揮發(fā)性成分的藥品。 第二法(甲苯法) 適用于含揮發(fā)性成分的藥品。 第三法(減壓干燥法) 適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。 第四法（氣相色譜法） 適用于中藥制劑中微量水分的測定。甲苯法測定水分A 為500mL的短頸圓底燒瓶， B 為水分測定管； C 為直形冷凝管，外管長40cm。 使用前，全部儀器應(yīng)清潔，并置烘箱中烘干。甲苯法測定水分取供試品適量（約相當(dāng)于含水量14ml），精密稱定，置A瓶中,加甲苯約200ml，必

4、要時加入干燥、潔凈的沸石或玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細(xì)部分。將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱,待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時,將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗, 再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色，以便分離觀察）。檢讀水量，并計算供試品中的含水量（%）。 灰分測定法總灰分：中藥經(jīng)粉碎后加熱，高溫?zé)胱浦粱一?，總灰?生理灰分

5、+酸不溶性灰分 細(xì)胞組織及其內(nèi)含物成為灰燼而殘留，由此所得灰分為“生理灰分”。酸不溶性灰分：中藥經(jīng)高溫?zé)胱频玫降目偦曳旨欲}酸處理，得到不溶于鹽酸的灰分，稱為酸不溶性灰分。 總灰分測定法稱取供試品23g（如需測定酸不溶性灰分，可取供試品35g），置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01 g），緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500600，使完全炭化并至恒重，根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量（%）。酸不溶性灰分測定法供試品先按總灰分測定的方法測定其總灰分，然后取所得的灰分，在坩堝中注意加入稀鹽酸約10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10分鐘，表面皿用熱水5ml沖

6、洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘渣用水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中含酸不溶性灰分的含量（%）。灰分測定的注意事項1. 測定前先將供試品稱取適量粉碎，使其能通過2號篩，將粉末混合均勻后再取樣。2. 如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2ml；使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，得到的殘渣再按上面所說的方法熾灼至坩堝內(nèi)容物完全灰化。重金屬第一法第二法第三法第四法化藥常用哪個方法？中藥常用哪個方法？砷鹽古蔡氏法Ag-DDC法原理、方法、注意事項樣品前處理化藥常用哪個方法？中藥常用哪個方

7、法？有機(jī)破壞測砷鹽中藥材、中藥制劑和一些有機(jī)藥物砷鹽的檢出通常應(yīng)先行有機(jī)破壞，因砷在分子中可能以有機(jī)狀態(tài)結(jié)合，如不經(jīng)破壞，則砷不易析出。常用的破壞方法有 酸破壞法（溴-稀硫酸破壞法、硫酸-過氧化氫破壞法）、 堿破壞法（氫氧化鈣破壞法、無水碳酸鈉破壞法、硝酸鈉-無水碳酸鈉破壞法） 直接炭化法等，以氫氧化鈣破壞法較為常用。砷鹽的樣品前處理一般有機(jī)藥物的處理方法：取一定量的供試品，加入等量的無砷氫氧化鈣混勻后，加水濕潤，烘干，在小火上小心熾灼（注意不使內(nèi)容物濺出）至煙霧除盡，移入高溫爐中，在500-600 熾灼至灰化，砷成為非揮發(fā)性的亞砷酸鈣，取出放冷，加蒸餾水5ml，再緩緩加入鹽酸及濃溴液數(shù)滴（不

8、含硫的檢品可不加濃溴液），置水浴上加熱至溶液中的紅色溴驅(qū)盡，滴加氯化亞錫試液數(shù)滴，再全部轉(zhuǎn)入測砷瓶中，依法測定，做空白試驗校正。注意熾灼溫度以600 左右為宜，溫度過高，As2O3損失大，給檢查帶來誤差；一定要灰化完全，若不完全，有游離碳存在，能使所顯砷斑顏色較淺，且不規(guī)律。溶劑殘留樹脂殘留農(nóng)藥殘留方法色譜柱檢測器限量樹脂殘留物苯的限量為2ppm，正己烷、甲基環(huán)己烷、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的限量為20ppm。 GC法；方法學(xué)驗證：同溶劑殘留圖1 對照品溶液色譜圖1-正己烷；2-苯；3-甲基環(huán)己烷；4-甲苯；5-二甲苯；6-苯乙烯；7-二乙烯苯檢查農(nóng)藥殘留量的必要性？ 中藥材有相當(dāng)數(shù)量為

9、人工栽培，為提高藥材產(chǎn)量，減少昆蟲、真菌和霉菌的危害，在生產(chǎn)過程中常噴灑農(nóng)藥。此外，土壤中殘留的農(nóng)藥也可能引入藥材中，致使中藥材農(nóng)藥殘留問題較為嚴(yán)重，而農(nóng)藥對人體危害極大，所以需對中藥材及中藥制劑進(jìn)行農(nóng)藥殘留量檢查。農(nóng)藥殘留量的檢查常見農(nóng)藥的種類按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類： 有機(jī)氯類：DDT、六六六等； 有機(jī)磷類：敵敵畏、樂果等； 苯氧羧酸類除草劑：2，4D；2，4，5T等； 氨基甲酸酯類：西維因（甲萘威）等； 二硫代氨基甲酸酯類：福美鐵、福美鋅等； 無機(jī)農(nóng)藥：磷化鋁、砷酸鈣等； 植物性農(nóng)藥：煙葉和尼古丁等； 其他：溴螨酯、氯化苦等。 其中有機(jī)氯和有機(jī)磷類農(nóng)藥是長期殘留的，故應(yīng)測定其含量。 農(nóng)藥殘留量的檢

10、查1、殘留農(nóng)藥的提取提取溶劑：有機(jī)氯類農(nóng)藥：常用正已烷（或石油醚）、乙腈、丙酮、苯等，混合溶劑常用正已烷-丙酮、乙腈-水等。有機(jī)磷類農(nóng)藥：根據(jù)其極性采用相應(yīng)極性的溶劑進(jìn)行提取。提取方法： 索氏提取法；振蕩提取法。 農(nóng)藥殘留量的檢查2、樣品純化： 液液分配（LLP）：常用溶劑體系有二氯甲烷丙酮/水、二氯甲烷甲醇/水、乙腈石油醚、乙腈石油醚/水、二氯甲烷乙腈/水等。 柱層析分離：常用吸附劑有弗羅里硅土（Florisil）、Celite-Nuchar、硅膠、氧化鋁、活性炭等。農(nóng)藥殘留量的檢查3、檢測方法：氣相色譜法。層析柱：毛細(xì)管柱。檢測器：常用電子捕獲檢測器。固定液及其配比 有機(jī)氯農(nóng)藥：常用DC-

11、200、OV-17、QF-1、SE-30、OV-210等。 有機(jī)磷農(nóng)藥：常用10%DC-200、10%-200+15%QF-1、2%DEGS等。柱溫：有機(jī)氯農(nóng)藥：一般使用180-220，視農(nóng)藥而異，其中以200最常用； 有機(jī)磷農(nóng)藥：測定對象不同，柱溫變化較大。載氣：氮氣。 農(nóng)藥殘留量的檢查難點提示： 對中藥進(jìn)行農(nóng)藥殘留量檢查已成為必然，尤其是出口中藥材及中藥制劑必須進(jìn)行該項檢查。 農(nóng)藥殘留量分析屬微量分析，在對樣品進(jìn)行前處理時需特別注意待測成分的損失。 農(nóng)藥殘留量的檢查黃曲霉毒素測定法為什么要測定？方法注意事項檢查黃曲霉素的必要性中藥材采集后干燥或貯存不當(dāng)，或在制備和加工過程中處理不善，可能污

12、染在自然界普遍存在的黃曲霉而產(chǎn)生黃曲霉毒素，黃曲霉毒素具有極強(qiáng)的毒性和致癌性，故需對中藥材及中藥制劑中黃曲霉毒素含量進(jìn)行控制。黃曲霉的基本結(jié)構(gòu)：黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物，其基本結(jié)構(gòu)都有二呋喃和香豆素。黃曲霉毒素在紫外線照射下，都能了出熒光，根據(jù)熒光顏色、Rf值及結(jié)構(gòu)等不同，分別命名為B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q等。 B1B2G1黃曲霉毒素測定法（2010）本法系用高效液相色譜法（附錄D）測定藥材、飲片及制劑中的黃曲霉毒素（以黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2總量計），除另有規(guī)定外，按下列方法測定。規(guī)定：B15g/kg，G2+G1+B2+B1的總量 10g/kg。陳皮、僵蠶

13、、桃仁、胖大海、酸棗仁黃曲霉毒素測定法（2010）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）為流動相，流速每分鐘0.8ml；采用柱后衍生法檢測，衍生溶液為0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀釋至1000ml制成），衍生化泵流速每分鐘0.3ml，衍生化溫度70；以熒光檢測器檢測，激發(fā)波長ex=360nm（或365nm），發(fā)射波長em=450nm。兩個相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。黃曲霉毒素測定法（2010）混合對照品溶液的制備 精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標(biāo)示濃度分別為1.0g/

14、ml、0.3g/ml、1.0g/ml、0.3g/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。精密量取儲備液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。黃曲霉毒素測定法（2010）供試品溶液的制備取供試品粉末約15g（過二號篩），精密稱定，加入氯化鈉3g，置于均質(zhì)瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘），離心5分鐘（離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45m）濾過，量取續(xù)濾液20.0ml，通過免疫親合柱（AflaT-estP）,流速每分鐘3ml，用水2

15、0ml洗脫，洗脫液棄去，使空氣進(jìn)入柱子，將水?dāng)D出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。黃曲霉毒素測定法（2010）測定法分別精密吸取上述混合對照品溶液5l、10l、15l、20l、25l，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另精密吸取上述供試品溶液20-25l，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2的量，計算，即得。黃曲霉毒素測定法（2010）附注：（1）本實驗應(yīng)用相應(yīng)的安全、防護(hù)措施，并不得污染環(huán)境。（2）殘留有黃曲霉毒素的廢

16、液或廢渣的玻璃器皿，應(yīng)置于專用貯存容器（裝有10%次氯酸鈉溶液）內(nèi)，浸泡24小時以上，再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。 二氧化硫殘留量測定法為什么要測定？方法硫磺具有漂白、增艷、防蟲等作用，某些中藥材在加工過程中有用硫磺熏蒸的習(xí)慣，殘留的S02可能影響人體健康。2005版藥典規(guī)定，中藥材不再允許使用硫磺熏蒸，并要對其進(jìn)行檢測。二氧化硫殘留量測定法（2010）A 為1000ml兩頸圓底燒瓶；B 為豎式回流冷凝管；C 為（帶刻度）分液漏斗；D 為連接氮氣流入口；E 為二氧化硫氣體導(dǎo)出口。另配磁力攪拌器及電熱套。 取藥材或飲片細(xì)粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300-400ml和6mol/L

17、鹽酸溶液10ml，連接刻度分液漏斗，并導(dǎo)入氮氣至瓶底，連接回流冷凝管，在冷凝管的上端E口處連接導(dǎo)氣管，將導(dǎo)氣管插入250ml錐形瓶底部。錐形瓶內(nèi)加水125ml和淀粉指示液1ml作為吸收液，置于磁力攪拌器上不斷攪拌。加熱兩頸圓底燒瓶內(nèi)的溶液至沸，并保持微沸約3分鐘后開始用碘滴定液（0.01mol/L）滴定，至藍(lán)色或藍(lán)紫色持續(xù)20秒鐘不褪，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。 A為供試品消耗碘滴定液的體積，ml；B為空白消耗碘滴定液的體積，ml；C為碘滴定液濃度，0.01mol/L；W為供試品的重量，g；0.032為每1ml碘滴定液（1mol/L）相當(dāng)?shù)亩趸虻馁|(zhì)量，g。 供試品中二氧化硫殘留量（mg

18、/g）=重金屬及有害元素測定法（2010）鉛、鎘、砷、汞是目前世界公認(rèn)的對人體有害的元素，國際上對此十分重視，很多國家對進(jìn)口中藥、中藥制劑均有明確的限度規(guī)定。某些國家對銅也有明確限定。2005年版中國藥典對上述5種有害元素建立了測定方法，規(guī)定鉛5ppm、鎘0.3ppm 、砷2ppm 、汞0.2ppm，銅20ppm重金屬及有害元素測定法（2010）6種藥材中需測定：甘草、黃芪、西洋參、丹參、白芍、金銀花、測定方法：原子吸收分光光度法，電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）ICP-MS特點儀器構(gòu)造ICP工作原理樣品前處理分析方法應(yīng)用前景ICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜：是以電感耦合等離子體（ICP

19、）作為離子源，產(chǎn)生的樣品離子經(jīng)質(zhì)量分析器和檢測器按質(zhì)荷比（m/z）分離后，得到質(zhì)譜圖，用于元素和同位素分析的一種新方法。ICP-MS的特點更低的檢出限：0.020.1ng/ml非常寬的線性范圍：89個數(shù)量級譜線簡單、干擾少、精密度高多元素同時定性、定量分析等特點速度快：通常的分析時間15 min 可分析地球上幾乎所有的元素（C、O）。ICP-MS的儀器構(gòu)造等離子體離子源通常，液體樣品通過蠕動泵引入到一個霧化器產(chǎn)生氣溶膠。雙通路霧室確保將氣溶膠傳輸?shù)降入x子體。在一套形成等離子體的同心石英管中通入氬氣（Ar）。炬管安置在射頻(RF)線圈的中心位置，RF能量在線圈上通過。強(qiáng)射頻場使氬原子之間發(fā)生碰撞，產(chǎn)生一個高能等離子體。樣品氣溶膠瞬間在等離子體中被解離（等離子體溫度大約為6000 - 10000 K），形成被分析原子，同時被電離。將等離子體中產(chǎn)生的離子提取到高真空（一般為10-4 Pa）的質(zhì)譜儀部分。真空由差式抽真空系統(tǒng)維持：被