果蠅伴性遺傳實(shí)驗(yàn)

1、果蠅的伴性遺傳小組成員：周穎、魯鈺、余一鳴1IntroductionMaterials and MethodsDiscussion Experience Contents2Introduction 一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物材料必須具備：生活史短、繁殖力強(qiáng)、容易飼養(yǎng)及許多遺傳標(biāo)記因子等條件。果蠅即是因上述的優(yōu)點(diǎn)在二十世紀(jì)以來(lái)的遺傳學(xué)上扮演了重要的角色。以果蠅作為實(shí)驗(yàn)的材料最早可追溯至1901年Castle成功的將果蠅培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中作為研究的材料；而將果蠅作遺傳研究的先趨則是在1909年Morgan的研究。以研究成果而言，本二十世紀(jì)初即有相關(guān)的研究報(bào)告，今日，由于近百年來(lái)研究成果的累積，我們對(duì)果蠅的遺傳背

2、景了解的相當(dāng)清楚，而且果蠅幼蟲(chóng)的唾液腺細(xì)胞又有多絲染色體。所以只要提到遺傳，果蠅是當(dāng)然的主角。3實(shí)驗(yàn)材料：黑腹果蠅野生型：紅眼（+），長(zhǎng)翅（+），直剛毛（+）黑腹果蠅突變體：三隱性突變體藥品：乙酸、乙醚、丙酸、石炭酸品紅、果蠅培養(yǎng)基器材：顯微鏡、解剖鏡、載玻片、蓋玻片、麻醉瓶、培養(yǎng)箱、接種針、試管等Materials4 Methods配好培養(yǎng)基，備好藥品及各種器材后，收集野生型紅眼果蠅和三隱性白眼果蠅處女蠅10只左右。取紅眼雌蠅（處女蠅）10只左右放入內(nèi)有培養(yǎng)基的試管中，再取10只白眼雄蠅也放入其中，此為親本正交組；再取10只左右白眼雌蠅（處女蠅）放入另一支試管中，同樣，紅眼雄蠅10只加入該試

3、管，放入溫箱中25左右培養(yǎng)。78天，等出現(xiàn)F1代幼蟲(chóng)后，把親本處理掉。再過(guò)46天，F(xiàn)1代成蠅出現(xiàn)，觀察F1代成蠅眼色并記錄數(shù)據(jù)。5 Methods將F1代雌雄果蠅互交，分別放入事先配制好培養(yǎng)基的兩支新的試管中，仍然置于25培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。同前述操作，待78天后，F(xiàn)2代幼蟲(chóng)出現(xiàn)，處理掉試管內(nèi)的F1代成蟲(chóng)。F2代從幼蟲(chóng)發(fā)育為成蟲(chóng)后，對(duì)其麻醉，辨別雌雄及觀察眼色，作好記錄工作。記錄完畢后，將果蠅全部處理掉，清洗試管并整理器材等，進(jìn)行后期的數(shù)據(jù)處理及分析工作。6Methods果蠅的麻醉處理：用棉花蘸取少量乙醚，塞在試管口，約10秒后，果蠅因麻醉而不再動(dòng)彈，移開(kāi)棉花，將已麻醉的果蠅倒在一張白紙上，用毛筆和

4、解剖鏡觀察性狀、性別、計(jì)數(shù)或挑選處女蠅。果蠅的雌雄識(shí)別：果蠅的性梳是一個(gè)決定雌雄果蠅的第二性征。性梳著生在雄果蠅的第一對(duì)前足的第一個(gè)跗節(jié)上，因形狀與梳頭的梳子非常相似，又與性別有關(guān)而得名。在鑒別雌雄果蠅的特征中，除性梳這一性狀需要借助顯微鏡觀察外，其它性狀都可以用肉眼直接觀察。處女蠅的選取方法：雌果蠅自羽化開(kāi)始10小時(shí)之內(nèi)尚未成熟而無(wú)交配能力。選擇處女蠅時(shí)，先把試管中的老果蠅全部除去，收集10小時(shí)之內(nèi)羽化出來(lái)的新果蠅，麻醉后放在白紙上，將果蠅雌雄分開(kāi)，這時(shí)得到的雌果蠅應(yīng)該全部都是處女蠅。如果要驗(yàn)證選取的處女蠅是否準(zhǔn)確，先不要放入雄蠅，3天后看雌蠅是否產(chǎn)卵，如果產(chǎn)卵就不是處女蠅了。果蠅的接種：

5、用毛筆把未醒來(lái)的果蠅， 先放在倒著的試管內(nèi)，以免沾死在培養(yǎng)基上，醒后再將試管直立。必須及時(shí)塞上塞子，并給試管標(biāo)注果蠅性別、性狀、培養(yǎng)時(shí)間等。7 正交P：X+ X + XwY (紅眼雌蠅） （白眼雄蠅） Discussion F1 : X+Xw X+Y （紅眼雌蠅） （紅眼雄蠅） F2：X+X+ X+Y X+Xw XwY (紅眼雌蠅） （紅眼雄蠅） （白眼雄蠅） 2 ： 1 ： 1 反交P: XwXw X+Y（白眼雌蠅） （紅眼雄蠅）F1：X+Xw XwY(紅眼雌蠅） （白眼雄蠅）F2： X+Xw X+Y XwXw XwY(紅眼雌蠅）：（白眼雌蠅）：（紅眼雄蠅）：（白眼雄蠅） 1 : 1 : 1

6、 : 1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)雜交圖譜如下所示：8Discussion圖:果蠅染色體圖示及相關(guān)基因位置展示實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果：正交：F1：全是紅眼F2：雌蠅均為紅眼，雄蠅紅眼、白眼各半反交：F1：雌蠅均為紅眼，雄蠅均為白眼F2：雌蠅紅眼、白眼各半，同樣，雄蠅紅眼、白眼各半控制眼色的等位基因位于X染色體上，紅眼為顯性，白眼為隱性9Discussion1)在培養(yǎng)果蠅時(shí)應(yīng)該注意：要經(jīng)常觀察,及時(shí)將已生霉的試管中的果蠅轉(zhuǎn)移到干凈的試管中。注：本次試驗(yàn)中有一支試管受真菌感染作廢，原因可能是在轉(zhuǎn)移的時(shí)候棉塞受污染所導(dǎo)致的。2)試管必須加蓋(用紗布、衛(wèi)生紙、濾紙、棉塞等物),以免果蠅飛出管外，但也要保證透氣性 。3)用消過(guò)毒

7、的毛筆挑取果蠅，并放在潔凈的白紙上觀察，切忌使用鑷子或其他鋒利的金屬器具，以免戳傷果蠅蠅體和生殖器，影響果蠅生長(zhǎng)繁育。10Discussion4)要控制溫度，果蠅的生活史周期的長(zhǎng)短與溫度有密切關(guān)系，提高溫度和降低溫度都會(huì)使果蠅的生活史周期縮短或延長(zhǎng)。如果超過(guò)30，會(huì)造成雌蠅的育性下降或不育，甚至可引起果蠅的死亡。相反，把環(huán)境溫度降低到10，果蠅的生活史周期可延長(zhǎng)到50多天，這時(shí)果蠅的生活力很低。果蠅的適宜環(huán)境溫度2025，故應(yīng)放在恒溫箱中培養(yǎng)，最好為25。5)在F1代和F2代培養(yǎng)的試管中要控制蟲(chóng)體密度, 可在受精卵開(kāi)始發(fā)育時(shí)將成蠅的大部分或全部放掉,或轉(zhuǎn)移至新試管中。在下一代的子代羽化之前一定

8、要將親本全部清除干凈并處死，以免出現(xiàn)回交現(xiàn)象影響統(tǒng)計(jì)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 11Discussion6)果蠅的麻醉要適度。掌握好麻醉的時(shí)間，乙醚滴加的量要控制好，如果麻醉不足會(huì)導(dǎo)致果蠅在實(shí)驗(yàn)完成前蘇醒，果蠅活動(dòng)影響觀察；若麻醉過(guò)度甚至?xí)?dǎo)致果蠅死亡，影響翅膀等性狀的觀察和判斷。7)親本必須為處女蠅，其原因是雌蠅生殖器官有受精囊，可以保存交配所得的大量精子，能使交配后卵巢產(chǎn)生的卵受精。在雜交時(shí)，若雌蠅不是處女蠅，其體內(nèi)已儲(chǔ)有另一類型雄蠅的精子，會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗。故處女蠅的挑選十分關(guān)鍵。12磨刀不誤砍柴工Experience失敗是成功之母有志者，事竟成千里之堤，潰于蟻穴三人行，必有我?guī)熝?風(fēng)雨總在陽(yáng)光后13Reference1. 賀竹梅編著. 現(xiàn)代遺傳學(xué)教程. 2002.3 ISBN978-7-306-01896-0. 中山大學(xué)出版社 2.路淑霞，常重杰，盧龍斗，等.果蠅雜交實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)與安排J.生物學(xué)通報(bào)，2000( 11):36-37.3.李國(guó)泰.白眼殘翅果蠅的培養(yǎng)