無菌生產工藝驗證詳解

1、無菌生產工藝驗證的主要內容(nirng)與方法共六十三頁內容(nirng)前言 - 藥品的風險無菌生產工藝驗證原則與申報資料(zlio)要求無菌生產工藝驗證的內容與方法無菌生產工藝的再驗證小結共六十三頁一、前言(qin yn) 藥品的風險取決于其給藥途徑1類 注射劑 （靜脈，肌內，皮內，皮下，脊椎腔，動脈(dngmi)內）2類 口服制劑3類 局部給藥手術、燒傷及嚴重創(chuàng)傷眼部給藥耳、鼻及呼吸道吸入陰道、尿道給藥直腸給藥4類 含動物組織的口服制劑5類 兼用途徑共六十三頁注射劑的風險(fngxin)風險1 - 微生物污染 風險2 - 熱原的污染風險3 - 不溶性微粒風險4 - 純度 其他風險：安全性

2、（組織(zzh)的刺激性，毒性發(fā)應）滲透壓pH共六十三頁注射劑風險(fngxin)控制手段微生物污染風險 注射劑必須是無菌熱原污染 控制限度不溶性微粒 控制限度純度(chnd) 原料工藝其他風險控制手段：安全性臨床實驗等滲，等張，pH調節(jié)共六十三頁無菌藥品(yopn)的制造工藝類別最終滅菌工藝先將藥品的各個部件（產品，容器和密封件）在符合要求的環(huán)境下組成最終的包裝形式，最后讓產品在其最終容器中進行滅菌處理（通常(tngchng)使用熱力學滅菌或輻射滅菌）。無菌生產工藝藥品的各個部件（產品，容器和密封件）分別經過滅菌處理，再在高潔凈度的環(huán)境中組裝最終產品，但產品裝入其最終容器后不再進行滅菌處理。

3、共六十三頁如何(rh)制造出高質量的無菌藥品？對生產工藝的深刻理解識別、評估各工藝步驟對無菌性，熱原，微粒等質量因素及其影響程度在工藝過程中采取有效控制手段對這些(zhxi)手段的有效性進行驗證遵循相關法規(guī)的要求共六十三頁二、無菌生產工藝驗證原則與申報(shnbo)資料要求無菌生產工藝驗證原則以無菌保證為核心，在充分評估工藝各步驟微生物污染風險的基礎上，利用現有的科學技術，對風險控制手段的有效性進行(jnxng)確認。共六十三頁無菌凍干粉針劑生產(shngchn)工藝流程配料(pi lio)原料，輔料，配料器具，環(huán)境，人員操作容器，WFI，配液器具，環(huán)境，操作膠塞，過濾器，灌裝部件，清潔工具，

4、滅菌釜，清潔及滅菌過程西林瓶，WFI，洗瓶機，干熱滅菌設備氣體，容器管道過濾器及安裝操作，過濾前溶液含菌量環(huán)境，人員操作，轉移凍干機密閉性壓蓋前儲存時間，轉移，膠塞密閉性，壓蓋后的密閉性共六十三頁無菌工藝(gngy)無菌性的保證因素水原料藥輔料氣體(qt)容器/密封件設施容器、設備的清洗滅菌配料、配液、過濾、灌裝全過程人員環(huán)境及培養(yǎng)基灌裝無菌試驗無菌包裝產品 生產過程原材料共六十三頁遵循的法規(guī)(fgu)要求中國GMP有關無菌生產工藝的有關規(guī)定以及潔凈室懸浮粒子、沉降菌和浮游菌檢測的國家標準藥品生產質量管理規(guī)范實施指南中有關無菌生產的指導原則(yunz)藥品生產驗證指南FDA無菌生產工藝指南FD

5、A工藝驗證一般原則新藥申報資料對滅菌工藝驗證的要求歐盟GMP附錄1無菌藥品生產共六十三頁美國FDA要求的新藥申報(shnbo)資料1. 適應癥2. 藥學和毒理學研究3. 化合物研究4. 生產工藝5. 標準和控制6. 微生物學研究7. 現場檢查8. 樣品測試9. 動物試驗(shyn)10. 臨床研究11. 生物利用共六十三頁FDA新藥申報資料對無菌藥品(yopn)工藝驗證的要求原則：只有當藥品的檢驗方法、生產設施、工藝流程、包裝等能確保藥品的性質、含量、質量(zhling)和純度時，新藥申請才會被批準資料要求：無菌藥品的工藝驗證必須包含在申報資料中兩級責任制：CDER負責資料的審核地方藥監(jiān)負責現

6、場核查目的1：申報資料的真實性目的2：GMP符合性檢查 共六十三頁FDA新藥申報資料對無菌藥品工藝驗證(ynzhng)具體內容要求（1）A. 廠房和設施布局圖，包括潔區(qū)劃分設備分布圖B. 總體生產流程介紹產品過濾溶液儲存時間關鍵操作(cozu)C. 容器、密封部件、設備和器具的滅菌去熱原過程分別滅菌溶液的工藝過程完整的批生產記錄共六十三頁FDA新藥申報資料對無菌藥品工藝(gngy)驗證具體內容要求（2）C. 培養(yǎng)基灌裝的程序和標準灌裝房間密封系統類型和尺寸每個容器灌裝體積培養(yǎng)基類型灌裝數量培養(yǎng)數量陽性數量培養(yǎng)條件灌裝日期挑戰(zhàn)條件敘述環(huán)境監(jiān)測產品(chnpn)正常工藝和培養(yǎng)基灌裝工藝的工藝參數共

7、六十三頁FDA新藥申報資料對無菌藥品(yopn)工藝驗證具體內容要求（3）E. 培養(yǎng)基灌裝失敗時的措施F. 環(huán)境監(jiān)測應用的微生物方法監(jiān)測酵母菌、霉菌和厭氧菌的方法和頻率超標時的措施G. 密封系統完整性H. 無菌檢查方法和放行標準(biozhn)I. 內毒素檢查方法J.有關上述所有內容的文件列表共六十三頁三、無菌生產工藝驗證(ynzhng)的具體內容和方法廠房和設施(shsh)（布局、空氣凈化系統包括HEPA， WFI系統）器具、容器的滅菌除熱原過程灌裝部件、膠塞的滅菌過程洗瓶、干熱去熱原過程配液灌、儲液罐及管道、凍干機滅菌過程過濾除菌過程灌裝過程（環(huán)境、人員監(jiān)測）容器密閉性綜合驗證：培養(yǎng)基灌裝

8、試驗（工藝模擬實驗）實驗室控制（微生物測試標準方法、無菌檢查）共六十三頁3.1 原輔料的控制(kngzh)無菌原料藥其本身(bnshn)的生產工藝應按無菌生產工藝驗證原則進行包裝和運輸應是考察重點非無菌原料或輔料盡可能降低微生物負荷- 50CFU/g生產的潔凈環(huán)境設備與其他物料及人員生產用水共六十三頁非無菌原料(yunlio)或輔料關鍵控制點精烘包階段環(huán)境至少十萬級以上人員著裝(zhe zhun)、人流物流控制，環(huán)境清潔規(guī)程設備清潔規(guī)程，設定內控限度預先采取高溫或過濾是降低微生物污染的有效方法生產用水需要達到純化水要求，并控制內毒素對除菌、滅菌或去內毒素步驟需評估對產品理化性能的影響共六十三頁

9、3.2 生產環(huán)境驗證(ynzhng)和控制范圍包含所有工藝步驟遵守(znshu)相關的GMP規(guī)范驗證時考察靜態(tài)和動態(tài)時的環(huán)境質量生產時實行動態(tài)監(jiān)測共六十三頁環(huán)境驗證(ynzhng)的范圍空氣凈化系統的驗證(ynzhng)（溫濕度，壓差，空氣流向，風速，高效過濾器泄漏測試）環(huán)境性能測試（靜態(tài)動態(tài)）懸浮粒子和恢復速率測試 微生物測試：空氣浮游菌，沉降菌，表面微生物日常監(jiān)控共六十三頁為什么環(huán)境監(jiān)測(hun jn jin c)是必不可少的？ 在無菌工藝中，產品、容器(rngq)和密封件分別經過滅菌后再進行灌封。由于產品裝入最終容器(rngq)后不再作進一步滅菌處理，容器(rngq)在極高潔凈環(huán)境下進行

10、灌封是至關重要的。 FDA無菌生產工藝指南第五頁共六十三頁制訂環(huán)境監(jiān)控(jin kn)方案的原則明確監(jiān)控的關鍵控制點給產品構成最大風險(fngxin)的位置，如產品暴露位置、直接接觸表面人員科學建立控制標準和方案標準應滿足無菌生產微生物控制要求，并結合取樣點位置和生產操作的相互關系建立警戒和糾偏標準進行數據分析全面監(jiān)控、動態(tài)監(jiān)控定期的環(huán)境再驗證共六十三頁無菌灌裝區(qū)環(huán)境監(jiān)控(jin kn)頻率潔凈室測試項目監(jiān)測頻率無菌灌裝間產品轉移間滅菌釜卸載間更衣間空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物沉降菌操作人員每批一次或無生產時每周一次產品轉移間清潔間物流緩沖間更衣間 空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物每周一次

11、共六十三頁物料準備區(qū)環(huán)境監(jiān)控(jin kn)頻率潔凈室測試項目監(jiān)測頻率配液間壓蓋間空氣懸浮粒子*空氣浮游菌表面微生物沉降菌每周一次（* 每月一次）更衣間清潔/滅菌間空氣懸浮粒子*空氣浮游菌表面微生物每周一次（* 每月一次）其他C級區(qū)房間空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物每月一次共六十三頁輔助區(qū)環(huán)境監(jiān)測(hun jn jin c)頻率潔凈室測試項目監(jiān)測頻率輔助區(qū)所有房間 空氣懸浮粒子空氣浮游菌表面微生物每三個月一次共六十三頁微生物檢測方法(fngf)的特點空氣浮游菌定量、準確、取樣量大，但易干擾氣流沉降菌取樣時間長，不干擾氣流，但非定量、檢出率低接觸碟光滑表面，方便，但需特殊的培養(yǎng)(piyng)碟

12、棉簽法不規(guī)則表面，操作稍復雜共六十三頁監(jiān)測(jin c)的實施 在生產過程中，無菌灌裝線上沉降碟的放置應在所有(suyu)操作開始前完成空氣浮游菌的測試應根據生產情況開空氣取樣儀灌裝線上的表面微生物測試應在灌裝結束后進行監(jiān)測人員根據生產和人員操作的情況，可隨時要求進行操作人員手套的微生物測試，操作人員在測試前不應噴灑無菌酒精，在測試后應更換手套。對于無菌服的微生物測試一般在操作人員退出B級區(qū)之前進行。所有的樣品在測試后都應裝入滅菌袋中適當包裹，以避免樣品在轉移途中受到污染。 共六十三頁人員(rnyun)控制無菌服、頭套、眼罩(yn zho)、人員操作行為無菌灌裝人數控制人員資格認定體檢，操作培

13、訓，著裝培訓，著裝測試著裝測試方法年度資格再確認制度共六十三頁眼罩(yn zho)也為取樣點共六十三頁環(huán)境監(jiān)測數據(shj)的分析共六十三頁細菌(xjn)鑒定確定(qudng)污染源，為制訂整改措施提供幫助提供放行/報廢依據用于培養(yǎng)基灌裝用于消毒劑的效率測試共六十三頁共六十三頁共六十三頁3.3 過濾(gul)系統的驗證無菌過濾是截留微生物具有一定的風險(fngxin)制造過程中的不均一性對過濾介質的化學腐蝕機械缺陷過高的壓力共六十三頁過濾器驗證(ynzhng)項目 生物性能(xngnng)微生物截留客戶定制流速產量操作溫度壓力系統尺寸大小 物理性能完整性產品水起泡點擴散流吸附 化學性能兼容性析

14、出物驗證必須是以產品為介質，在最差的條件下進行共六十三頁過濾器的選擇(xunz)工藝特性所要求的流量(liling)所要求的壓差可使用的滅菌方法過濾介質的壽命過濾器結構筒式，平板式共六十三頁過濾器的選擇(xunz)化學相容性證明過濾介質不會把外來物質帶進產品證明無菌過濾介質不受產品的影響，削弱它的強度(qingd)和完整性測試包括：可氧化物質溶劑系統中的重量變動析出物分析，吸附分析完整性試驗流量變化外觀物理變化生物截留能力共六十三頁過濾器的完整性試驗(shyn)目的是確定過濾系統不存在使液體不經過過濾介質到達(dod)過濾器下游的通道起泡點試驗前向流試驗（擴散流）壓力表壓力表濾芯流量計共六十三

15、頁無菌過濾器微生物挑戰(zhàn)(tio zhn)試驗目的：證實過濾器是有能力截獲微生物，而且超過了工藝物流自身最大的生物負荷模擬實際工藝的壓力流量等參數菌種：缺陷型假單胞菌數量：按過濾器面積107個/cm2步驟確認過濾器的完整性用含一定數量細菌(xjn)的培養(yǎng)基過濾濾過液進行培養(yǎng)（取樣或膜過濾），37度14天過濾后進行完整性測試連續(xù)驗證3次，都應無菌生長共六十三頁三個需要特別(tbi)關注的關鍵點起泡點標準(biozhn)的建立與截留率的相關性過濾器的微生物截留驗證必須在藥液中進行在實際的生產參數下進行驗證，如壓力最高值共六十三頁過濾(gul)系統驗證小結過濾器的選擇應符合工藝和產品的特性過濾器的驗證

16、是一個技術復雜(fz)的過程國外一般委托過濾器生產廠家進行選擇和驗證共六十三頁3.4 培養(yǎng)基灌裝試驗(shyn)采用(ciyng)正常的生產工藝，用培養(yǎng)基代替產品進行灌裝，以考察生產過程、設備和包裝形式、人員操作等整個體系能始終如一地生產出符合要求的無菌產品使用范圍初次驗證 對象：新的無菌生產工藝連續(xù)3次合格的無菌工藝模擬 有足夠的時間模擬實際生產時的操作 最差狀況模擬年度再驗證對象：現行工藝 每年進行兩次再驗證有足夠的時間模擬實際生產時的操作最差狀況模擬共六十三頁培養(yǎng)基灌裝流程(lichng)確認設施設備和各滅菌工藝驗證的完成(wn chng)確認培養(yǎng)基灌裝的范圍制訂培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基選擇

17、灌裝數量和灌裝總時間各步驟間的間隔時間挑戰(zhàn)試驗的最差條件設計人員環(huán)境監(jiān)測計劃培養(yǎng)條件、時間和設備培養(yǎng)基靈敏度試驗總結和失敗原因調查共六十三頁使用(shyng)范圍計劃外的驗證： 如工藝重大改變，設施設備改造等偏差原因：無菌實驗失敗，根據偏差調查結果的要求環(huán)境監(jiān)測結果明顯反常(fnchng)，根據偏差調查結果的要求某個區(qū)域的空調關閉時間超過驗證的時間段共六十三頁培養(yǎng)基灌裝試驗(shyn)應考慮的因素培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基促生長能力灌裝數量環(huán)境監(jiān)測方案收集(shuj)和培養(yǎng)最差條件的挑戰(zhàn)共六十三頁培養(yǎng)基的選擇(xunz)適應(shyng)廣譜微生物生長較好的澄明度，較小的粘度可除菌過濾常用培養(yǎng)基：3大

18、豆胰蛋白肉湯（TSB）粉針劑：聚乙二醇，乳糖和/或肉湯粘稠的乳膏劑：混于肉湯中的瓊脂和羧甲基纖維素 共六十三頁培養(yǎng)基促生長(shngzhng)能力靈敏度試驗 取灌裝前、中、后各階段的培養(yǎng)基樣品枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠(ninzh)球菌、綠膿桿菌、黑曲霉菌、環(huán)境菌每個菌種接種2支，計數100cfu/瓶20-25C/30-35 C 培養(yǎng)5天內生長共六十三頁灌裝數量(shling)批次量足夠大灌裝量一般500010000瓶批量(p lin)小的(低于5000瓶)以全批數量灌裝共六十三頁環(huán)境監(jiān)測(hun jn jin c)全面、全過程檢測(jin c)對無菌生產區(qū)環(huán)境的評估對人員資格的確

19、認(所有無菌區(qū)工作人員）環(huán)境的清潔：灌裝結束4小時內共六十三頁收集(shuj)和培養(yǎng)按灌裝的先后順序軋蓋翻轉接觸所有(suyu)表面培養(yǎng)：20-25度7天，30-35度7天 在中間轉換溫度和培養(yǎng)結束時100燈檢記錄污染瓶數記錄丟棄的數量和原因，不得隨意丟棄共六十三頁最差條件(tiojin)挑戰(zhàn)儲存時間： 灌裝設備、灌裝部件、儲罐、無菌物料、藥液在實際灌裝前能夠放置的最長時間例1: 用需要再滅菌前的灌裝設備、灌裝部件、儲罐、無菌物料參與培養(yǎng)基灌裝例2:無菌過濾后存放在儲罐內的培養(yǎng)基到實際生產(shngchn)時產品的最大儲存時間后再灌裝共六十三頁最差條件(tiojin)挑戰(zhàn)無菌灌裝時間 在培養(yǎng)基

20、灌裝中模擬用時最長的瓶子滿批量生產需要的時間，其中包括正常的干擾時間（換班、設備維修）灌裝速度和瓶子規(guī)格(gug)灌裝速度和瓶子規(guī)格的關系最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格最小的瓶子規(guī)格，最快的速度共六十三頁最差條件(tiojin)挑戰(zhàn)人員培養(yǎng)基灌裝時模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數無菌區(qū)工作人員至少每年參與一次培養(yǎng)基灌裝操作干擾正常的（灌裝線裝配，稱量調節(jié)，加膠塞，處理倒瓶，取樣，環(huán)境監(jiān)測） 非正常的（設備故障，灌裝線堵塞，軌道調節(jié)，拆卸/替換破損的部件）干擾的次數應該不少于正常生產時發(fā)生的次數工藝氣體使用氮氣(dn q)的，因考慮其不利于微生物生長，以壓縮空氣代替共六十三頁培養(yǎng)基灌裝失敗(shbi)后

21、的調查不管批次量有多大,只要培養(yǎng)基灌裝中存在污染就意味著無菌保證有問題設計合理(hl)、操作適當的無菌灌裝污染水平應為零灌裝瓶數結果判斷10000如有1瓶污染，進行調查如有2瓶污染，調查并考慮再驗證共六十三頁培養(yǎng)基灌裝失敗(shbi)后的調查環(huán)境和人員監(jiān)測數據滅菌(mi jn)記錄和設備校驗記錄灌裝區(qū)域清潔消毒記錄人員培訓記錄高效過濾器完整性測試記錄壓差記錄溶液除菌過濾器完整性測試記錄污染菌來源丟棄的培養(yǎng)基灌裝瓶灌裝時的干擾活動其他偏差和干擾活動共六十三頁3.5 容器(rngq)密封性驗證目的：保證滅菌過程后和產品有效期內密封系統的完整性密閉系統：安瓿或容器/膠塞系統方法：物理方法：染料檢漏法

22、，鹽水滲入法，高壓電極檢測機微生物檢測法：氣溶膠法將灌裝培養(yǎng)基的壓蓋容器放置在充滿微生物的氣溶膠腔室內，保持一定溫度、壓力、濕度和時間微生物浸泡法將灌裝培養(yǎng)基的壓蓋容器倒置在一定濃度的特定(tdng)微生物的溶液內，保持一段時間共六十三頁微生物浸泡(jnpo)法操作步驟菌液待確認密封口支架培養(yǎng)基容器選擇試驗菌種（大腸(dchng)埃希氏菌、銅綠假單胞菌、粘質沙雷氏菌）制備菌懸液一接種環(huán)置10ml TSB中30-35度培養(yǎng)16-18小時，再置于1000 ml TSB中培養(yǎng)22-24小時，濃度不小于106/ml準備灌裝有培養(yǎng)基的西林瓶（按正常程序軋鋁蓋）試驗：將鋁蓋去除倒置于菌懸液中4小時取出后消毒外表面培養(yǎng)7天，每天觀察生長情況培養(yǎng)基的陽性試驗共六十三頁3.6 粉針劑、凍干粉針、小容量(rngling)注射劑工藝驗證的異同粉針劑凍干粉針小容量注射劑相同點遵循一般驗證程序 - 設計，安裝，運行，性能，產品基本范圍相同：布局設計，建筑材質，環(huán)境級別，HEPA，工藝用水，純蒸汽，清洗滅菌去熱原設備及程序，氣體系統，人員，包裝，無菌工藝，產品工藝不同