病原微生物及免疫學(xué)融合實(shí)驗(yàn)：盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)致多細(xì)菌感染膿毒癥_第1頁(yè)
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1、 盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)致多細(xì)菌感染膿毒癥(二)實(shí)驗(yàn)2樣品的收集與細(xì)菌接種1.手術(shù)器械：剪刀、鑷子；2.長(zhǎng)頭滴管、PBS 、15ml無(wú)菌離心管；3.電子天平、組織研磨器；4.培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板（N）、 胰蛋白胨大豆瓊脂平板(Y)；5.厭氧袋；6.其他：抗凝管、無(wú)菌EP管、無(wú)菌生理鹽水、三角刮刀、酒精、移液器等。實(shí)驗(yàn)材料小鼠外周血1.樣品收集（1）血漿、血清：挖眼取血，2-3滴(0.1ml)于抗凝管中用于細(xì)菌涂布，其余至無(wú)菌EP管中制作血清（靜止1h，3000rpm 15min），-80度保存，備細(xì)胞因子檢測(cè)；（2）腹膜灌洗液：引頸法處死小鼠；剪開(kāi)腹腔（1cm），用長(zhǎng)頭滴管加入3ml無(wú)菌PBS，于

2、腹腔內(nèi)左右兩側(cè)各沖洗2次，吸出灌洗液，存放于2個(gè)EP管中，其中一個(gè)EP管用于細(xì)菌涂布，另一EP管1500rpm離心5min，取上清，-80度保存，備細(xì)胞因子、MPO檢測(cè)。（3）解剖小鼠，取出一部分肝臟(0.05g)+1ml 0.5%CTAB溶液。實(shí)驗(yàn)步驟2.細(xì)菌培養(yǎng)（每只老鼠）：（1）樣品稀釋：用無(wú)菌生理鹽水對(duì)樣本進(jìn)行10倍系列稀釋，混勻后取以下稀釋度樣本用于接種： 血漿 1:10,1:100； 腹膜灌洗液 1:100,1:1000；（2）接種：用移液器各取某一稀釋度的樣品0.1ml，分別加入腦心浸液瓊脂平板和胰蛋白胨大豆瓊脂平板中央，三角刮刀沾無(wú)水乙醇點(diǎn)燃滅菌，冷卻后將樣品涂布均勻。（3）培養(yǎng)：涂布后的腦心浸液瓊脂平板放入?yún)捬醮?，打開(kāi)還原劑，封閉厭氧袋；胰蛋白胨大豆瓊脂平板與厭氧袋中的腦心浸液瓊脂平板37度倒置培養(yǎng)，至觀察到菌落。3.組織樣本處理（1）肝稱重；（2）取少量肝組織加入 0.5%CTAB溶液（50mg：1ml）（3）使用組織勻漿器研磨

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