最新前白蛋白操作SOP

1、Central Lab SOP中心實驗室-SOP文件TITLE :題目前白蛋白（PA）測定 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程INDEX NUMBER:序列號FL-ML-0-006WRITTEN BY:書寫者：陳先寶DATE WRITTEN:書寫日期2011年10月1日EFFECTIVE DATE: 生效日期2011年11月1日REVIEW DATE:審閱日期2011 年 10 月 20REVISION DATE:修訂日期REPLACE NUMBER:被替代版號New Format:新版號 A/0APPROVED BY:審批者：Lab Director :中心主任黃永富所有相關(guān)人員上崗前或文件有變動時均應(yīng)及時閱讀此

2、文件并簽字。Intended Use 目的通過顆粒增強的免疫散射比濁法定量測定人血清中的前白蛋白含量。Sphere of Application 適用范圍在檢驗部BN ProSpec特定蛋白分析系統(tǒng)上進(jìn)行的前白蛋白定量的檢測。Principle of Test檢驗方法及原理免疫散射比濁法。在免疫化學(xué)反應(yīng)中，人的血清中的前白蛋白會與特異抗體形成免疫復(fù)合物。這 些復(fù)合物會使穿過標(biāo)本的光束發(fā)生散射。散射光的強度與標(biāo)本中前白蛋白的濃度成正比。與已知的標(biāo) 準(zhǔn)濃度對比就可得出結(jié)果。Specimen Collection 使用的樣本標(biāo)本種類：新鮮血清或采樣后24小時內(nèi)即進(jìn)行冷凍儲存的血清。收集方法：血清：推

3、薦使用超速離心清除脂血樣本。收集靜脈血于空白試管，并立即分離血清和血細(xì)胞。血清標(biāo)本必須徹底凝固，并在離心沉淀后絕不能含有任何顆?；驓埓娴睦w維蛋白。脂血標(biāo)本或溶解后變得渾濁不清的冷凍標(biāo)本，則必須在測試前通過離心沉淀加以澄清（在大約15000 Xg 下 10 分鐘）。病人準(zhǔn)備要求：一般要求早晨空腹安靜時采血。采血前一天忌用煙、酒、茶、咖啡，并應(yīng)盡可能避免服用任何藥物，不能停用的藥物應(yīng)予以 注明，如抗生素、激素、維生素及其它影響代謝或干擾測試反應(yīng)的藥物，以便解釋結(jié)果時參 考。標(biāo)本容器的要求：潔凈干燥的空白試管。拒收標(biāo)本的規(guī)定：嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重脂血、嚴(yán)重污染標(biāo)本會導(dǎo)致錯誤結(jié)果，應(yīng)予以拒收。標(biāo)本的處理方法

4、：血清：血樣本應(yīng)立即離心并分離血清進(jìn)行檢測；冷凍樣品應(yīng)解凍或緩慢升溫至室溫，此外冷凍過的樣本檢測前必須很好地加以混合并離心。標(biāo)本的儲存規(guī)定：血清或血漿：新鮮樣本采集后，在18-25的室溫環(huán)境中，必須在8小時內(nèi)進(jìn)行檢測。樣本在2-8保存，最多不超過8天，在低溫（-20C及以下）最多可以保存1年，條件是在樣本采集采集后24小時內(nèi)冷凍，且避免反復(fù)凍融。標(biāo)本的外送規(guī)定：儀器故障不能立即維修及試劑斷貨導(dǎo)致不能在報告周期內(nèi)準(zhǔn)時發(fā)出檢測報告時，標(biāo)本可外送至其他有醫(yī)療資質(zhì)的單位進(jìn)行檢測。標(biāo)本結(jié)果可疑或與臨床不符時，標(biāo)本可外送至其他有醫(yī)療資質(zhì)的單位進(jìn)行復(fù)查比對。Reagents, calibrators, qu

5、ality control試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品的商名：試劑廠商名：SIEMENS標(biāo)準(zhǔn)品廠商名：SIEMENS質(zhì)控品廠商名：SIEMENS或RANDOX試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品的產(chǎn)品名：試劑產(chǎn)品名：SIEMENS BN ProSpec前白蛋白測定試劑盒（OUIF09）標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)品名：SIEMENS BN ProSpecN 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 SL （OQIM13）SIEMENS質(zhì)控品產(chǎn)品名：SIEMENS BN ProSpec N/T蛋白質(zhì)控品 SL/L （低值）OQIN13；SIEMENS BN ProSpec N/T 蛋白質(zhì)控品 SL/M （中值）OQIO13 ；SIEMENS BN

6、ProSpec N/T蛋白質(zhì)控品 SL/H （高值）OQIP13。RANDOX 質(zhì)控品產(chǎn)品名：RANDOX LIQUID SPECIFIC PROTEIN CONTRIL （LEVEL1、2、 3）試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品的包裝規(guī)格：試劑的包裝規(guī)格：每包裝1瓶，每瓶容量2mL。標(biāo)準(zhǔn)品的包裝規(guī)格：每包裝3瓶，每瓶容量1mL。質(zhì)控品的包裝規(guī)格：每包裝3瓶，每瓶容量1mL。試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品內(nèi)容物：試劑內(nèi)容物：N抗血清為液體動物血清，用高純度人前白蛋白作為抗原，使兔子產(chǎn)生抗體而制成?？贵w滴度（T）由放射免疫擴散法測定并印在瓶標(biāo)簽上?？贵w滴度表明用1ml的抗血清在瓊脂糖凝膠中沉 淀的抗原的量（以mg為單

7、位）。防腐劑：疊氮化鈉1g/L。標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)容物：N蛋白標(biāo)準(zhǔn)品SL為液態(tài)、穩(wěn)定的人血清。該標(biāo)準(zhǔn)品中加入從下列人源性制劑中獲得的IgE、鐵 蛋白和8 2-微球蛋白：骨髓瘤血清IgE、胎盤鐵蛋白和尿液3 2-微球蛋白。列出的血漿蛋白濃度 已根據(jù)不同蛋白參考制備法進(jìn)行了調(diào)整，并因具體批號而異。防腐劑：疊氮鈉（1g/L）質(zhì)控品內(nèi)容物：N/T蛋白質(zhì)控品SL/L、M和H為液態(tài)、穩(wěn)定的人血清。列出的血漿蛋白的濃度已根據(jù)不同蛋白 參考制備法進(jìn)行校正，并因具體批號而異。防腐劑：疊氮鈉（1g/L）試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品準(zhǔn)備：試劑準(zhǔn)備：2 8C下儲存的試劑和標(biāo)本可立即使用。使用前試劑需充分混勻。試劑瓶或樣本管中的泡沫或薄

8、層（液體表面薄層）會干擾水平信號的探測。從而影響樣品和試 劑的正確傳送。在將樣品和/或試劑放置到BN ProSpec系統(tǒng)上之前，先去除泡沫和/或薄層。標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：2 8C下儲存的N蛋白標(biāo)準(zhǔn)品SL或RANDOX質(zhì)控品可直接使用。輕輕顛倒混 勻。應(yīng)避免用力振搖和形成泡沫。5.5.3.質(zhì)控品準(zhǔn)備：28C下儲存的N/T蛋白質(zhì)控品SL/L、M和H可直接使用。輕輕顛倒混勻。 應(yīng)避免用力振搖和形成泡沫。試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品穩(wěn)定性與貯存：試劑穩(wěn)定性與貯存：2 8C保存條件下：穩(wěn)定至失效期。開封后的穩(wěn)定性：每次使用后立即蓋緊蓋子，儲存溫度保持在2 8C，可以保存4周。不得冷 凍。上機穩(wěn)定性：3天（按每天8小時計

9、），或長度相當(dāng)?shù)臅r間（最多24小時）。標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性與貯存：2 8C保存條件下：穩(wěn)定至效期。不得冷凍。開封后的穩(wěn)定性：SIEMENS BN ProSpecN蛋白標(biāo)準(zhǔn)品SL如果使用后立即密封保存在2 8C環(huán) 境中，則有效期為14天；RANDOX質(zhì)控品如果使用后立即密封保存在28C環(huán)境中，則有效 期為30天。在儲存期間，N蛋白標(biāo)準(zhǔn)品可能出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，這不是由微生物污染引起的，也不影響結(jié)果。質(zhì)控品穩(wěn)定性與貯存：2 8C保存條件下：穩(wěn)定至效期。不得冷凍。開封后的穩(wěn)定性：如果使用后立即密封保存在2 8C環(huán)境中，則有效期為14天。在儲存期間，N/T蛋白質(zhì)控品SL/L、M和H可能出現(xiàn)輕微渾濁現(xiàn)象，這不是由微生

10、物污染引起 的，也不影響結(jié)果。試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、注意事項：用于試劑生產(chǎn)的每一份血液樣品已根據(jù)歐盟或FDA體外診斷法令批準(zhǔn)的檢測方法進(jìn)行了檢 測并證實其對乙肝表面抗原、抗-HCV、抗-HIV1和抗-HIV2的檢測呈陰性。然而，由于任何 已知的檢測方法都無法保證樣本中完全不存在傳染性成份，因此所有人源性產(chǎn)品都應(yīng)該被視 為具有生物危害性的傳染性物質(zhì)而謹(jǐn)慎處理。試劑含有疊氮鈉，必須小心處理：禁止入口或與皮膚、黏膜接觸！如要倒在下水道里，請用 大量的水沖刷，以防疊氮化物積聚。與銅、鉛等重金屬接觸時，疊氮鈉可能形成具有爆炸性 的疊氮化物。Instrument 儀器儀器品牌：SIEMENS儀器型號：BN

11、 ProSpec特定蛋白分析系統(tǒng)儀器主要測定參數(shù)：詳見每批試劑定標(biāo)信息打印文件。Procedure操作步驟樣本操作：樣本用量：對原試管，其上清血清/血漿必須比沉淀細(xì)胞或分離膠高出大約10mm，如果使用12X 75mm試管，大約需要450500ul。上機：標(biāo)本離心后按照試管的直徑選擇白色或黑色的適配器。將樣本管往下按到樣本節(jié)段適 配器的底部。然后由操作人員上機檢測，具體操作參見BN ProSpec特定蛋白分析系統(tǒng)操作 規(guī)程，BN ProSpec特定蛋白分析系統(tǒng)會自動將血清樣本與N稀釋液按1： 5的比例稀釋并 進(jìn)行測量。如果測得的讀數(shù)超過了測量范圍，可以使用更高或更低的稀釋比例重復(fù)檢測。室內(nèi)質(zhì)控：

12、每次建立參考曲線后、首次打開試劑瓶后以及每運行一輪血清標(biāo)本后，都檢測N/T 蛋白質(zhì)控品SL/L、M和H，.這些質(zhì)控項目將與病人標(biāo)本一樣來檢測和評估。定值和質(zhì)控范圍 列于相應(yīng)質(zhì)控項目的定值表中。如果質(zhì)控項目的結(jié)果超出了質(zhì)控范圍，必須重復(fù)測試。如果重 復(fù)測試證實了偏差，應(yīng)建立新的參考曲線。在確定并校正偏差原因前不要發(fā)布患者的檢測結(jié)果。校準(zhǔn)：參考曲線是通過多點定標(biāo)建立的。儀器能使用N稀釋液自動準(zhǔn)備N蛋白標(biāo)準(zhǔn)品SL的系 列稀釋液。標(biāo)準(zhǔn)的稀釋液必須在4小時內(nèi)使用。只要準(zhǔn)確性質(zhì)控項目，即N/T蛋白質(zhì)控品SL/L、 M和H的值在它的可信區(qū)間內(nèi)，就一直可以使用該參考曲線。如果使用另一個批號的抗血清， 則必須建

13、立新的參考曲線。Precautions and Warnings 操作注意事項標(biāo)本中的渾濁和顆?？赡芨蓴_測量結(jié)果。因此，含有顆粒的標(biāo)本必須在檢測前進(jìn)行離心沉淀。切勿使用通過離心處理（在大約15000Xg下10分鐘）不能澄清的脂血標(biāo)本。在儲存期間，N抗血清可能會出現(xiàn)沉淀或混濁，在這種情況下，抗血清應(yīng)經(jīng)過過濾后使用。建 議使用孔徑為0.45 M m的濾器。Calculations 計算方法儀器的logit-log函數(shù)自動求出結(jié)果。Reference Range 參考范圍前白蛋白的參考范圍：0.2-0.4g/LOperating Performance 操作性能檢測范圍：準(zhǔn)確的測量范圍取決于每一批N

14、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品SL中蛋白的濃度。若要了解典型數(shù)值 請參閱BNP系統(tǒng)操作手冊。靈敏度：由參考曲線的下限決定，因此取決于N蛋白標(biāo)準(zhǔn)SL中蛋白的濃度。典型的測量范圍 參考BN ProSpec特定蛋白分析系統(tǒng)操作手冊精密度：在BN系統(tǒng)上用N抗血清人前白蛋白試劑按全國臨床試驗標(biāo)準(zhǔn)委員會指導(dǎo)原則EP5-A 進(jìn)行方差分析。檢測內(nèi)分析的變異系數(shù)（n=30）為1.9%，檢測內(nèi)分析的變異系數(shù)為（n=10） 為 1.4%。特異性：N抗血清對相應(yīng)蛋白是特異。方法學(xué)比較：用N抗血清人前白蛋白在BN系統(tǒng)（y）上用放射免疫擴散（x）（Partigen）方法 對49個血清樣品，進(jìn)行測量比較，結(jié)果相關(guān)系數(shù)為0.99, y軸截距為0

15、.017g/L，斜率為0.84。Limitations of Procedure 方法局限性由于工藝技術(shù)的原因和/或標(biāo)本的老化，質(zhì)控標(biāo)本和實驗室間質(zhì)評標(biāo)本所得到的結(jié)果可能因使用 的檢測方法不同而有出入，因此可能有必要結(jié)合具體方法的靶值來對這些結(jié)果進(jìn)行評估。標(biāo)本中的混濁和顆?？赡芨蓴_測量結(jié)果。因此，含有顆粒的標(biāo)本必須在檢測前進(jìn)行離心沉淀。 標(biāo)本中牛血清白蛋白（即質(zhì)控標(biāo)本）可能干擾測量結(jié)果。Clinical Significance 臨床意義前白蛋白分子量54000萬，由肝細(xì)胞合成，測定PA在血漿中的濃度，對于了解蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良 和肝功能障礙，比白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白具有更高的敏感性。前白蛋白除了作為組

16、織修補的材料外， 還可視作一種運輸?shù)鞍踪|(zhì)，可結(jié)合T3和T4,而對T3的親和力更大。前白蛋白與視黃醇結(jié)合蛋 白（RBP）形成1: 1的復(fù)合物，具有運載維生素A的作用。在靶細(xì)胞，攝取的視黃醇通過PA-RBP 復(fù)合物的解離，分解成前白蛋白和視黃醇蛋白。血清前白蛋白濃度降低：（1）血清前白蛋白是一種負(fù)急性時相反應(yīng)蛋白，在炎癥和惡性疾病時其 血清水平下降。據(jù)報告，手術(shù)創(chuàng)傷后24 h即可見血清前白蛋白水平下降，2 -3天時達(dá)高峰， 其下降可持續(xù)1周。（2）前白蛋白在肝臟合成，各類肝炎、肝硬化致肝功能損害時，由于合成 減少，血清前白蛋白水平降低，是肝功能障礙的一個敏感指標(biāo)，對肝病的早期診斷有一定的價值。 （3）前白蛋白和視黃醇結(jié)合蛋白可作為蛋白質(zhì)營養(yǎng)狀況的