微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范

1、1117微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范引言微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范包括以下方面：無菌保障技術(shù)，培養(yǎng)基質(zhì)控，實(shí)驗(yàn)用菌株質(zhì)控，儀器設(shè)備質(zhì)控，嚴(yán)格的記錄程序，實(shí)驗(yàn)室數(shù)擬評估體系以及實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)制度。由于微生物測定數(shù)據(jù)的不可重復(fù)性和變異性是客觀存在的，所以客觀公正的方法和嚴(yán)格執(zhí)行GLP規(guī)范是保證微生物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)時(shí)可信和重現(xiàn)的重要前提。培養(yǎng)基的配制和質(zhì)量控制培養(yǎng)基配制絕人多數(shù)的微生物實(shí)驗(yàn)需要用到培養(yǎng)基。供微生物實(shí)驗(yàn)室用的培養(yǎng)基的質(zhì)量控制是微生物實(shí)驗(yàn)室正常運(yùn)轉(zhuǎn)的保障。通過控制培養(yǎng)基配制、貯藏條件和質(zhì)量測試環(huán)節(jié)，實(shí)現(xiàn)對“微生物實(shí)驗(yàn)室專用培養(yǎng)基”質(zhì)量控制。選擇正確的成品培養(yǎng)基，或基于文獻(xiàn)或使用公認(rèn)的配方，正確選擇培養(yǎng)基組分對于微生

2、物實(shí)驗(yàn)是至關(guān)重要的。培養(yǎng)基生產(chǎn)商提供的培養(yǎng)基產(chǎn)品都應(yīng)具有培養(yǎng)基配方和使用說明，且這些信息僅是針對脫水培養(yǎng)基或預(yù)制培養(yǎng)基產(chǎn)品制定。通常，不同種類的培養(yǎng)培養(yǎng)基可能會有不同制劑方法，例如加熱、使用添加組分、調(diào)節(jié)pH等。所以為了保證培養(yǎng)基質(zhì)量，必須按照產(chǎn)品說明書要求配制培養(yǎng)。預(yù)制培養(yǎng)基必須明確標(biāo)識其失效期和保存條件，同時(shí)也得滿足該培養(yǎng)基“促生長實(shí)驗(yàn)”和“選擇性實(shí)驗(yàn)”中涉及的質(zhì)控菌株的生長要求。水是微生物用培養(yǎng)基配制中最常用的配制溶劑。通常用純化水，在某些特殊情況下也使用去離子水和蒸餾水配制培養(yǎng)基。嚴(yán)格記錄配制各種培養(yǎng)基所用水的體積。準(zhǔn)確稱量脫水成品培養(yǎng)基成培養(yǎng)基的各組分，是培養(yǎng)基配制重新性的保證。稱量

3、培養(yǎng)基的天平需經(jīng)過嚴(yán)格的校準(zhǔn)，并且滿足稱量量程的要求（參見分析天平稱量要求1251）。必須保證稱量容器和工具（如稱樣勺）的潔凈程度，以避免外源物進(jìn)入從而造成培養(yǎng)基組成的改變。嚴(yán)格記錄稱樣重量。脫水培養(yǎng)基在滅菌和分裝之前，需保證培養(yǎng)基組分在水中充分分散均勻。由于培養(yǎng)基有一定的熱敏感性，因此對于必須加熱溶解的培養(yǎng)基，要特別注意不宜過度加熱。培養(yǎng)基配制過程中使用到的儀器，必須具備溫度可控、恒壓和可充分混勻的特點(diǎn)。培養(yǎng)基顏色變深（多為梅拉德反應(yīng)或非酶褐變反應(yīng)）通常是加熱過度的指征。當(dāng)培養(yǎng)基需要添加某組分時(shí)，應(yīng)保證加入的組分在培養(yǎng)基中充分分散均勻。如果配制培養(yǎng)基的玻璃容器潔凈程度不夠.就可能向培養(yǎng)基中引

4、入抑菌物質(zhì)。由玻璃容器不潔凈引入的抑菌物質(zhì)，主要是玻璃器皿清洗后殘留的去垢劑，或是前一次使用后殘留的有抑菌性的樣品。所以，必須嚴(yán)格設(shè)定清洗程序以去除殘留的污染物和外源性成分，確保使用純化水徹底清除殘留的去垢劑。具體參見“玻璃器皿清洗法1051”中的相關(guān)指導(dǎo)原則。培養(yǎng)基的滅菌程序，應(yīng)該嚴(yán)格按照生產(chǎn)商提供的滅菌條件和參數(shù)進(jìn)行，使用者也可以采自行驗(yàn)證過的來菌程序滅菌。商品化的預(yù)制培養(yǎng)基必須提供該培養(yǎng)基采用的滅菌參數(shù)文件。如果企業(yè)能夠提供某公認(rèn)的生物指示劑條件下，該培養(yǎng)基的無菌保障水平（SAL）,那其滅菌參數(shù)就更有實(shí)際意義。高壓蒸汽滅菌是常用的滅菌技術(shù)，但是當(dāng)培養(yǎng)基中有熱不穩(wěn)定的組分時(shí)，則應(yīng)采用煮沸的

5、方式滅菌。當(dāng)然，對于某些特殊的培養(yǎng)基，薄膜過濾除菌是更為有效的滅菌方式。具體培養(yǎng)基滅菌方法和參數(shù)的有效性，需要通過“培養(yǎng)基無菌性”和“培養(yǎng)基的促生長實(shí)驗(yàn)”來證明。此外，在選定載荷量和載樣體積條件進(jìn)行濕熱滅菌時(shí)，高壓滅菌程序應(yīng)通過驗(yàn)證保證合理的熱分布，以達(dá)到滅菌的目的。通常，生產(chǎn)商邰推薦T21C,15分鐘”的滅菌條件，前提是高壓滅菌鍋已經(jīng)通過驗(yàn)證程序的檢查，所謂參數(shù)，也就是某培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和溫度。由于滅菌鍋的裝載量與方式影響加熱速率，當(dāng)載樣量大時(shí)通常需要延長滅菌時(shí)間，滅菌時(shí)間應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基的體積和和高壓滅菌鍋的裝載情況而變化。升/降溫速率太慢的滅菌鍋可能會導(dǎo)致培養(yǎng)基過度加熱。因此，只能通過滅菌程

6、序驗(yàn)證過程，才能實(shí)現(xiàn)對上述環(huán)節(jié)的合理控制，制定出符合要求的最低無菌保障水平（SAL）,既能滿足培養(yǎng)法的滅菌要求，又可避免由于加熱過度導(dǎo)致的培養(yǎng)基降解變化。濕熱滅菌結(jié)束，待高壓鍋冷卻后應(yīng)立即取出培養(yǎng)基，不宜在高壓滅菌鍋中存放培養(yǎng)基。無論對于商品化培養(yǎng)基還是實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基，不適宜的加熱、滅菌參數(shù)都可能導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變化、澄明度下降、凝膠強(qiáng)度改變或是pH值偏離廠商提供的酸度范圍。每批培養(yǎng)基的酸度都應(yīng)在滅菌后，冷卻至室溫（25C）無菌條件下取樣，測定。通常，平面pH電極用于對固體培養(yǎng)基表面pH值的測定，插入式pH電極則多用于液體培養(yǎng)基酸度的測定。pH計(jì)的校準(zhǔn)和使用參見pH值測定法791中的指導(dǎo)原則。

7、通常，商品培養(yǎng)基滅菌后pH值應(yīng)該在生產(chǎn)商提供的酸度值0.2的范圍內(nèi)；特殊情況下，如驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明某培養(yǎng)基的酸度值范圍可以較寬，那么就可以接受更大范圍的酸度偏離。使用預(yù)制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)在其包裝試管或平皿）標(biāo)識處注意以下幾點(diǎn)：盛放培養(yǎng)基的容器或蓋子是否裂縫；平皿內(nèi)培養(yǎng)基共表面是否平整；固體培養(yǎng)基是否因?yàn)槊撍鴮?dǎo)致開裂或表面塌陷；血瓊脂平板是否有溶血現(xiàn)象；顏色基否過深，顏色是否與以往不同；是否有出于冰凍可能造成的結(jié)晶析出；是否有過多的氣泡：是否長菌；氧化還原試劑的狀態(tài)（僅針對對某些特殊培養(yǎng)基）記錄并檢查培養(yǎng)基批號及效期；培養(yǎng)基的無菌性；平皿的潔凈程度（蓋子不應(yīng)該接觸到平皿內(nèi)部）。培養(yǎng)基的貯藏了解培養(yǎng)基在

8、使用之前（生產(chǎn)商、銷售商）對其運(yùn)輸和保存的條件，對于使用者十分重要。對于預(yù)制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基生產(chǎn)商應(yīng)確保環(huán)境條件（如溫度控制、物理保護(hù)）避免其水分的揮發(fā)。培養(yǎng)基商品應(yīng)該淸楚標(biāo)識出該產(chǎn)品的名稱、生產(chǎn)批號、制備日期、效期等信息。實(shí)驗(yàn)室成按照制造商產(chǎn)品說明書的要求貯藏培養(yǎng)基。自制培養(yǎng)基應(yīng)置于驗(yàn)證過的保存條件下保存。由于低溫冷凍會破壞瓊脂的結(jié)構(gòu)，困此含瓊脂的培養(yǎng)基保存溫度不得低于0C,且通常作避光和低溫環(huán)境中保存。若要長期保存，應(yīng)置于無菌密閉的容器或袋子中，以減緩水分揮發(fā)、防止水分流失。已滅菌但未使用完的固體培養(yǎng)基凝固后，只能再融化一次使用。因?yàn)椋俅渭訜岷蜐撛诘奈廴疽呀?jīng)使得培養(yǎng)搞的效力降低。微波爐和電

9、加熱板是最常用的兩種培養(yǎng)基融化方式。但使用時(shí)，要特別留意避免過度加熱對培養(yǎng)基造成的破壞，也要注意加熱后玻璃器皿和其中培養(yǎng)基可能對實(shí)驗(yàn)室人員造成的劃傷、燙傷等。通常推薦采用水浴和常壓蒸汽法再融化培養(yǎng)基。融化好的瓊脂培養(yǎng)基在4550C的水浴環(huán)境是保溫不得超過8小時(shí)；在傾注培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)特別注意避免將器皿外表面的水帶入無菌培養(yǎng)基。操作時(shí)應(yīng)先擦干培養(yǎng)基容器的外表面，再進(jìn)行傾注。對用畢培養(yǎng)基（包含超過效期）的處置應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。質(zhì)控實(shí)驗(yàn)微生物生長用培養(yǎng)基由各種不同的組分組成，為了便于使用，各實(shí)驗(yàn)室可以購買干粉培養(yǎng)基自行配制或者直接購買商品化的預(yù)制培養(yǎng)基（常用平板或玻璃容器保存）。培養(yǎng)基制

10、造商應(yīng)努力從培養(yǎng)基生物原材料的來源方面實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，但各種來源于自然界的原材料的差異是不可避免。因此，培養(yǎng)基批次間的差異性是客觀存在，且不能忽視的。無論是實(shí)驗(yàn)室的自制基養(yǎng)基還足商品化的預(yù)制培養(yǎng)基，其配制過程都是影響培養(yǎng)基質(zhì)量的決走因素。不正確的培養(yǎng)基配制過程可能會造成微生物生長條件不適合，或是回收中，結(jié)果異常，導(dǎo)致不可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所有已制備好且可直接使用的培養(yǎng)基必須進(jìn)行質(zhì)控實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室自配培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)測項(xiàng)目有pH、促生長實(shí)驗(yàn)，通過定期的穩(wěn)定性檢査以確定有效期。如果沒有其他的相關(guān)指導(dǎo)文件，實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作保證培養(yǎng)基配制的合理性，并且經(jīng)過已驗(yàn)證的滅菌程序滅菌，此時(shí)，采用同批干粉培養(yǎng)基配制的

11、培養(yǎng)基僅需要進(jìn)行一次促生氏能力檢査即可。如果培養(yǎng)基的配制過程沒有得到驗(yàn)證，那么同批配制的培養(yǎng)基都應(yīng)該進(jìn)行促生氏能力測試。促生長能力測試用的試驗(yàn)菌株，可以使用藥典在培養(yǎng)基促生長能力測試相關(guān)章節(jié)中規(guī)定的菌株，也可以使用從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中分離的常見的污染菌株。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應(yīng)符合培養(yǎng)基促生長能力測試的要求。但是，培養(yǎng)基的效期僅取決于其在一定存放條件下（如包裝種類、密封方式等）培養(yǎng)基組分和配方總體的穩(wěn)定性。當(dāng)培養(yǎng)基促生長能力測試不符合規(guī)定時(shí)，應(yīng)尋找不合格的原因以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合促生長實(shí)驗(yàn)要求的培養(yǎng)基均不能使用。些診斷試劑可協(xié)助鑒別微生物，例如革蘭染色劑以及氧化酶試劑。和培養(yǎng)基質(zhì)控過程一樣

12、，對這些常用試劑也要建立相應(yīng)的質(zhì)控指標(biāo)。在使用上述試劑對未知樣本進(jìn)行測試之前，應(yīng)按照制造商的建議選擇正確的微生物完成試劑的質(zhì)控程序。用于無菌檢查的培養(yǎng)基，應(yīng)對其滅菌條件和貯存環(huán)境嚴(yán)格監(jiān)控（參見無菌檢查法中的要求）。用于環(huán)境監(jiān)控的培奍基必須特別防護(hù)，最好采用經(jīng)過終端滅菌并且具備雙層包裝；如不能采用終端滅菌，使用前應(yīng)進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，并在受控的潔凈環(huán)境下檢查，以防止將外來的污染物帶入受控環(huán)境，從而防止假陽性結(jié)果。使用觸皿監(jiān)測環(huán)境時(shí)，應(yīng)適當(dāng)提高培養(yǎng)基中瓊脂的含量。菌種保存生物樣本是最復(fù)雜的樣本之一。由于微生物具有可變異性，并且其特性依賴于適宜的實(shí)驗(yàn)操作和貯藏條件，因此通過對實(shí)驗(yàn)室菌種處理和保藏程序的標(biāo)準(zhǔn)化

13、，可以最大限度降低菌種被污染的概率，并使其生長特性改變最小化。按統(tǒng)一的操作程序制備菌株是保證微生物實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致性的重要環(huán)節(jié)。常規(guī)實(shí)驗(yàn)用到的菌種通常來源于國家菌種保藏中心，菌種可能處于冷凍、冷凍干燥、斜面或可直接使用等各種形式。對菌株進(jìn)行質(zhì)控實(shí)驗(yàn)之前，應(yīng)明確測試菌株的純度和種屬，對實(shí)驗(yàn)室常用菌種的鑒定，更應(yīng)如此。對實(shí)驗(yàn)中常用菌種的鑒定，最好采用適宜的技術(shù)將目標(biāo)菌株鑒定至種或基因水平。菌株的復(fù)蘇和制備應(yīng)參照供應(yīng)商提供的或已經(jīng)過確證的方法。通常采用“種子批”技術(shù)對菌種進(jìn)行傳代。國家菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)在適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行復(fù)蘇和生長。標(biāo)準(zhǔn)菌株保存時(shí)，可將培養(yǎng)物分散在抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小

14、瓶；使用之前將其貯藏于-30C以下。采用低于-70C或者低溫冷凍干燥法保存菌株，可以大大延長菌種的保存時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株用于制備需每月或每周一次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌株一旦解凍用的種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。未使用部分應(yīng)丟棄，以避免活力喪失或貯藏中可能被污染。工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制以防止過度傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。工作菌株的1代是指將有活力可繼續(xù)生長的菌種接種到可供微生物生長的新鮮培養(yǎng)基的過程。任何形式的接種過程均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備（培養(yǎng)箱、水浴鍋以及高壓滅菌設(shè)備等）都應(yīng)具備標(biāo)準(zhǔn)的認(rèn)證程序，包括對來源資質(zhì)的審查、標(biāo)準(zhǔn)操作程序的確認(rèn)以及性能測試。每年

15、一次的期間是必需的。對于新購置的儀器，需要經(jīng)質(zhì)量監(jiān)管部門的（QAU）核查后才能在實(shí)驗(yàn)室使用。此外，應(yīng)建立培養(yǎng)箱、冰箱以及水浴鍋的定期清潔和消毒機(jī)制，將實(shí)驗(yàn)室存在的潛在微生物污染最小化。定期檢查冰箱和培養(yǎng)箱的密封封條，確保其潔凈度和密封性能，如有問題及時(shí)維修。微生物實(shí)驗(yàn)室所使用的儀器（pH計(jì)或分光光度計(jì)等）應(yīng)按照日常使用的情況進(jìn)行定期校準(zhǔn)并記錄。校準(zhǔn)的周期和校驗(yàn)的內(nèi)容應(yīng)根椐儀器的類型和其在實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的數(shù)椐的重要程度分別進(jìn)行控制。試驗(yàn)設(shè)備（如冰箱和培養(yǎng)箱）可用于無菌檢測用培養(yǎng)基以及無菌檢測樣品的培養(yǎng)和存放.也可用于活體微生物的培養(yǎng)存放。因此，盡管保持其清潔的程序較為繁瑣，但也應(yīng)保證這些設(shè)備的潔凈，

16、以最大限度地降低其在使用過程中可能導(dǎo)致的污染。高壓滅菌設(shè)格通常是微生物實(shí)驗(yàn)室工作的核心，因此對此類設(shè)備應(yīng)具備合理的驗(yàn)證程序文件保證各種實(shí)驗(yàn)活動中滅菌過程的有效性。應(yīng)分別在不同的滅菌設(shè)故設(shè)備中完成工作用的潔凈培養(yǎng)基的滅菌程序和廢棄培養(yǎng)基的滅菌程序。要求采用不同的滅菌設(shè)備并非出版對無菌產(chǎn)品和微生物活體應(yīng)分別來菌的要求，而是出于對實(shí)驗(yàn)室溯源的考慮（參考下文）。實(shí)驗(yàn)室布局及運(yùn)行實(shí)驗(yàn)室布局和運(yùn)行應(yīng)充分兼顧滿足微物GLP實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)操作以及實(shí)驗(yàn)室安全的要求。實(shí)驗(yàn)室的布局設(shè)計(jì)應(yīng)最大限度防止可能的微生物交叉污染并防止檢驗(yàn)過程可能對環(huán)境和人員所造成的危害。通常，實(shí)驗(yàn)室成劃分成相應(yīng)的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域。無菌產(chǎn)

17、品保存及培養(yǎng)的區(qū)域應(yīng)盡可能滿足無菌要求。若潔凈區(qū)域與活菌操作區(qū)域不能完全分離，也應(yīng)采取其他的保障手段或滅菌手段降低發(fā)生意外污染的可能。這些防護(hù)手段包括防護(hù)服、清潔與滅菌程序以及無菌操作專用的生物安全柜。此外，還應(yīng)配備防止活菌意外泄漏的設(shè)施，并且應(yīng)對相關(guān)操作人員進(jìn)行培訓(xùn)。實(shí)驗(yàn)部分樣品會檢出有微生物生長，此時(shí)應(yīng)進(jìn)一步對其鑒別，以得到更詳盡的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。一旦發(fā)現(xiàn)有微生物生長，樣品成立即從潔凈區(qū)域轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室的活菌操作區(qū)域進(jìn)行轉(zhuǎn)種、染色、鑒別及其他確定實(shí)驗(yàn)。任何出現(xiàn)微生物生長的樣品不得在實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)域打開。對染菌的樣品以及其他實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)進(jìn)行有效地隔離以減少假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)人員需采取特殊的防護(hù)措施

18、，穿戴防護(hù)手套才能進(jìn)入活菌操作區(qū)工作，工作完成后應(yīng)仔細(xì)消毒雙手后再退出。理論上，處于無菌操作工作狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)人員不應(yīng)再進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室活菌操作間工作。如果未采用無菌保障預(yù)預(yù)防措施（無菌操作），由于保障環(huán)節(jié)的不夠可能造成樣品被微生物污染，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)注意所有的物品均應(yīng)處于受控條件下操作，例如適宜的更衣系統(tǒng)和無菌取樣裝置。盡管對實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境下的功能系統(tǒng)進(jìn)行無菌采樣監(jiān)測（例如水循環(huán)體系）的可行性不大，但若不在無菌操作條件下完成取樣，結(jié)果的可靠性就會很大程度的降低。環(huán)境采樣時(shí)，取樣過程中應(yīng)盡可能的使用消毒滅菌技術(shù)處理取樣設(shè)備。如果可能的話，最好在取樣杯境中安裝環(huán)境采樣儀器和采樣用的微生物培

19、養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)室工作的所有關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)過程都應(yīng)在可控條件下進(jìn)行，例如對于終產(chǎn)品制劑、散狀產(chǎn)品的無菌檢查，微生物產(chǎn)品或傳代細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品。也可以在隔離器中進(jìn)行微生物學(xué)檢查。與有人為因素參與的無菌間相比，實(shí)隔離器中出現(xiàn)被環(huán)境微生物污染的概率大大降低，出現(xiàn)假陽性結(jié)果的機(jī)會也更小。隔離器應(yīng)使用化學(xué)消毒劑進(jìn)行消毒滅菌，為保證環(huán)境的完整性并且防止假陽性結(jié)果，消毒后的隔離器應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證再使用。（參見“無菌檢查隔離器系統(tǒng)的驗(yàn)證”中的相關(guān)指導(dǎo)原則。）樣品處理從水、環(huán)境監(jiān)控和樣品中分離出的活體微生物樣本對處理方法和保存條件都比較敏感。在上述情況下，樣品組分、容器成分、保存時(shí)間和保存溫度等條件對分離到的微生物樣本而言都是較為嚴(yán)

20、苛刻的臨界條件，所以，應(yīng)當(dāng)盡量縮短從供試品制備到樣品測試的時(shí)間間隔，并控制環(huán)境條件，保證其盡時(shí)能的適立微生物生長，如果供試樣品需要經(jīng)過轉(zhuǎn)移后再進(jìn)行測試，轉(zhuǎn)移的條件（如時(shí)間、溫度）都應(yīng)該經(jīng)過嚴(yán)格的驗(yàn)證，以保證轉(zhuǎn)移條件適用于樣品和實(shí)驗(yàn)。關(guān)于水測試的指導(dǎo)原則，參見制藥用水相關(guān)內(nèi)容。測試取樣前對樣品的混勻過程，應(yīng)確保對供試樣品液體中微生物的分散和復(fù)蘇。對于需要進(jìn)行微生物檢查的樣品，無論是進(jìn)行無菌實(shí)驗(yàn)或是限度檢查，都應(yīng)該經(jīng)過表面消毒處理。如果條件允許，對供試樣品的處理應(yīng)該在潔凈環(huán)境下的特定區(qū)域完成，并且該區(qū)域應(yīng)該盡可能地接近檢測區(qū)域，盡可能減少傳遞過程中可能引入的污染。進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室的樣品應(yīng)具備相關(guān)的

21、文件資料，包括樣品的詳細(xì)來源、收檢日期、報(bào)告提交日期、經(jīng)手人、樣品提交部門以及樣品中是否存在危險(xiǎn)因素等信息。收檢部門應(yīng)確認(rèn)樣品資料，并且核對樣品名稱、編號等相關(guān)信息。微生物檢查用培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間微生物實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)時(shí)間少于3天，用小時(shí)表示，如“在3035C培養(yǎng)1872小時(shí)”當(dāng)測試時(shí)間大于72小時(shí)，用天表示，如“在3035C培養(yǎng)35天”使用小時(shí)表示培養(yǎng)時(shí)間時(shí),培養(yǎng)時(shí)間不得少于最少培養(yǎng)時(shí)間；當(dāng)滿足培養(yǎng)時(shí)間的最大值時(shí)，通?？梢缘玫捷^好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)以天為單位表示培養(yǎng)時(shí)間時(shí)，培養(yǎng)若始于某天上午或下午，那么結(jié)束時(shí)也應(yīng)該滿足培養(yǎng)天數(shù)后那一日的相同時(shí)間。人員培訓(xùn)每個(gè)參與藥品生產(chǎn)的人員均應(yīng)具有一定的培訓(xùn)教育背景，使

22、其擁有一定的工作經(jīng)驗(yàn)。從事微生物實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員以及其監(jiān)管者也應(yīng)具有一定的微生物或相關(guān)的生命科學(xué)背景，應(yīng)按照他們的技能水平與經(jīng)驗(yàn)賦予其各自的職權(quán)。微生物實(shí)驗(yàn)天之驕子在運(yùn)行中必須具備完整的標(biāo)準(zhǔn)操作（SOP）系統(tǒng)。在培訓(xùn)中必須明確該系統(tǒng)具有兩個(gè)目的。首先，SOP是必須遵循的操作規(guī)程，微生物實(shí)驗(yàn)人員通過對其學(xué)習(xí)才能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確和重現(xiàn)。其次，實(shí)現(xiàn)對特定的微生物實(shí)驗(yàn)人員所進(jìn)行過的SOP培訓(xùn)進(jìn)行追蹤，通過SOP編號或者名稱可知曉該人民是否接受了符合其工作職能的培訓(xùn)。應(yīng)針對每個(gè)不問崗位的實(shí)驗(yàn)人員制定不同的培訓(xùn)計(jì)劃。在其有資質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，實(shí)驗(yàn)人員不能獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)。培訓(xùn)記錄應(yīng)時(shí)時(shí)更新，并針對特定微生物實(shí)驗(yàn)

23、的SOP進(jìn)行適當(dāng)修改后，再記錄實(shí)驗(yàn)人員的培訓(xùn)情況。定期績效評估是數(shù)據(jù)質(zhì)控的明智選擇。它應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)室核心實(shí)驗(yàn)人員的技能，例如無菌技術(shù)，文件管理以及其他微生物實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)技能。微生物實(shí)驗(yàn)管理人員也應(yīng)進(jìn)行內(nèi)部培訓(xùn)，例如：管理技能，實(shí)驗(yàn)室安全，實(shí)驗(yàn)安排，預(yù)算，實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評估和數(shù)椐偏差的調(diào)查，技術(shù)報(bào)告的書寫以及其他實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行所必需的培訓(xùn)。能力是需要通過專業(yè)學(xué)習(xí)，工作經(jīng)驗(yàn)和定期的培訓(xùn)累計(jì)形成的。獲得專業(yè)授權(quán)機(jī)構(gòu)的資質(zhì)認(rèn)證是能力素質(zhì)的一種體現(xiàn)。此外，實(shí)驗(yàn)室的主管和管理人員也應(yīng)具備認(rèn)證機(jī)構(gòu)的資格認(rèn)證證書，表明其可以勝任該實(shí)驗(yàn)室的管理工作。除科研工作和委托檢驗(yàn)外，微生物實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)可以通過很多途徑獲

24、得。每個(gè)單位都應(yīng)該建立對微生物實(shí)驗(yàn)人員資質(zhì)的考核程序，包括對其設(shè)計(jì)、執(zhí)行實(shí)驗(yàn)和微生物操作技能的評價(jià)。通過這些程序，才能保證技術(shù)操作人員能領(lǐng)會微生物學(xué)科的基本原理，確保技術(shù)人員對科學(xué)的符合方針和管理規(guī)范的理解。這些考核程序也應(yīng)有利用發(fā)揮有豐富理論基礎(chǔ)和實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)的人員的技能，且在相關(guān)專業(yè)領(lǐng)域幫助那些專業(yè)知識儲備水平不高的工作人員。微生物學(xué)與分析化學(xué)和工程學(xué)的理論基礎(chǔ)完全不同，是基于生物學(xué)原理違立的一門科學(xué)性較強(qiáng)的專業(yè)學(xué)科。正是由于該學(xué)科的特殊性，所以對于沒有經(jīng)過系統(tǒng)微生物學(xué)培訓(xùn)的人員，通常不能較好地勝任這項(xiàng)工作。實(shí)驗(yàn)室資源在實(shí)驗(yàn)室管理方面，實(shí)驗(yàn)室需要保證有足夠的資源滿足實(shí)驗(yàn)的需要。這就要求實(shí)驗(yàn)

25、室應(yīng)具備較強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)保障、預(yù)算管理和實(shí)驗(yàn)室業(yè)務(wù)決策等方而的能力。對實(shí)驗(yàn)室檢測活動頻次的統(tǒng)計(jì)是一種有效的管理方式，當(dāng)然僅靠這一點(diǎn)是不足以說明任何問題的。除了上述的跟蹤調(diào)查外，還可以追溯樣品收檢到檢驗(yàn)活動開始之間的時(shí)間及實(shí)驗(yàn)結(jié)束節(jié)提交報(bào)告的時(shí)間，如果在這些過程中存在略微延誤現(xiàn)象，則提示實(shí)驗(yàn)室工作人員末按照規(guī)矩執(zhí)行登記管理。實(shí)驗(yàn)室的管理也需要有足夠的物資保障，以保證檢驗(yàn)工作的需要。詳細(xì)的預(yù)算要求只能針對某一特定的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行制定，但由于預(yù)算計(jì)劃與與實(shí)驗(yàn)室的物資儲備直接相關(guān)，因此必須滿足實(shí)驗(yàn)室的各種物資保障，這樣才能確保測試結(jié)果的可信度。文件文件應(yīng)當(dāng)充分表明檢驗(yàn)任務(wù)是在實(shí)驗(yàn)室按可控的檢查方法進(jìn)行的。一般包

26、括以下方面：人員培訓(xùn)與資格確認(rèn)；設(shè)備驗(yàn)證，校準(zhǔn)和維修；設(shè)備使用中的運(yùn)行狀態(tài)（24小時(shí)運(yùn)轉(zhuǎn)記錄，或7天運(yùn)轉(zhuǎn)記錄）；培養(yǎng)基配制、無菌性檢查、促生長能力檢查以及選擇性評價(jià)；培養(yǎng)基的庫存記錄及質(zhì)控測試記錄；檢驗(yàn)規(guī)程中關(guān)鍵步驟的說明；數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計(jì)算的確認(rèn)；QAU或質(zhì)雖責(zé)任人對實(shí)驗(yàn)報(bào)告的評估；數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查（如需要）實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性依賴于實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)詳細(xì)說明如何進(jìn)行正確的實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)包含所有關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)細(xì)行，以便確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性。實(shí)驗(yàn)室原始記錄至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)?zāi)科?；檢品名稱；實(shí)驗(yàn)人員姓名；標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號；實(shí)驗(yàn)結(jié)果；偏差（存在時(shí)）；實(shí)驗(yàn)參數(shù)（所使用的設(shè)備，菌株，培養(yǎng)基批號）；主管/復(fù)核人簽名。實(shí)驗(yàn)中所使用的每一個(gè)關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)設(shè)備均應(yīng)記錄在案，備有校正的SOP以及維修記錄，并且應(yīng)該有近期的相關(guān)記錄。設(shè)計(jì)合理的設(shè)備日志或表格，以滿足實(shí)驗(yàn)記錄的追蹤性。設(shè)備（水浴、培養(yǎng)箱、滅菌鍋）溫度必須定期登記，具布可追溯性。管理的SOP中應(yīng)該明確記錄的修改原則，實(shí)驗(yàn)記錄寫錯(cuò)時(shí)，用單線劃掉并簽字。原來的數(shù)據(jù)不能抹去或被扭曲。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)包括原始菌數(shù)，以便復(fù)驗(yàn)者對實(shí)驗(yàn)結(jié)采進(jìn)行重新計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）中應(yīng)詳細(xì)記載數(shù)椐分析方法。如果記錄本中需要使用圖表進(jìn)行表述，那么這些圖表應(yīng)該被保護(hù)，不得在圖表頁中隨意添