實(shí)驗(yàn)二銀耳多糖含量測(cè)定

1、關(guān)于實(shí)驗(yàn)二銀耳多糖含量的測(cè)定第一張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握多糖含量測(cè)定的原理和方法。第二張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、實(shí)驗(yàn)原理多糖在濃硫酸中水解，進(jìn)一步脫水生成糖醛及其衍生物，與蒽酮（10-酮-9,19-二氫酮）反應(yīng)生成藍(lán)綠色復(fù)合物，在620nm處有最大吸收值。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液作標(biāo)準(zhǔn)，在620 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色，可計(jì)算出總糖的含量。第三張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）糖經(jīng)濃無(wú)機(jī)酸處理后，脫水生成糠醛或糠醛衍生物；第四張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）糠醛和糖醛衍生物在濃無(wú)機(jī)酸的作用下，能與蒽酮化合物反應(yīng)生成有

2、色物質(zhì)。 （3）反應(yīng)液顏色的深淺，反映出糖濃度的高低。第五張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月四、儀器、試劑與藥品試劑：0.1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品、蒽酮試劑、蒸餾水 樣品液：0.5 mg/ml試管、電爐、可見(jiàn)光分光度計(jì)、容量瓶 etc.第六張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月五、實(shí)驗(yàn)操作1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作(1) 加樣：(2) 將加好的樣品混勻，沸水浴10 min，室溫冷卻，于620 nm處比色。(3) 以第一管為空白，進(jìn)行比色。以光密度（OD值)為縱坐標(biāo)，糖的含量(g)數(shù)為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。第七張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2. 樣品的準(zhǔn)備稱取適量樣品，先加少量的

3、水溶解，最后定容于50 ml，至溶液濃度約為0.5 mg/ml.3. 樣品中多糖含量的測(cè)定分別吸取0.1、0.3 和0.5 ml樣品液，用蒸餾水補(bǔ)足1.00 ml。加入蒽酮試劑，同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作之操作，比色測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品濃度計(jì)算含量。第八張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第九張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月六、思考題1、根據(jù)樣品液多糖含量，計(jì)算實(shí)驗(yàn)一中多糖的提取率。2、根據(jù)蒽酮測(cè)糖原理，設(shè)計(jì)測(cè)定化合物中淀粉量的方案。第十張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月注意事項(xiàng)：加樣要求準(zhǔn)確。第十一張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)三 豬胃粘膜中提取胃膜素、胃酶第

4、十二張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)從豬胃粘膜中提取胃膜素、胃酶的原理和方法，了解有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀法的應(yīng)用。第十三張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、簡(jiǎn)介胃膜素 ：功效：一種以黏蛋白為主要成分的生物活性藥物，有極強(qiáng)的黏附作用，可直接作用于消化道內(nèi)壁，在胃及十二指腸潰瘍面形成一層保護(hù)膜，減少胃酸對(duì)它的刺激，利于潰瘍面的愈合；另一方面有潤(rùn)滑作用，使進(jìn)入消化道的食物易于在消化道內(nèi)移行，有利于減少某些物質(zhì)對(duì)潰瘍面的刺激。胃膜素臨床上用于胃及十二指腸潰瘍。性質(zhì)描述: 淡黃色或淡灰色粉末，或微小顆粒。著水脹為粘漿。顯微溶狀態(tài)，略帶類蛋白胨臭。具有很強(qiáng)的粘附力。 第十四張

5、，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月胃蛋白酶：存在于動(dòng)物胃液中，以無(wú)活性的胃蛋白酶原形式，存在于胃底的主細(xì)胞中，在酸性條件下，胃蛋白酶原變化成有消化蛋白質(zhì)能力的胃蛋白酶。在醫(yī)學(xué)上主要用于治療消化不良、食欲不振、慢性胃炎等，工業(yè)上可作水解蛋白用。干燥的胃蛋白酶為白色或淡黃色粉末，引濕性強(qiáng)，易溶于水；對(duì)熱較穩(wěn)定，100 10 min不破壞。水溶液中，70 以上破壞。第十五張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、實(shí)驗(yàn)原理胃粘膜一般指胃底粘膜，分泌胃液的主細(xì)胞集中在胃底粘膜，呈暗紅色，直徑約10-12厘米圓塊，約100 g。胃膜素是從豬胃粘膜經(jīng)胃蛋白酶和鹽酸消化后的上層液中，60%左右的乙醇

6、所沉淀的部分。蛋白質(zhì)、酶等極性物質(zhì)的水溶液加入與水混溶的有機(jī)溶劑，可沉淀析出。第十六張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月四、儀器、試劑與藥品 水浴鍋，攪拌器，冰箱，真空干燥，鹽酸，氯仿，丙酮，乙醇，離心機(jī)等。第十七張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月四、實(shí)驗(yàn)操作1.激活提取豬胃粘膜0.55 Kg（5只豬肚）+水約220 ml升（胃粘膜的40%），用1：1鹽酸調(diào)pH 2.5-3.0，45-50 攪拌提取3 h (在攪拌的過(guò)程中需注意不停的調(diào)節(jié)pH)。2.脫脂分層雙層紗布過(guò)濾，冷卻至室溫，緩慢加入約55 ml氯仿（胃粘膜的10 %），攪拌2 h，室溫靜置24 h后，放掉底層的氯仿和雜質(zhì)

7、，上清液預(yù)冷至5以下 第十八張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3. 胃膜素分離上清液在攪拌下（同一方向，否則胃膜素會(huì)散開(kāi)）緩緩加入預(yù)冷至5以下的丙酮（=0.708）至比重約0.97，撈出胃膜素，以適量的75%乙醇洗兩次，真空干燥。4.胃酶的沉淀母液再加丙酮至比重約0.91，有黃色沉淀產(chǎn)生，離心（4, 7000 rpm, 10 min)取沉淀，70以下真空干燥。第十九張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)四 胃蛋白酶活力的測(cè)定第二十張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握以牛血紅蛋白為底物的胃蛋白酶活力測(cè)定的原理和方法，掌握紫外分光光度計(jì)的使用。第二十一張

8、，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、實(shí)驗(yàn)原理胃蛋白酶能催化水解芳香環(huán)氨基酸連接的肽鍵。在一定條件下，可定量催化水解牛血紅蛋白產(chǎn)生不被三氯醋酸（TCA）所沉淀的酚基氨基酸（如酪氨酸）。酪氨酸在275nm波長(zhǎng)處有最大吸收，以酪氨酸為對(duì)照，可以求出胃蛋白酶活力。 第二十二張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、儀器、試劑與藥品水浴鍋，紫外分光光度計(jì)，酪氨基，鹽酸，三氯醋酸，牛血紅蛋白等。第二十三張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月四、實(shí)驗(yàn)操作1、對(duì)照品溶液的制備：精密稱取經(jīng) 105 干燥至恒重的酪氨酸適量，加鹽酸溶液取1 mol/l鹽酸溶液65 ml，加水至1,000 ml 制成

9、每1 ml 中含0.5 mg 的溶液，搖勻，備用。2、供試品溶液的制備：精密稱取實(shí)驗(yàn)三提取的胃酶干粉40-60 mg，用上述鹽酸溶液制成每1ml 中約含 0.2 0.4U 的溶液。（稱本品（一般3500U/g以上）40-60mg，用上述鹽酸溶液定容至100 ml，再取5 ml用上述鹽酸溶液定容至50 ml，即0.04-0.06 mg/ ml）。第二十四張，PPT共二十六頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、測(cè)定方法：取試管6 支，其中3 支各精密加入對(duì)照品溶液1ml ，另3 支各精密加入供試品溶液1ml ，置370.5 水浴中，保溫5 分鐘，精密加入預(yù)熱至370.5 的牛血紅蛋白試液5ml ，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在370.5 水浴中反應(yīng)10分鐘。立即精密加入5% 三氯醋酸溶液5ml ，搖勻，過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。另取試管2 支，各精密 加入血紅蛋白試液5ml ，置370.5 水浴中保溫10分鐘，再精密加入 5三氯醋酸溶 液5ml ，其中1 支加供試品溶液1ml ，另1 支加對(duì)照樣品鹽酸溶液1ml ，搖勻，過(guò)濾，棄初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對(duì)照品的空白對(duì)照，按照分光光度法在275nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，算出平均值S 和，按下式計(jì)算。 每g含蛋白酶活力單位數(shù)s10181.19式中：S 為對(duì)照品的平均吸收度；