核酸檢測實驗室污染原因及最權(quán)威處理方案

1、目前國內(nèi)所有二級以上綜合醫(yī)院都具備了核酸檢測能力，大部分醫(yī)院 也設(shè)立了 PCR實驗室，高強度的核酸檢測任務(wù)己然成為了我們檢驗人 的工作常態(tài)，但是，如果一旦出現(xiàn)實驗室污染，可能會造成假陽性結(jié)果， 導致結(jié)果不可信，甚至可能會危及實驗室工作人員安全。應(yīng)對核酸檢測 實驗室污染的最好辦法就是防范于未然，今天就帶大家了解一下實驗中 我們?nèi)绾伪苊夂蜏p少污染的產(chǎn)生以及處理污染。一、污染的產(chǎn)生在新冠病毒核酸檢測過程中，常見以下幾種污染類型:擴增片段的污染（產(chǎn)物污染）；天然基因組DNA的污染、試劑污染（貯存液或工作液） 以及樣本間交叉污染。核酸檢測實驗室污染的主要來源是擴增產(chǎn)物的污 染。實驗室應(yīng)通過以下途徑及時發(fā)

2、現(xiàn)污染：1、采用每次檢測過程至少3個陰性對照隨機置于臨床樣木中間參與提 取全過程。2、每天對實驗室內(nèi)空氣進行采樣監(jiān)測?？諝獗O(jiān)測范圍應(yīng)至少應(yīng)包括樣 木制備區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。3、定期對實驗室臺面、門把手、儀器設(shè)備表面進行取樣監(jiān)測。4、陽性樣本采用另外一到兩種更為靈敏且擴增不同區(qū)域的核酸檢測試劑對原始樣木進行復核檢測。二、污染的防控01嚴格實驗室功能分區(qū)原則上新冠病毒核酸檢測實驗室應(yīng)當設(shè)置以下區(qū)域:試劑儲存和準備區(qū)、 樣本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當合并。各區(qū)域在物理空間上應(yīng)當是完 全相互獨立的。傳遞窗滿足密封性要求，不能有空氣的直接相通。各項 檢測工作應(yīng)嚴格按相應(yīng)規(guī)定

3、在各自的區(qū)域內(nèi)進行，嚴禁在樣本制備區(qū)配 制試劑。各區(qū)的功能是：1、試劑儲存和準備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合 液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。2、樣本制備區(qū)：轉(zhuǎn)運箱的開啟，樣本的滅活（適用時），核酸提取及 其加入全擴增反應(yīng)管等。3、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴增和產(chǎn)物分析。確保實驗室人、物及空氣單向流動核酸檢測實驗室的人、物及空氣流向按照試劑儲存和準備區(qū)三樣木制備 區(qū)f擴增和產(chǎn)物分析區(qū)，防止擴增產(chǎn)物隨人流、物流及空氣進入擴增前 的區(qū)域?？諝饬飨驊?yīng)按照從試劑儲存和準備區(qū)f樣木制備區(qū)三擴 增區(qū)三 擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行。03實驗室檢測安全管理基本要求核

4、酸檢測應(yīng)當在生物安全二級實驗室進行，并應(yīng)在生物安全風險評估的 基礎(chǔ)上，采取適當?shù)膫€體防護措施，包括手套、口罩和隔離衣等。開展 新冠病毒核酸檢測的實驗室應(yīng)當制定實驗室生物安全相關(guān)程序文件及實 驗室生物安全操作失誤或意外的處理操作程序，并有記錄。實驗室前安全要求應(yīng)使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進行桌而、臺面及地面消毒。消毒液 需每天新鮮配制，不超過24小時。轉(zhuǎn)運至實驗室的標木轉(zhuǎn)運桶應(yīng)在生 物安全柜內(nèi)開啟。轉(zhuǎn)運桶開啟后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精對轉(zhuǎn) 運桶內(nèi)壁和標木采集密封袋進行噴灑消毒。取出標本采集管后，應(yīng)首先 檢查標本管外壁是否有破損、管口是否泄露或是否有管壁殘留物。確認 無滲漏后，

5、推薦用0.2%含氯消毒劑噴灑、擦拭消毒樣品管外表而(此處 不建議使用75%酒精，以免破壞標木標識)。如發(fā)現(xiàn)滲漏應(yīng)立即用吸水 紙覆蓋，并噴灑有效氯含量為0. 55%的含氯消毒劑進行消毒處理，不得 對標本繼續(xù)檢測操作，做好標木不合格記錄后需立即進行密封打包，壓 力蒸汽滅菌處理后銷毀。如為采樣管為非滅活管，實驗室操作人員在進行標本熱滅活時，溫浴前 需旋緊標木采集管管蓋，必要時可用封口膜密閉管蓋；溫浴過程中可每 隔10分鐘將標木輕柔搖勻1次，以保證標本均勻滅活；溫浴后標本需 靜置全室溫至少10分鐘使氣溶膠沉降，隨后再開蓋進行后續(xù)核酸提取。核酸提取和檢測安全要求標木進行核酸提取和檢測時應(yīng)盡可能在生物安全

6、柜內(nèi)進行操作。如為打 開標木管蓋或其他有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作，則必須在生物安全柜內(nèi)進 行。實驗室結(jié)束后清潔要求。需要對實驗室環(huán)境進行清潔，消除可能的核酸污染。實驗室空氣清潔。實驗室每次檢測完畢后，可采用房間固定和/或可 移動紫外燈進行紫外照射2小時以上。必要時可采用核酸清除劑等試劑 清除實驗室殘留核酸。工作臺而清潔。每天實驗后，使用0. 2%含氯消毒劑或75%酒精進行臺 而、地而清潔。生物安全柜消毒。實驗使用后的耗材廢棄物放入醫(yī)療廢物垃圾袋中， 包扎后使用0. 2%含有效氯消毒液或75%酒精噴灑消毒其外表面。手消 毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實驗室廢棄物轉(zhuǎn)運袋中。試管架、實 驗臺面、移液器等

7、使用75%酒精進行擦拭。隨后關(guān)閉生物安全柜，紫外 燈照射30分鐘。轉(zhuǎn)運容器消毒。轉(zhuǎn)運及存放標木的容器使用前后需使用0.2%含氯消 毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。塑料或有機玻璃材質(zhì)物品清潔：使用0.2%含氯消毒劑或過氧乙酸或 過氧化氫擦拭或噴灑。轉(zhuǎn)運容器消毒轉(zhuǎn)運及存放樣木的容器使用前后需使用有效氯含量為0. 2%的消毒劑或75%酒精進行擦拭或噴灑消毒。04強化實驗室檢測過程控制實驗室接到樣木后，應(yīng)當在生物安全柜內(nèi)對樣本進行清點核對。按照標 準操作程序進行試劑準備、樣本前處理、核酸提取、核酸擴增、結(jié)果分 析及報告。實驗室應(yīng)當建立可疑樣木和陽性樣本復檢的流程。試劑準備應(yīng)當選擇國家藥品監(jiān)督管理部

8、門批準的試劑，并在選擇樣本采樣管和核 酸提取試劑時，使用試劑盒說明書上建議的配套樣木采樣管和提取試劑。樣本滅活 己經(jīng)使用含肌鹽的滅活型樣本采樣管的實驗室，這一環(huán)節(jié)無需進行滅活 處理，直接進行核酸提取。使用非滅活型樣木采樣管的實驗室，可采用 56C孵育30分鐘熱滅活的處理方式。核酸提取將滅活后的樣木取出，在生物安全柜內(nèi)打開樣本采樣管加樣。核酸提取 完成后，立即將提取物進行封蓋處理。在生物安全柜內(nèi)將提取核酸力口 至PCR擴增反應(yīng)體系中。核酸擴增將擴增體系放入擴增儀，核對擴增程序是否與試劑說明書相符，啟動擴 增程序。擴增后的反應(yīng)管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，按 一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出實驗室處理

9、。三、污染的消除實驗室一旦發(fā)生污染，檢測工作應(yīng)立即停止，直到確認消除污染后才能 重新開始檢測。首先，要查找污染源和明確污染范圍。然后，根據(jù)污染 源和污染范圍采取有效的去污染措施，結(jié)合各種不同方法以達到最佳效 果。實驗室污染的處理：標木污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時：立即用吸水紙覆蓋，并使用0.55%含氯消毒劑進行噴灑消毒。消毒液需 要現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時內(nèi)使用。標木傾覆造成實驗室污染時：保持實驗室空間密閉，避免污染物擴散。立即使用潤濕有0. 55%含氯消 毒劑的毛巾覆蓋污染區(qū)。必要時仗大量溢撒時）可用過氧乙酸加熱熏 蒸實驗室，劑量為2g/m3，熏蒸過夜；或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠 噴需器噴霧，用量8ml/m3作用1-2