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文檔簡介

1、.1偶最近也在做RT-PCR。也正在設(shè)計跨含子的引物。在園子里看了些文獻，也請教了一些人。個人感覺主要是你找到這個基因的具體的含子和外顯子的位置后再設(shè)計引物一點也不難。只要在跨越的引物中選取條件好的就行了。其中對于如何找到含子和外顯子，偶是用以下的方法。一、首先登錄Pubmed找到你的基因序列，這個應(yīng)該很簡單。偶不多說。二、如以下圖進入Blastl界面，選取genomes中的相應(yīng)物種。 三將你的序列拷貝到查詢框中，進展查詢Begin search)。然后點擊format，一路點下去，出現(xiàn)以下圖樣的對話框。點擊genome view 然后點擊其相應(yīng)的染色體號，我查的是HIF基因，在14號染色體上

2、。相應(yīng)的染色體上會出現(xiàn)紅色的標記。 好了，如以下圖。你可以看到右邊的這些方框最后給的序列，就是外顯子的序列。你可以對著此來設(shè)計引物，找到哪些跨過含子的引物。 首先要明白：RT-PCR的引物之所以要跨含子設(shè)計，主要原因就是為了防止再PCR過程中基因組DNA的影響。則其實只要在提RNA時除去DNA也就沒什么關(guān)系了。RNA沉淀之后，在100ul反響體系中用RNAse free的DNAseI37C處理0.5h，然后直接用100ul氯仿抽提，異丙醇別忘了加1/10體積4M NaAc再次沉淀后用適量DEPC水溶解即可。NCBIGENE基因名稱搜索 (Click the picture to see the source)louischenPosts: 518 Score: 43 2004-07-30 06:57點擊基因名稱進入 左鍵擊NC_000019GRAPHICS intron，e*tron的排列，可以點擊進入 粗劃線為外顯子，并有對應(yīng)的protein編碼 還在./也可以，在主頁上輸入基因的名字，找出該物種的基因序列，在transvie

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