植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要成份

1、植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的主要成分1.無機(jī)營養(yǎng)物無機(jī)營養(yǎng)物 主要由大量元素和微量元素兩部分組成大量元素主要包括氮、 磷、鉀、鈣、鎂和硫六種氮源通常有硝態(tài)氮或銨態(tài)氮但在培養(yǎng) 基中用硝態(tài)氮的較多也有將硝態(tài)氮和銨態(tài)氮混合使用的。磷和 硫則常用磷酸鹽和硫酸鹽來提供。鉀是培養(yǎng)基中主要的陽離子 在近代的培養(yǎng)基中其數(shù)量有逐漸提高的趨勢。而鈣、鈉、鎂的 需要則較少。培養(yǎng)基所需的鈉和氯化物由鈣鹽、磷酸鹽或微量 營養(yǎng)物提供。微量元素包括碘、錳、鋅、鉬、銅、鉆和鐵這 些元素有的對生命活動的某個過程十分有用有的對蛋白質(zhì)或 酶的生物活性十分重要有的是參與某些生物過程的調(diào)節(jié)。培養(yǎng) 基中的鐵離子大多以螯合鐵的形式存在即FeSO4

2、與Na2EDTA螯合劑的混合。2.碳源培養(yǎng)的植物組織或細(xì)胞它 們的光合作用較弱。因此需要在培養(yǎng)基中附加一些碳水化合物 以供需要。培養(yǎng)基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖用 量通常為2-4高者可達(dá)5亦可用市售的白糖所代替但一般應(yīng)增 加用量而且最好用比較固定的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品以保證實驗的 穩(wěn)定性。3.有機(jī)營養(yǎng)成分包括人工合成或天然的有機(jī)附加物 包括維生素氨基酸及其它有機(jī)物質(zhì)等。最常用的有酪朊水解物 水解乳蛋白、水解酪蛋白CH、酵母提取物、玉米胚乳、麥芽 浸出物、西紅柿汁、椰子汁CM及各種氨基酸如甘氨酸氨基乙 酸等。維生素在培養(yǎng)基中加入維生素常有利于外植體的發(fā)育。 培養(yǎng)基中的維生素屬于B族維生素其中

3、效果最佳的有硫氨素 維生素B1、鹽酸吡哆醇維生素B6和維生素H生物素、泛酸 鈣等、肌醇環(huán)己六醇、煙酸。在部分培養(yǎng)基中還添加維生素 BX氨酰苯甲酸、維生素C抗壞血酸、維生素E生育酚、維 生素B12氰鉆胺酸、維生素BC葉酸、維生素B2核黃素和氯 化膽堿等維生素。這些可能對某些植物或植物的某些代謝過程 有重要作用如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式參與 由Ca介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。4.生長調(diào)節(jié)物質(zhì)常稱為激素 常用的 生長調(diào)節(jié)物質(zhì)大致包括以下三類1植物生長素類。主要作用 是誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生促進(jìn)細(xì)胞脫分化促進(jìn)細(xì)胞的伸長促進(jìn) 生根。如吲哚乙酸IAA、萘乙酸NAA、IBA吲哚丁酸、NOA 萘氧乙酸P-CPA對

4、氯苯氧乙酸、24-D24-二氯苯氧乙酸 245-T245-三氯苯氧乙酸和ABT生根粉等。生長素的使用濃度 通常為0.110mg/L。2細(xì)胞分裂素。如玉米素Zt6-4-羥基-3- 甲基-反式-2-丁烯氨基嘌吟、6-芐基嘌吟6-BA或BAP和激動 素Kt6-呋喃氨基嘌吟、2IP異戊烯氨基嘌吟和TDZthidiazuron 噻二唑苯基脲等。作用主要是第一促進(jìn)細(xì)胞分裂和擴(kuò)大與生長 素促進(jìn)細(xì)胞伸長的作用不同可使莖增粗而抑制莖伸長第二誘 導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長第三抑制衰老減少葉綠素的分 解。延緩離體組織或器官的衰老過程有保鮮的效果。但是細(xì)胞 分裂素對根的生長一般起抑制作用。在組培中細(xì)胞分裂素的使 用濃

5、度通常為0.110mgL。細(xì)胞分裂素常常與生長素相互配合 用以調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂細(xì)胞伸長細(xì)胞分化和器官形成。3赤霉素。 組織培養(yǎng)中使用的赤霉素只有一種即赤霉酸GA3。雖然已經(jīng) 用于頂端分生組織的培養(yǎng)和維管分化的研究但在培養(yǎng)基中很 少添加因為它的作用往往是負(fù)面的。乙烯等。5.瓊脂或其他 支持物 除液體懸浮培養(yǎng)外就目前情況而言瓊脂是一種極為理 想的支持物。一般濃度0.4-1質(zhì)量越差的瓊脂用量越大。瓊脂 作為培養(yǎng)基的支持物使培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)以利于各種外植體 的培養(yǎng)。6.其他添加劑含天然提取物、抗生素等活性炭滲 透調(diào)節(jié)劑抗生素抗氧化劑等?；钚蕴考尤肱囵B(yǎng)基中的目的 主要是利用其吸附能力減少一些有害物質(zhì)的影響例

6、如防止酚 類物質(zhì)污染而引起組織褐化死亡。這在蘭花組織培養(yǎng)中效果更 明顯。另外活性炭使培養(yǎng)基變黑有利于某些植物生根。但活性 炭對物質(zhì)吸附無選擇性既吸附有害物質(zhì)也吸附有利物質(zhì)因此 使用時應(yīng)慎重考慮不能過量一般用量為15。活性炭對形態(tài) 發(fā)生和器官形成有良好的效應(yīng)。在失去胚狀體發(fā)生能力的胡蘿 卜懸浮培養(yǎng)細(xì)胞中加入1 一 4活性炭可使胚狀體的發(fā)生能力得 以恢復(fù)。7.水水是植物原生質(zhì)體的組成成分也是一切代謝過 程的介質(zhì)和溶媒。配制培養(yǎng)基母液時要用蒸餾水以保持母液及 培養(yǎng)基成分的精確性防止儲藏過程發(fā)霉變質(zhì)。大規(guī)模生產(chǎn)時可 用自來水。但在少量研究上盡量用蒸餾水以防成分的變化引起 不良效果。8.pH培養(yǎng)基的pH

7、因培養(yǎng)材料不同而異大多數(shù)植 物都要求在pH5.65.8的條件下進(jìn)行組織培養(yǎng)。常用0.1mol/L 的Na0H和0.1mol/L的HCl來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH。但需注意兩 點第一經(jīng)高溫高壓滅菌后培養(yǎng)基的PH會下降0.20.8故調(diào)整 后的PH應(yīng)高于目標(biāo)pH0.5個單位第二pH的大小會影響瓊脂 的凝固能力一般當(dāng)pH大于6.0時培養(yǎng)基將會變硬低于5.0時 瓊脂就不能很好地凝固。培養(yǎng)基種類根據(jù)培養(yǎng)基態(tài)相不同分 為固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基是指加凝固劑多為瓊 脂的培養(yǎng)基其優(yōu)點是外植體只是部分接觸培養(yǎng)基因此會使培 養(yǎng)基中的效應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生一定的濃度梯度從而有利于外植體的 分化、生長。液體培養(yǎng)基是指不加凝固劑

8、的培養(yǎng)基。外植體在 液體培養(yǎng)基中能夠與效應(yīng)物質(zhì)更好地接觸因此生長速度比在 固體培養(yǎng)基中更快。根據(jù)培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程培養(yǎng)基分為初代培 養(yǎng)基與繼代培養(yǎng)基。初代培養(yǎng)基是指用來第一次接種外植體的 培養(yǎng)基。繼代培養(yǎng)基是指用來接種繼初代培養(yǎng)之后的培養(yǎng)物的 培養(yǎng)基。根據(jù)其作用不同培養(yǎng)基分為誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基 和生根培養(yǎng)基。根據(jù)其營養(yǎng)水平不同培養(yǎng)基分為基本培養(yǎng)基和 完全培養(yǎng)基?；九囵B(yǎng)基就是通常稱呼的培養(yǎng)基主要有MS、 White、B5、N6、改良 MS、Heller、Nitsh、Miller、SH 等。 完全培養(yǎng)基就是在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上根據(jù)試驗的不同需要 附加一些物質(zhì)如植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他復(fù)雜有機(jī)附加

9、物等。 組織培養(yǎng)培養(yǎng)基配制選擇合適的培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)成功 的基礎(chǔ)。選擇合適的培養(yǎng)基主要從以下兩個方面考慮一是基本 培養(yǎng)基二是各種激素的濃度及相對比例。MS培養(yǎng)基適合于大 多數(shù)雙子葉植物B5和N6培養(yǎng)基適合與許多單子葉植物特別 是N6培養(yǎng)基對禾本科植物小麥、水稻等很有效White培養(yǎng)基 適合于根的培養(yǎng)。根據(jù)配方要求用量筒或移液管從每種母 液中分別取出所需的用量放入同一燒杯中并用粗天平稱取蔗 糖、瓊脂放在一邊備用。將中稱好的瓊脂加蒸餾水 300400毫升加熱并不斷攪拌直至煮沸溶解呈透明狀再停止加 熱。將中所取的各種物質(zhì)包括蔗糖加入煮好的瓊脂中再 加水至1000毫升攪拌均勻配成培養(yǎng)基。用1N的氫

10、氧化鈉 或鹽酸滴入中的培養(yǎng)基里每次只滴幾滴滴后攪拌均勻并用 pH試紙測其pH值直到將培養(yǎng)基的pH值調(diào)到5.8。將配好 的培養(yǎng)基用漏斗分裝到三角瓶或試管中并用棉塞塞緊瓶口瓶 壁寫上號碼。瓶中培養(yǎng)基的量約為容量的1/4或1/5。培養(yǎng)基 的成分比較復(fù)雜為避免配制時忙亂而將一些成分漏掉可以準(zhǔn) 備一份配制培養(yǎng)基的成分單將培養(yǎng)基的全部成分和用量填寫 清楚。配制時按表列內(nèi)容順序按項按量稱取就不會出現(xiàn)差錯。 組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的滅菌與保存培養(yǎng)基配制完畢后應(yīng)立即滅 菌。培養(yǎng)基通常應(yīng)在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)在汽相120C條件下滅 菌20分鐘。如果沒有高壓蒸汽滅菌鍋也可采用間歇滅菌法進(jìn) 行滅菌即將培養(yǎng)基煮沸10分鐘24小時后

11、再煮沸20分鐘如此 連續(xù)滅菌三次即可達(dá)到完全滅菌的目的。經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)基 應(yīng)置于10C下保存特別是含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基在45C 低溫下保存要更好些。含吲哚乙酸或赤霉素的培養(yǎng)基要在配制 后的一周內(nèi)使用完其它培養(yǎng)基最多也不應(yīng)超過一個月。在多數(shù) 情況下應(yīng)在消毒后兩周內(nèi)用完。組織培養(yǎng)中幾種常用培養(yǎng)基 的配方 化合物 MS 1962 White 1943 N6 1974 B5 1968 Heller 1953 Nitsh 1972 Miller 1967 SH 1972 NH4NO3 1650 1000 KNO3 1900 80 2830 2527.5 1000 2500 NH42SO4 463 1

12、34 NaNO3 600 KCl 65 750 65 CaCl2.2H2O 440 166 150 75 166 200 CaNO32.4H2O 300 347 MgSO4.7H2O 370 720 185 246.5 250 185 35 400 Na2SO4 200 KH2 PO4 170 400 68 300 K2H PO4 300 FeSO4.7H2O 27.8 27.8 27.85 15 Na2.EDTA 37.3 37.3 37.75 20 Na-Fe-EDTA 28 FeCl3.6H2O FeSO4 3 2.5 MnSO4.4H2O7 4.4 10 0.01 25 4.4 ZnS

13、O4.7H2O 8.6 3 1.5 2 1 10 1.5 Zn 螯 合物 0.03 10 NiCl2.6H2O 1.0 CoCl2.6H2O 0.025 CuSO4.5H2O 0.025 AlCl3 MoO3 Na2MoO4.2H2O 0.25 TiO2 1.0 KI 0.83 0.75 0.8 0.75 0.01 10 1.6 5.0 H3BO3 6.2 1.5 1.6 3 1 NaH2 PO4. H2O 16.5 150 125 煙酸 0.5 0.5 0.5 1 5.0 鹽酸吡哆素 VB6 0.5 0.1 0.5 1 1.0 5.0 鹽酸硫胺素 VB1 0.1 0.1 1 10 0.5 肌

14、醇 100 100 100 100甘氨酸2 3 2培養(yǎng)基配方B5培養(yǎng)基Gamborg等 1968 1 無機(jī)物 NaH2PO4H2O 150 mg/LKNO3 3000 mg/LNH42SO4 134mgLMgSO47H2O 500 mg/LNa2 一 EDTAmg/LFeSO47H2O 27.8 mg/LMnSO4-H2O 10 mg/LZnSO47H2O 2mg/LH3BO3 3mg/L Na2MoO2H2O 0.25 m g/LCuSO45H2O 0.025 mg/LCoCl2-6H20 0.025 mg/LKI 10 mg/Lo 2有機(jī)物 維生素B1 10mg/L維生素B6 1 mg/L

15、甘氨酸 2.0 mg/L 葉酸 0.5 mg/L 肌醇 100.0mgL 蔗糖 50 gLpH 5.5。B5 培養(yǎng)基是1968年由Gamborg等設(shè)計的。它的主要特點是含有 較低的銨鹽較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。銨鹽可能對不少培養(yǎng) 物的生長有抑制作用但它適合于有些植物如雙子葉植物特別 是木本植物的生長。HB培養(yǎng)基Holley Baker1963 1無機(jī)鹽以 1/2 濃度的 Knop 液為基礎(chǔ) CaNO32.4H2O 1000mg/LKNO3 125 mg/LMgSO47H2O 125mg/LKH2PO4 125 mg/LBerthelots 液 0.5ml/L。Berthelots 液成分組成:

16、MnSO44H2O 20g/LKI 0.5g/LNiCl26H20 0.05 g/LCoCl26H20 0.05g/LZnSO47H20 0.10 g/LCuSO45H2O 0.05g/LBeSO44H2O 0.10 g/LH3BO3 0.05g/L濃硫酸1ml。2有機(jī)物 維生素B1理學(xué)1 mg/L腺嘌吟 8 mg/LNAA 2 mg/L蔗糖40gL。H培養(yǎng)基1無機(jī)鹽KNO3 950 mg/LNH4N03 720mgLMgSO47H2O 185 mg/LCaCl22H2O 166 mg/LKH2PO4 68 mg/LNa2 一 EDTAmg/LFeSO47H2O 27.8 mg/LMnSO4-

17、4H2O 25 mg/LZnSO47H2O 10mg/LH3BO3 10mg/L Na2MoO2H2O 0.25 m g/LCuSO45H2O 0.025 mg/L2 有機(jī)物 維生素 B1 0.5mg/L 維生素 B6 0.5 mg/L 甘氨酸 2.0 mg/L 葉酸 0.5 mg/L 肌醇100.0mgL煙酸0.5 mg/L生物素0.05 mg/L蔗糖20 gLpH 5.5。Kassanis 培養(yǎng)基 1957 1 無機(jī)鹽 CaNO32.4H2O 500mg/LKNO3 125 mg/LMgSO47H2O 125mg/LKH2PO4 125 mg/LBerthelots液10滴。2有機(jī)物 酪蛋

18、白1 mg/L半胱氨酸 10 mg/L腺嘌吟5 mg/L煙酸1 mg/L維生素B6 1 mg/L泛酸鈣 10 mg/L肌醇0.1 mg/L維生素H生物素0.01 mg/L蔗糖20 gL。KC 培養(yǎng)基 Knudson C1964 1 無機(jī)鹽 KH2PO4 250 mg/LCaNO32.4H2O 1000mg/LNH42SO4 500mg/LMgSO47H2O 250 mg/LFeSO47H2O 25 mg/LMnSO4.4H2O 7.5 mg/L2 有機(jī)物 蔗糖 20gL pH 5.05.2。 LS 培養(yǎng)基 RM-64Linsmair SKoog19641 無機(jī)鹽 NH4N03 l 650mgL

19、KNO3 1900 mg/LCaCl2- 2H2O 440 mg/LMgSO47H2O 370 mg/LKH2PO4 170 mg/LNa2-EDTA 37.3 mg/LFeSO4- 7H2O 27.8 mg/LH3BO3 6.2 mg/L MnSO44H2O 22.3 mg/LZnSO47H2O 8.6 mg/LKI 0.83 mg/LNa2MoO2H2O 0.25 mg/LCuSO4.5H2O 0.025 mg/LCoCl2.6H2O 0.025 mg/L。2 有機(jī) 物 維生素 Bl 0.4 mg/L 肌醇 10.0mgL 蔗糖 30gLpH 5.6。FeSO47H2O 5.57gNa2-

20、EDTA 7.45g先溶于1升蒸餾水里然后 按每升培養(yǎng)基含5mg的比例加入培養(yǎng)基中。Miller培養(yǎng)基 1963 1 無機(jī)物 NH4N03 l 000mgLKNO3 1000 mg/LCaN0324H2O 347mg/L KH2PO4 300 mg/LKCl 65 mg/LMgSO47H2O 35 mg/LNa 一 Fe 一 EDTA 32 mg/LMnSO44H2O 4.4 mg/LZnSO47H2O 1.5mg/LH3BO3 1.6 mg/L KI 0.8 mg/LCaCl22H2O 150 mg/L。2 有機(jī)物 維生素 Bl 0.1 mg/L 維生素 B6 0.1mg/L 葉酸 0.5

21、mg/L 甘氨酸 2.0 mg/L 蔗糖30gLpH 6.0。M11er培養(yǎng)基與MS培養(yǎng)基比較無機(jī)元素 用量減少1312微量元素種類減少無肌醇。MS培養(yǎng)基RM62Murashige Skoog 1962 1 無機(jī)鹽類同 LS 培養(yǎng)基。2 有 機(jī)物。它的特點是無機(jī)鹽的濃度高具有高含量的氮、鉀尤其硝 酸鹽的用量很大同時還含有一定數(shù)量的銨鹽這使得它營養(yǎng)豐 富不需要添加更多的有機(jī)附加物就能滿足植物組織對礦質(zhì)營 養(yǎng)的要求有加速愈傷組織和培養(yǎng)物生長的作用當(dāng)培養(yǎng)物久不 轉(zhuǎn)移時仍可維持其生存。故這是目前應(yīng)用最廣泛的一種培養(yǎng) 基。MTmurashge and Tucker 培養(yǎng)基 1 大量元素 NH4N03 1

22、650mgLKNO3 1900 mg/LCaCl22H2O 440 mg/LMgSO47H2O 370 mg/LKH2PO4 170 mg/LNa2 一 EDTA 37.3 mg/LFeSO47H2O 27.8 mg/LH3BO3 6.2 mg/L MnSO44H2Omg/LKI 0.83 mg/LNa2MoO2H2O 0.25 m g/LCuSO45H2O 0.025 mg/LCoC12-6H20 0.025 mg/L。2 有機(jī)物 維生素Bl 0.4 mg/L維生素B6 10.0mg/L煙酸5 mg/L甘氨酸 2.0 mg/L肌醇100.0mgL蔗糖50gL。N6培養(yǎng)基北京植物所 黑龍江農(nóng)業(yè)

23、科學(xué)院1974 1無機(jī)物 KNO3 2800 mg/LNH42SO4 463mgLKH2PO4 400 mg/LMgSO47H2O 185 mg/LCaC122H2O 165 mg/LNa2-EDTA 37.3 mg/LFeSO4- 7H2O 27.8 mg/LMnSO4H2O 4.4 mg/LZnSO47H2O 1.5mg/LH3BO3 1.6mg/L KI 0.8mg/L2 有機(jī)物 維生素 B1 1mg/L 維生素 B6 0.5 mg/L葉酸1 mg/L蔗糖20 gLpH 5.8。1974年由我國的朱至清 等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設(shè)計的。其特點是KNO3 和NH42SO4含量高不含鋁

24、。目前在國內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、 水稻及其他植物的花粉和花藥培養(yǎng)和組織培養(yǎng)。Nielsen1960 培養(yǎng)基 1 無機(jī)鹽 KNO3 200 mgLCaN0324H2O 800mgL MgSO47H2O 200mg/LKH2PO4 200 mg/LZnSO47H2O 0.2mg/LNiCl26H2O 0.3 mg/LMnCl2H2O 1.8mg/LCuSO45H2O 0.08mg/LH2MoO4- H2O 0.02 mg/LH3BO3 2.8mg/L2有機(jī)物 維生素B1 1mg/L煙酸5 mg/L維生素B6 1 mg/L 蔗糖 30 gL。Nitsch Nitsch 1969 培養(yǎng)基 1 無機(jī)鹽 K

25、NO3 950 mgLNH4N03 720mgLKH2PO4 68 mg/LCaCl22H2O 166 mg/LMgSO47H2O 185mg/LFeSO4-7H2O 27.8mg/LNa2-EDTA 37.3 mg/LMnSO44H2O 25mg/LH3BO3 10 mg/LZnSO47H2O 10mg/LCuSO45H2O0.025mg/LNa2MoO4- 2H2O 0.25 mg/L2 有機(jī)物 維生素 H 生物 素 0.05 mg/L 肌醇 100 mg/L 維生素 B1 0.5mg/L 煙酸 5 mg/L 維生素B6 0.5 mg/L甘氨酸2.0 mg/L葉酸5 mg/L蔗糖20 gL

26、。 SH培養(yǎng)基Schenk和Hidebrondt SH培養(yǎng)基是1972年由Schenk 和Hidebrondt設(shè)計的。它的主要特點與B5相似不用NH42SO4 改用NH4PO4是礦質(zhì)鹽濃度較高的培養(yǎng)基。在不少單子葉和 雙子葉植物上使用效果很好。White培養(yǎng)基White19631無機(jī) 鹽類 CaNO324H2O 287mg/LKNO3 80mg/LKCl 65 mg/LNaH2PO4H2O 19.1 mg/LMgSO47H2O 738mg/LNa2SO4- 10H2O 453 mg/LMnSO44H2O 6.6 mg/LH3BO3 1.5 mg/LZnSO4.7H2O 2.7 mg/LKI 0

27、.75 mg/L2 有機(jī)物 甘氨酸 3.0 mg/L 煙酸 0.5 mg/L 維生素 B6 0.1 mg/L 維生素 B1 0.1 mg/L檸檬酸2.0 mg/L蔗糖20g/LpH 5.7。又稱WH培養(yǎng)基是 1943年White設(shè)計的1963年做了改良。其特點是無機(jī)鹽濃度 較低。它的使用也很廣泛無論是生根培養(yǎng)還是胚胎培養(yǎng)或一般 組織培養(yǎng)都有很好的效果。White培養(yǎng)基改良White1963 1無 機(jī)鹽 KNO3 80 mg/LCaN032-4H2O 300mgLMgSO47H2O 720 mg/LNa2SO4 200 mg/LKCl 65 mg/L Na H2PO4- 5H2O 16.5 mg

28、/LFeSO43 2.5 mg/LMnSO44H2O 7 mg/LZnSO47H2O 3mg/LH3BO3 1.5mg/L CuSO45H2O 0.001 mg/LMoO3 3 mg/Lo 2有機(jī)物 維生素B1 0.1mg/L維生素B6 0.1 mg/L甘氨 酸 3.0 mg/L 肌醇 100.0mgL 煙酸 0.3 mg/L 蔗糖 20 gLpH 5.0。 花肥培養(yǎng)基 Kano1963Kyoto so1ution 花肥 3g/LKH2PO4 250 mg/LCaNO32.4H2O 1000mg/LMgSO4- 7H2O 250 mg/LNH42SO4 2mg/L蔗糖20gL pH 5.0。木

29、本植物用培養(yǎng)基 WPMWoody Plant medium 1 無機(jī)鹽 NH4N03 400mgLCaNO32.4H2O 556mg/LK2SO4 990 mg/LCaCl2- 2H2O 96 mg/L KH2PO4 170 mg/LNa2MoO4- 2H2O 0.25 mg/LMgSO47H2O 370 mg/LMnSO4H2O22.4mg/LZnSO4-7H2O 8.6mg/LCuSO4- 5H2O 0.25mg/LFeSO47H2O 27.8 mg/LNa2-EDTA 37.3 mg/L o 2 有機(jī) 物 肌醇100 mg/L維生素B1 1.0mg/L煙酸0.5 mg/L維生素B6 0.

30、5 mg/L 甘氨酸 2.0 mg/L 蔗糖 20 gL 瓊脂 6gLpH 5.2。MS培養(yǎng)基的配制1、MS大量元素母液的配制一般將大量元 素分別配制成10倍的母液使用時再分別稀釋10倍。依次分別 稱取 NH4NO3 16.5gKNO3 19.0g KH2PO4 1.70gMgSO47H2O 3.7gCaCl22H2O 4.4g共配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中存 放于冰箱中。2、MS微量元素母液的配制一般將微量元素 配制成100倍母液。依次稱取KI 0.083gNa2MoO42H2O 0.025gH3BO3 0.62gCuSO45H2O 0.0025gMnSO4H2O 1.69gCoCl26H2O 0.0025gZnSO