水仙組織培養(yǎng)方案

1、水仙組織培養(yǎng)方案實驗?zāi)康模毫私庵参锝M織培養(yǎng)的概念，認識植物組織培養(yǎng)的特點和類型；了 解植物組織培養(yǎng)技術(shù)在現(xiàn)代經(jīng)濟發(fā)展中的應(yīng)用。實驗原理：植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是植物細胞具有全能性，所謂細胞全能 型是指植物體任何一個細胞都攜帶者一套能發(fā)育成完整植株的全部 遺傳信息。在立體培養(yǎng)的情況下，這些信息可以表達，產(chǎn)生出完整的 植株。一些已經(jīng)分化的細胞可以通過脫分化產(chǎn)生愈傷組織。該組織是 一種能迅速增殖的無特定結(jié)構(gòu)和功能的細胞團，經(jīng)過進一步分化培 養(yǎng)，則可生出完整的小植株。實驗步驟：1、接種選取一年生或兩年生鱗莖為材料，去掉干枯鱗葉與鱗莖盤，在相對無 菌的條件下層剝鱗葉，再把鱗葉切掉4/5,僅留鱗葉基部及相

2、連的部 分鱗莖盤，最后縱切成長約2mm,寬約1mm的組織塊直接接種于培養(yǎng) 基上。每支試管接種兩塊，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)。2、誘導(dǎo)愈傷組織用鱗葉基部作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，在上述MS培養(yǎng)基中加入10mg/mL 6-BAP和0.1 mg/mL 2.4D，兩周后形成愈傷組織。我們通常配制1L的MS誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基中加入30g蔗糖，12g瓊脂， 800uL 1M NaOH 調(diào)節(jié) pH 至 5.8 左右，加入 800 uL 6-BAP 和 80UL2.4D，分裝20瓶，高壓滅菌20min，冷卻凝固后放置1-2天， 無污染出現(xiàn)后即可使用。將組織塊、愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、鑷子和刀片、 酒精瓶（泡鑷子）、大培養(yǎng)皿和廢液瓶等全

3、部放入超凈臺滅菌20min， 開始進入超凈臺進行如下操作：（1）首先將組織塊切至培養(yǎng)皿的濾紙中，將組織塊四周的邊緣全部 切去以造成愈傷，將愈傷的組織塊分別切成小片（大小3-5mm左右）。（2）然后將配制的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中殘余的水分倒掉，再分別用鑷子將 組織塊接種至培養(yǎng)基中，注意要將葉背面和培養(yǎng)基充分接觸，用鑷子 輕摁一下，防止掉落，每瓶接6-8個左右。為了減少污染，建議每接 兩瓶更換一次濾紙，操作人員勿離開超凈臺，直至將組織塊全部接至 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。3、愈傷組織繼代將誘導(dǎo)的愈傷組織繼代兩次，兩周后進行取樣。繼代兩次的主要原因 是將愈傷組織中殘留的鱗葉切除干凈，繼代兩次后的愈傷組織完全不 含有鱗

4、葉且大小合適取樣。配制1L的MS愈傷組織繼代培養(yǎng)基中加入30g蔗糖，12g瓊脂，800uL 1M NaOH調(diào)節(jié) pH 至 5.8 左右，加入 800 uL 6-BAP和 80uL2.4D，分裝 20瓶，高壓滅菌20min，冷卻凝固后放置1-2天，無污染出現(xiàn)后即可 使用。將長出愈傷組織的鱗葉、愈傷組織繼代培養(yǎng)基、鑷子和刀片、 酒精瓶（泡鑷子）、大培養(yǎng)皿和廢液瓶等全部放入超凈臺滅菌20min, 開始進入超凈臺進行如下操作：首先將4瓶長出愈傷組織的鱗葉用鑷子夾入培養(yǎng)皿的濾紙中，然后用 刀將愈傷組織切下來移至濾紙中干凈的地方，待4瓶愈傷組織全部切 完后，將繼代培養(yǎng)基打開倒出培養(yǎng)基中殘余的水分，用鑷子將切好的 愈傷組織接入培養(yǎng)基中，插入深度不宜過深，以愈傷組織大小的三分 之一左右為宜，每瓶接6個左右。每接好4瓶（長出愈傷組織的鱗葉） 更換一次濾紙，為了減少污染，操作人員勿離