特殊變異菌的篩選方法課件

1、4.3 特殊變異菌的篩選方法：以溫度敏感突變?yōu)槔汉Y選方法：用途：常用于提高代謝物產(chǎn)量原因：是由于某一酶蛋白結(jié)構(gòu)改變后，在高溫下活力喪失重要性：如果此酶為蛋白質(zhì)、核酸合成途徑中所需的酶，則此變異株在高溫下的表型就是營養(yǎng)缺陷型。4.3.1條件抗性突變型的篩選舉例：由谷氨酸產(chǎn)生菌乳糖發(fā)酵短桿菌2256，經(jīng)誘變處理得到溫度敏感變異株Ts88:30培養(yǎng)時能正常生長40是死亡，但能在富含生物素的培養(yǎng)基中積累谷氨酸（而野生型卻受生物素的反饋抑制）。在富含生物素的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵時：先在30（允許條件）中進行培養(yǎng)以得到大量菌細(xì)胞，適當(dāng)時間后提高溫度（ 40 ，非允許條件），即能獲得谷氨酸的過量生產(chǎn)。方法：梯

2、度平板法（gradient plate）4.3.2抗藥性突變株的篩選抗藥性突變株的應(yīng)用：作為菌株的遺傳標(biāo)記作為生產(chǎn)菌種（結(jié)構(gòu)類似物抗性變異株）4.3.3抗生素抗性變異株的篩選： 與營養(yǎng)缺陷突變有關(guān)的三類遺傳型個體：營養(yǎng)缺陷型：經(jīng)誘變產(chǎn)生的一些合成能力出現(xiàn)缺陷，而必須在培養(yǎng)基內(nèi)加入相應(yīng)有機養(yǎng)分才能正常生長的變異菌株。如：lys -， bio- 野生型：自然界分離到的任何微生物，在其發(fā)生營養(yǎng)缺陷突變前的原始菌株，為該微生物的野生型。 如：lys + ; bio + ;原養(yǎng)型 ：指營養(yǎng)缺陷型突變菌株回復(fù)突變或重組后產(chǎn)生的菌株，與野生型的表型相同。 4.3.4 營養(yǎng)缺陷型(auxotroph)的篩選與

3、篩選營養(yǎng)缺陷型突變株有關(guān)的三類培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基（MM）-：凡是能滿足野生型菌株營養(yǎng)要求的最低成分的合成培養(yǎng)基。 完全培養(yǎng)基（CM）+：滿足一切營養(yǎng)缺陷型菌株生長的天然或半合成培養(yǎng)基。 補充培養(yǎng)基（SM）x：在MM中有針對性地加入一或幾種營養(yǎng)成分以滿足相應(yīng)營養(yǎng)缺陷型菌株生長的合成培養(yǎng)基。 營養(yǎng)缺陷型誘變篩選步驟及方法auxo的鑒定 誘變處理auxo的濃縮auxo的檢出缺陷型的濃縮：抗生素法原理： 青霉素、制霉菌素等抗生素作用于生長著的微生物細(xì)胞，對休止態(tài)細(xì)胞無作用。 方法：將菌培養(yǎng)在含抗生素的MM基中菌絲過濾法適用于：絲狀（放線菌、霉菌） 原理：基本培養(yǎng)基上只有發(fā)育成菌絲；auxo孢子可通過濾膜

4、，野生型菌絲不能通過。逐個檢出法：缺陷型的檢出： 影印平板培養(yǎng)法夾層培養(yǎng)法生長譜法方法簡便； 回變和污染不影響 結(jié)果 測定物質(zhì)可為粉末 或紙片 缺陷型的鑒定：測定一般應(yīng)分兩階段：第一階段：測定是哪類物質(zhì)的缺陷型；第二節(jié)段：根據(jù)第一階段確定的范圍，進一步確定是哪種具體化合物的缺陷型；組合營養(yǎng)物法：步驟（以氨基酸缺陷型的鑒定為例）：a. 將多種營養(yǎng)因子編組；b. 將組合液的紙片放在涂菌的基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)；c. 結(jié)果分析；如： 一組：1 2 3 4 5 二組：2 6 7 8 9 三組：3 7 10 11 12 四組：4 8 11 13 14 五組：5 9 12 14 15營養(yǎng)因子分組編排時注意；1）每組內(nèi)無重復(fù)的營 養(yǎng)因子 2）每組中應(yīng)包含只出 現(xiàn)一次的因子 3）每組中其他因子應(yīng) 分別出現(xiàn)二次 一組：1 2 3 4 5 二組：2 6 7 8 9 三組：3 7 10 11 12 四組：4 8 11 13 14 五組：5 9 12 14 15組合補充培養(yǎng)基法：將待測的菌點種到各種補充培養(yǎng)基上，逐個分析各菌的缺陷類型，或快速分離出所需缺陷類型的菌株。ABFEDCHG缺陷型的應(yīng)用