細胞重組與克隆技術(shù)課件

1、細胞重組與克隆技術(shù)細胞拆合：把完整細胞的細胞核與細胞質(zhì)用特殊的方法分離開來，或把細胞核從細胞質(zhì)中吸取出來，或用紫外線等把細胞中的核殺死，然后再把同種或異種的細胞核和細胞質(zhì)重新組合起來，培育新的細胞或新的生物個體。 細胞重組：細胞融合技術(shù)與細胞核質(zhì)分離技術(shù)結(jié)合，在融合介質(zhì)作用下，使胞質(zhì)體與完整細胞合并，重新構(gòu)成胞質(zhì)雜種細胞的過程。 8.1細胞重組8.11胞質(zhì)雜種 8.12微細胞核移植 8.13核移植 8.14細胞重建8.11胞質(zhì)雜種胞質(zhì)體（cytoplast）：除去細胞核后由膜包裹的無核細胞，由細胞松弛素B處理后，經(jīng)離心得到。 1972年，Prescott借助細胞松弛素的和高速離心得到 核體（k

2、aryoplast）：由胞質(zhì)體分離出來的核，帶有少量胞質(zhì)并圍有質(zhì)膜的結(jié)構(gòu)。 胞質(zhì)雜種細胞：將胞質(zhì)體和另一完整細胞融合得到的細胞。 雜種細胞：核體與完整細胞融合。 重組細胞：核體與另一種細胞的胞質(zhì)體融合。利用細胞融合技術(shù)得到的重組細胞1、2、3親本細胞 4、6核體 5、7胞質(zhì)體 8、9雜種細胞 10重組細胞 11胞質(zhì)雜種細胞 PEG介導(dǎo) HAT培養(yǎng)基篩選 鑒別與意義利用雙重標記法鑒別雜種細胞的真?zhèn)?，可以采用兩個具有不同缺陷型的細胞作標志，或用3H胸腺嘧啶核苷作核標記，并使其吞入不同顆粒的乳膠作為胞質(zhì)標志，或者用3H亮氨酸等標記氨基酸作為胞質(zhì)標記，也可用紅綠熒光的聚乙烯顆粒標記重組細胞。 意義：胞

3、質(zhì)雜種細胞是不同種系之間的一種真正的新型細胞，在適宜的條件下能成功的生存下去，它在物種的品種改良、醫(yī)學(xué)及農(nóng)業(yè)的各個方面將產(chǎn)生重大的影響。8.12微細胞核移植 微細胞：只有一條或幾條染色體和一薄層細胞質(zhì)，外面包裹一層完整的細胞質(zhì)膜的核質(zhì)體。利用秋水仙素先將細胞阻斷在染色體中期，然后培養(yǎng)，再用細胞松弛素B處理得到。 以微細胞作供體，通過與遺傳性完整的受體細胞融合，可以將微細胞內(nèi)所含有的幾條染色體轉(zhuǎn)移到受體細胞中去。微細胞雜種細胞的制作過程 8.13細胞核移植核移植起始于用微吸管對阿米巴等原生動物進行的核操作。 在1952年，美國人羅伯特布里格斯和TJ金，首先利用兩棲類卵細胞建立細胞核移植技術(shù)。由于

4、兩棲類的蛙卵數(shù)量較多，體積較大，容易獲得，操作方便。 19581962年，英國劍橋大學(xué)的約翰格登教授和麥金尼爾利用瓜蟾原腸內(nèi)胚層細胞核移植，培育出可育的非洲瓜蟾。非洲爪蟾制作我國的研究中國的細胞核移植技術(shù)工作，開始于本世紀50年代，主要是在兩棲類和魚類上進行的， 從1961年開始，童第周等以金魚和鳑鲏魚為材料，進行魚類不同亞科間的細胞核移植獲得成功，用以研究雜交細胞核于純種細胞核在發(fā)育功能上的差異，以及細胞質(zhì)對細胞核的影響。 1978年，將黑斑蛙成體紅細胞的細胞核移入去核的未受精卵內(nèi)，卵子最后發(fā)育成正常的蝌蚪。哺乳動物核移植，哺乳類的移核實驗必須在一種很精密的儀器顯微操作儀下才能進行。 最早用

5、來做移核試驗的哺乳動物是小鼠。 1977年，美國緬因州巴爾港的杰克遜實驗室用“亞無性繁殖”的方式，培育出7只單親小鼠。 1981年1月，美國科學(xué)雜志封面刊登3只小鼠的照片，他們將囊胚內(nèi)細胞團細胞的核移入去核的受精卵中，經(jīng)培養(yǎng)移核卵發(fā)育至囊胚期，再將胚胎植入同步孕鼠的子宮內(nèi)，最后產(chǎn)下兩雌一雄仔鼠，并發(fā)育成了可育的個體。核移植小鼠 克隆克?。╟lone）是指遺傳上完全相同的分子、細胞或來自同一祖先的生物個體的無性繁殖群體，也指通過克隆方式生產(chǎn)克隆群體的過程或手段。 從理論上講，任何一個具有核的細胞都含有其生物體基因組的全部基因，因此都可以克隆。多莉的誕生 克隆步驟上 克隆步驟下 克隆動物成功與否的

6、關(guān)鍵性問題首先是核移植過程中要分離得到供體細胞和作為受體細胞的卵細胞 。 其次要取處在適當發(fā)育階段及細胞周期的受體和供體細胞，受體細胞和供體細胞處于細胞周期中的同一時期 ，核移植成功的幾率最大。 受體細胞在細胞周期中所處的時間對轉(zhuǎn)核實驗成功與否的影響要大于供體細胞所處的時間的影響，一般取G2期進行核移植的效果都較好。另外，細胞誘導(dǎo)分裂成熟的因子（MPF）的活性有關(guān)。克隆的倫理克隆羊的誕生也從理論上，表明了人類可以自身進行無性繁殖的可能性。如果克隆技術(shù)應(yīng)用于人類，必將對人類社會的基本組織單位家庭產(chǎn)生很大的沖擊，同時也一定會直接威脅人類社會現(xiàn)有的法律、倫理和道德。多個國家政府已經(jīng)明確宣布政府科研基

7、金決不會支持任何將克隆技術(shù)應(yīng)用于人類的研究。8.14細胞重建細胞重建的概念是我國貝時璋院士提出的。 定義：體內(nèi)已經(jīng)存在的某種物質(zhì)，可以由細胞質(zhì)，甚至細胞外的某種基質(zhì)為基地，通過自組織、自裝配過程，一步步地形成完整的細胞。 早在20世紀30年代，貝教授在一種甲殼類動物南京豐年蟲的二倍體雌蟲卵母細胞中首次發(fā)現(xiàn)了細胞重建的現(xiàn)象。 細胞重建的發(fā)現(xiàn)，證明細胞分裂不是細胞繁殖的唯一途徑，它可能是現(xiàn)代生物體內(nèi)對地球細胞起源的反映，是簡單的生命形態(tài)進化為細胞的漫長過程的一個縮影，有助于對生命進化過程的闡述加強做責任心，責任到人，責任到位才是長久的發(fā)展。7月-227月-22Thursday, July 28,

8、2022人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。08:13:3608:13:3608:137/28/2022 8:13:36 AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。7月-2208:13:3608:13Jul-2228-Jul-22重于泰山，輕于鴻毛。08:13:3608:13:3608:13Thursday, July 28, 2022安全在于心細，事故出在麻痹。7月-227月-2208:13:3608:13:36July 28, 2022加強自身建設(shè)，增強個人的休養(yǎng)。2022年7月28日8:13 上午7月-227月-22追求至善憑技術(shù)開拓市場，憑管理增創(chuàng)效益，憑服務(wù)樹立形象。28 七月 20228:13:36 上午08:13:367月-22專業(yè)精神和專業(yè)素養(yǎng)，進一步提升離退休工作的質(zhì)量和水平。七月 228:13 上午7月-2208:13July 28, 2022時間是人類發(fā)展的空間。2022/7/28 8:13:3608:13:3628 July 2022科學(xué)，你是國力的靈魂；同時又是社會發(fā)展的標志。8:13:36 上午8:13 上午08:13:367月-22每天都是美好的一天，新的一天開啟。7月-227月-2208:1308:13:3608:13:36Jul-22人生不是自發(fā)的自我發(fā)展，