月季的花藥培養(yǎng)(經(jīng)典)

1、共三十八頁(yè)菊花(jhu)的組織培養(yǎng)共三十八頁(yè)1.植物組織培養(yǎng)的概念(ginin)、原理、過(guò)程；2.激素扛桿及其作用3.外植體及其消毒過(guò)程比較4. MS培養(yǎng)基與微生物的培養(yǎng)基比較知識(shí)(zh shi)要點(diǎn)共三十八頁(yè)5.菊花的組織培養(yǎng)的特定條件6.花粉發(fā)育要經(jīng)歷的階段(四分體時(shí)期、單核期、雙核期等)7.確定花粉是否(sh fu)處于適宜發(fā)育期的方法8.比較植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)共三十八頁(yè) 指植物的離體部分（包括任何器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體），在人工控制的培養(yǎng)基及環(huán)境條件（溫度及光照）下，得以生長(zhǎng)和分化成完整(wnzhng)植株的一種無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)。又稱：植物(zhw)離體培養(yǎng)一、植物

2、組織培養(yǎng)的概念共三十八頁(yè)概念(ginin)：細(xì)胞的全能性是指已分化的細(xì)胞具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。原因：是生物體的每一個(gè)細(xì)胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)植物(zhw)組織培養(yǎng)原理：植物細(xì)胞的全能性共三十八頁(yè)什么叫分化？其實(shí)質(zhì)是什么?什么叫脫（去）分化、再分化？愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)？如何(rh)控制細(xì)胞的脫分化與去分化？ 閱讀32頁(yè)解決下列(xili)問(wèn)題：二、植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程基因的選擇性表達(dá) 共三十八頁(yè)二、植物(zhw)組織培養(yǎng)的基本過(guò)程共三十八頁(yè)愈傷組織(zzh)共三十八頁(yè)三、影響(yngxing)植物組織培養(yǎng)的因素：1、外植體的選取 不同植物的組織培養(yǎng)難度不同 同一種植物的不

3、同組織培養(yǎng)難度不同2、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基) 大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有機(jī)物：甘氨酸、煙酸(yn sun)、肌醇、維生素、蔗糖等 植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝共三十八頁(yè)3、不同植物激素使用(shyng)順序使用順序 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 先生長(zhǎng)素，后細(xì)胞分裂素 有利于細(xì)胞分裂但不分化 先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素 細(xì)胞既分裂也分化 同時(shí)使用 分化頻率提高 共三十八頁(yè)4、不同植物(zhw)激素使用量生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值結(jié)果 比值高時(shí) 促根分化，抑芽形成 比值低時(shí) 促芽分化，抑根形成 比值適

4、中 促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng) 共三十八頁(yè)思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么(shn me)問(wèn)題？生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素高 利于根和愈傷組織的形成適中 利于根芽的分化共三十八頁(yè)5、pH、溫度、光照（菊花組培） pH=5.8 溫度控制在1822 每日光照12h6、消毒在培養(yǎng)的整個(gè)(zhngg)過(guò)程中，都需要是一個(gè)無(wú)菌環(huán)境共三十八頁(yè)制備(zhbi)MS固體培養(yǎng)基外植體消毒(xio d) 接種 培 養(yǎng)栽 培四、實(shí)驗(yàn)操作 移 栽沖洗酒精無(wú)菌水沖洗氯化汞無(wú)菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅毒共三十八頁(yè)1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無(wú)菌操作(cozu)（酒精、酒精

5、燈灼燒）4、無(wú)菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過(guò)毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。在整個(gè)(zhngg)操作過(guò)程中，是如何來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的？共三十八頁(yè)結(jié)果(ji gu)分析與評(píng)價(jià)（一）對(duì)接種操作(cozu)中污染情況的分析（二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格共三十八頁(yè)課題(kt)延伸（略）練習(xí)1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng)(shngzhng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)(shngzhng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的

6、無(wú)菌操作。2.答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。共三十八頁(yè)菊花(jhu)的組織培養(yǎng)再分化(fnhu)材料性質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、調(diào)節(jié)物質(zhì)、環(huán)境條件外植體的消毒接種基本原理:細(xì)胞的全能性基本過(guò)程:脫分化愈傷組織影響因素：操作流程：配制MS固體培養(yǎng)基培養(yǎng)移栽栽培共三十八頁(yè)共三十八頁(yè) 植物(zhw)的花藥培養(yǎng)在育種上有什么意義？花粉粒（1N）單倍體植株（1N）二倍體純合子植株（2N） 縮短了育種(y zhng)周期，為新品種的培育開(kāi)辟了新途徑。共三十八頁(yè)花的結(jié)構(gòu)(jigu)共三十八頁(yè)花絲(hu s)花藥：囊狀結(jié)構(gòu)(jigu)，內(nèi)有很多花粉

7、 花粉是由花粉母細(xì)胞（即小孢子母細(xì)胞）經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。 花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：四分體時(shí)期、單核期、雙核期等階段。（一）被子植物的花粉發(fā)育雄蕊基礎(chǔ)知識(shí)共三十八頁(yè)（一）被子植物的花粉(hufn)發(fā)育共三十八頁(yè)1花粉(hufn)母細(xì)胞（2n）4個(gè)小孢子(boz)(小孢子(boz)四分體)（n）減分有分1個(gè)花粉管細(xì)胞核（n）1個(gè)生殖細(xì)胞核（n）有分2個(gè)精子單核居中期（n）單核靠邊期（n）花粉發(fā)育過(guò)程：共三十八頁(yè)注意(zh y)：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子(jngz)在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一

8、次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同。共三十八頁(yè)（二）產(chǎn)生花粉植株(zhzh)的兩種途徑形成原因：主要取決于培養(yǎng)基中的激素的種類(zhngli)及其濃度的配比共三十八頁(yè)體細(xì)胞胚（胚狀體）： 在組織培養(yǎng)過(guò)程中，某些體細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常(fichng)相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過(guò)程亦與合子胚類似，被稱為體細(xì)胞胚（胚狀體）。共三十八頁(yè)（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇 不同植物 同一植物的不同生理狀況(zhungkung)（花期早期初花期） 合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間） 此外，植株生長(zhǎng)條件、材料低溫預(yù)處理

9、、接種密度等2、培養(yǎng)基的組成共三十八頁(yè)實(shí)驗(yàn)操作材料選取材料和消毒接種和培養(yǎng)共三十八頁(yè)（一）材料(cilio)選取 通過(guò)(tnggu)鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。 最常用的方法：醋酸洋紅法。 某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色， 采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。月季的初花期。 選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。一般來(lái)說(shuō)，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高。 共三十八頁(yè)為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難(kn nn)？答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來(lái)困難。共三十八頁(yè)二、材料(cilio)的消毒：花蕾

10、（70酒精）大約30s（無(wú)菌水）清洗（無(wú)菌吸水紙）吸干水分（1氯化汞溶液）24min（無(wú)菌水）沖洗 月季(yuj)花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比較，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗 共三十八頁(yè)三、接種(jizhng)和培養(yǎng)剝?nèi)』ㄋ?huyo)接種花藥培養(yǎng)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定和篩選不要損傷花藥？要徹底除去花絲？常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化？每個(gè)培養(yǎng)瓶接種 （710 ） 個(gè)花藥？花藥長(zhǎng)出愈傷組織還要轉(zhuǎn)移到哪？主要原因是營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合造成的共三十八頁(yè)植物組織培養(yǎng)技術(shù)(jsh)與花藥培養(yǎng)技術(shù)(jsh)的異同點(diǎn)項(xiàng)目相同點(diǎn)不同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組織經(jīng)

11、脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移栽。外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無(wú)需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術(shù)取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而且為純種。共三十八頁(yè)2、基因型為AaBb的水稻（條染色體）的花藥通過(guò)無(wú)菌操作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)成試管苗。（）愈傷組織是花粉細(xì)胞分裂形成的不規(guī)則的細(xì)胞團(tuán)，愈傷組織必須從培養(yǎng)基中獲得（）（ ）和小分子有機(jī)物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。（）要促進(jìn)(cjn)花粉細(xì)胞的分裂分化，培養(yǎng)基中應(yīng)有（）（ ）兩種激素。愈傷組織分化是指愈傷組織形成芽和根，由芽發(fā)育成葉莖。這一過(guò)程必須給予光照，其原因是（）

12、利用光能制造有機(jī)物促進(jìn)試管苗生長(zhǎng)發(fā)育。（）試管苗的細(xì)胞核中有（）條脫氧核苷酸鏈。試管苗的基因型有： 水無(wú)機(jī)鹽生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素葉24AB Ab aB ab共三十八頁(yè)3（9分）草莓生產(chǎn)上傳統(tǒng)的繁殖方式易將所感染的病毒傳播給后代，導(dǎo)致產(chǎn)量降低(jingd)。品質(zhì)變差。運(yùn)用微型繁殖技術(shù)可以培育出無(wú)病毒幼苗。草 莓微型繁殖的基本過(guò)程如下：外植體 愈傷組織 芽、根 植株請(qǐng)回答：（1）微型繁殖培育無(wú)病毒草莓苗時(shí)，一般選取_ 作為外植體，其依據(jù)是_ _ 。（2）在過(guò)程中，常用的MS培養(yǎng)基主要成分包括大量元素、微量元素和_，在配制好的培養(yǎng)基中，常常需要添加_，有利于外植體啟動(dòng)細(xì)胞分裂形成愈傷組織。接種后25d，若發(fā)現(xiàn)外植體邊緣局部污染，原因可能是_ 。（3）在過(guò)程中，愈傷組織在誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是_ 。莖尖、根尖莖尖、根尖不含病毒(bngd)有機(jī)物植物激素外植體消毒不徹底 培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素類物質(zhì)和細(xì)胞分裂素類物質(zhì)用量的比值偏低共三十八頁(yè)內(nèi)容摘要菊花的組織培養(yǎng)。4. MS培養(yǎng)基與微生物的培養(yǎng)基比較。8.比較植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)。如何控制細(xì)胞的脫分化與去分化。不同植物的組織培養(yǎng)難度不同。同一種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同。2、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基)。（二）是否完成了對(duì)