耐藥結(jié)核病的產(chǎn)生與實(shí)驗(yàn)室診斷(6.21)課件

1、耐藥結(jié)核病的產(chǎn)生與實(shí)驗(yàn)室診斷2014年6月21日耐藥結(jié)核病產(chǎn)生幾個(gè)與耐藥相關(guān)的概念原發(fā)耐藥獲得（繼發(fā)）性耐藥自然耐藥交叉耐藥初始耐藥單耐藥多耐藥耐多藥廣泛耐藥幾個(gè)與耐藥相關(guān)的概念原發(fā)耐藥：以前未接受過(guò)抗結(jié)核藥物治療而發(fā)生的耐藥。大多是受到耐藥病人的傳染而獲得的。獲得（繼發(fā)）性耐藥：原來(lái)對(duì)抗結(jié)核藥敏感的病例在治療過(guò)程中發(fā)生的耐藥。一般是治療不當(dāng)所致。初始耐藥：原發(fā)耐藥和不能肯定的獲得性耐藥的總稱，經(jīng)臨床核實(shí)無(wú)法證明病人以往未曾接受過(guò)治療幾個(gè)與耐藥相關(guān)的概念自然耐藥：是野生株中存在的耐藥菌，在無(wú)藥物存在的條件下自然對(duì)抗結(jié)核藥物產(chǎn)生的耐藥。自然耐藥菌可因結(jié)核病治療用藥不當(dāng)、劑量不足、療程不充分等選擇

2、性的生長(zhǎng)發(fā)育，最終形成繼發(fā)耐藥菌。交叉耐藥：結(jié)核菌對(duì)一種藥物耐藥的同時(shí)對(duì)其他藥物也產(chǎn)生耐藥。可以是兩種或多種藥物間的交叉。1314TH與1312TH完全交叉耐藥；氨基糖甙類單向交叉耐藥：耐SM對(duì)KM、AK敏感，耐KM對(duì)AK、CPM敏感；氟喹諾酮類藥物間完全交叉耐藥，但對(duì)其他類無(wú)交叉耐藥；環(huán)絲氨酸和特立齊酮完全交叉耐藥，但對(duì)其他類無(wú)交叉耐藥。幾個(gè)與耐藥相關(guān)的概念單耐藥：結(jié)核分枝桿菌對(duì)一種抗結(jié)核藥物耐藥多耐藥：結(jié)核分枝桿菌對(duì)不包括同時(shí)耐R、H在內(nèi)的一種以上的抗結(jié)核藥物耐藥耐多藥：結(jié)核分枝桿菌至少同時(shí)對(duì)R、H耐藥廣泛耐藥(嚴(yán)重耐多藥）：結(jié)核分枝桿菌對(duì)R、H耐藥，同時(shí)對(duì)任何氟喹諾酮類藥物耐藥，以及至少

3、對(duì)一種二線抗結(jié)核注射劑（CS、KM、AK）耐藥耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因細(xì)菌學(xué)、臨床及規(guī)劃的原因，本質(zhì)是人為造成的結(jié)果微生物學(xué)觀點(diǎn)，耐藥性是基因突變引起藥物對(duì)突變菌效力降低造成的，是由于敏感菌株被抗結(jié)核藥物殺死所誘發(fā)的某些菌群選擇性耐藥突變的結(jié)果臨床及管理方面，不足夠或不恰當(dāng)?shù)闹委煂?dǎo)致患者體內(nèi)耐藥突變菌成為優(yōu)勢(shì)菌耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因細(xì)菌學(xué)原因：結(jié)核分枝桿菌在生長(zhǎng)過(guò)程中可以自發(fā)、獨(dú)立的發(fā)生抗結(jié)核藥物耐藥的自然突變，但野生型菌株中突變率低，耐藥突變更低，在特定的野生型中耐異煙肼的突變3.5x10-6耐利福平的突變1.2x10-8耐乙胺丁醇的突變3.1x10-5耐鏈霉素的突變3.8x10-6野生型中對(duì)一種

4、以上藥物耐藥很少見(jiàn)，是兩率的積耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因治療和管理原因：治療和管理不合理性是造成耐藥結(jié)核病最重要和最直接的原因，不合理性包括：結(jié)核病防治規(guī)劃組織執(zhí)行不到位，沒(méi)有按國(guó)家指南要求開(kāi)展結(jié)核病防治工作沒(méi)有可靠的耐藥結(jié)核病規(guī)劃管理指南沒(méi)有足夠培訓(xùn)缺乏對(duì)治療的監(jiān)測(cè)耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因藥物聯(lián)合不合理、不恰當(dāng)用藥劑量不足，服藥方法不當(dāng)療程不足或間斷用藥對(duì)失敗和復(fù)發(fā)的病例未做深入的分析和給予恰當(dāng)?shù)奶幚韺?duì)患者的治療缺乏管理或管理不善耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因其他原因：患者的依從性差患者對(duì)結(jié)核病知識(shí)的了解不足抗結(jié)核藥物供應(yīng)不足，種類不全，質(zhì)量不佳，不良反應(yīng)重，生物利用度低等直接影響治療效果經(jīng)費(fèi)不足，患者經(jīng)濟(jì)困難

5、是造成間斷、不規(guī)則用藥的重要原因新藥研制的緩慢結(jié)核分枝桿菌耐藥機(jī)制目前對(duì)結(jié)核分支桿菌耐藥機(jī)制研究很多，但仍然還沒(méi)完全搞清楚，現(xiàn)在主要有以下3種觀點(diǎn)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與組成發(fā)生變化，使細(xì)胞壁通透性發(fā)生改變，藥物通透性降低，產(chǎn)生降解或滅活酶類，改變了藥物作用靶位結(jié)核分支桿菌中存在活躍的藥物外排泵系統(tǒng)，將菌體內(nèi)藥物泵出，使胞內(nèi)藥物濃度不能有效抑制或殺死細(xì)菌，從而產(chǎn)生耐藥性分子機(jī)制：結(jié)核分枝桿菌基因組上編碼藥物標(biāo)靶的基因或與藥物活性有關(guān)的酶基因突變，使藥物失效產(chǎn)生耐藥耐藥結(jié)核病的流行耐藥結(jié)核病是全球結(jié)核病控制工作的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，世界衛(wèi)生組織估計(jì)，全球每年新產(chǎn)生耐多藥結(jié)核病患者50萬(wàn)人、廣泛耐藥患者約5萬(wàn)人。能及時(shí)

6、得到診斷者不足四分之一。我國(guó)結(jié)核患者數(shù)和耐多藥患者數(shù)均居世界第二位，耐藥結(jié)核病的流行2007-2008年我國(guó)進(jìn)行的耐藥基線調(diào)查結(jié)果：涂陽(yáng)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌總耐藥率為37.79%，其中初治總耐藥率為35.16%，復(fù)治總耐藥率為55.17%，總耐多藥（MDR-TB）率為8.32%，其中初治總耐多藥率為5.71%，復(fù)治總耐多藥率為25.64%，總廣泛耐藥（XDR-TB）率為0.68%，其中初治患者為0.47%，復(fù)治患者為2.06%，根據(jù)此次調(diào)查結(jié)果估算，我國(guó)每年新發(fā)耐多藥肺結(jié)核患者12萬(wàn)例，廣泛耐藥患者近1萬(wàn)例。耐藥結(jié)核病的流行1999年我省結(jié)核分枝桿菌耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果，30個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，總?cè)脒x病例11

7、36例，培陽(yáng)1097例，培陽(yáng)率96.6%，涂陽(yáng)培陰34例，3.0%，污染5例，污染率0.4%，未發(fā)現(xiàn)非結(jié)核分枝桿菌，1097例中初始859例，獲得238例，總耐藥率23.3%，初始耐藥率17.5%，獲得性耐藥率44.5%，總耐多藥率6.4%，初始耐多藥率2.1%，獲得性耐多藥率21.8%。耐藥結(jié)核病診斷藥敏試驗(yàn)?zāi)康模涸\斷 耐藥治療 監(jiān)測(cè)診斷耐藥結(jié)核病，滿足對(duì)臨床結(jié)核病患者耐藥情況的判定。選擇和調(diào)整耐藥結(jié)核病治療方案、制定有效的標(biāo)準(zhǔn)化或個(gè)體化治療方案。開(kāi)展耐藥監(jiān)測(cè)了解某一地區(qū)結(jié)核分枝桿菌的耐藥水平和流行趨勢(shì)。藥敏試驗(yàn)方法基于檢測(cè)標(biāo)本直接方法 直接用涂陽(yáng)(涂片1+以上)標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn) 優(yōu)點(diǎn)：快速得到

8、結(jié)果，較好地反應(yīng)病變部位菌群的耐藥性； 缺點(diǎn)：污染難控制，容易失敗，很難確定接種量/菌活性。間接方法 使用培養(yǎng)物進(jìn)行藥敏試驗(yàn) 優(yōu)點(diǎn)：更好地控制接種量/菌活性 缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)，及時(shí)性差試驗(yàn)方法世界衛(wèi)生組織推薦的藥敏試驗(yàn)方法基于生長(zhǎng)觀察： 固體培養(yǎng)方法 比例法 絕對(duì)濃度法 抗性比率法基于生長(zhǎng)檢測(cè)（產(chǎn)生二氧化碳、 消耗氧氣等） 液體培養(yǎng)法基于基因突變檢測(cè) 探針雜交的方法 基因擴(kuò)增及序列測(cè)定傳統(tǒng)試驗(yàn)方法比例法 法國(guó)的 Canetti , 1963 在臨界藥物濃度下的耐藥比例，能夠更好的克服由接種量引起的變化 臨界菌群比耐藥菌群數(shù)/全菌群數(shù) 1% 、10% 絕對(duì)濃度法 德國(guó)的 Meisnner， 1963

9、 標(biāo)準(zhǔn)化的接種量; 梯度的藥物濃度 臨界藥物菌落數(shù)（10、20菌落）抗性比率法 英國(guó) Mitchson， 1963 RR= MIC被檢菌/MICH37Rv克服了培養(yǎng)基中藥物濃度的控制 方法比較繁瑣，現(xiàn)在基本不怎么使用。比例法和絕對(duì)濃度法的一致性比例法和絕對(duì)濃度法目前是我國(guó)常用的藥敏實(shí)驗(yàn)方法，綜合以往國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道，兩種方法測(cè)試一線4種藥的一致性非常好，均達(dá)到了96%以上，耐藥率無(wú)顯著性差異。目前全球基金項(xiàng)目和國(guó)家對(duì)省級(jí)和省級(jí)對(duì)市級(jí)質(zhì)控都采用了比例法，也與跨國(guó)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控方法一致，與國(guó)際上逐步實(shí)現(xiàn)了接軌。開(kāi)展傳統(tǒng)藥敏實(shí)驗(yàn)的要求程序復(fù)雜: 必須在有質(zhì)量保證的通過(guò)熟練度測(cè)試的實(shí)驗(yàn)室中開(kāi)展；必須按照高致病

10、性病原微生物的要求進(jìn)行檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)為P2及以上級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)有生物安全柜和防止氣溶膠產(chǎn)生的儀器和設(shè)備；必須按標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程進(jìn)行試驗(yàn)；良好的個(gè)人防護(hù)措施以及定期對(duì)操作人員進(jìn)行體檢并進(jìn)行生物安全培訓(xùn)和教育；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有完善的規(guī)章制度和應(yīng)急預(yù)案等。應(yīng)用：應(yīng)與PMDT的擴(kuò)展、治療策略和能力相一致不同實(shí)驗(yàn)室操作（韓國(guó)）實(shí)驗(yàn)室工作人員結(jié)核感染風(fēng)險(xiǎn)的比率工作類型風(fēng)險(xiǎn)比率95% CI涂片人員對(duì)非實(shí)驗(yàn)室人員1.4050.198-9.953培養(yǎng)人員對(duì)非實(shí)驗(yàn)室人員1.8890.267-13.373培養(yǎng)人員對(duì)涂片鏡檢人員1.3440.190-9.511藥敏試驗(yàn)對(duì)非實(shí)驗(yàn)室人員21.4784.502-102.479藥

11、敏試驗(yàn)對(duì)涂片鏡檢15.2833.205-72.881藥敏試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)11.3702.386-54.187比例法藥敏試驗(yàn)方法比例法藥敏試驗(yàn)流程對(duì)照培養(yǎng)基含藥培養(yǎng)基藥物儲(chǔ)存液混合、搖勻基礎(chǔ)液改良L-J100ml1ml磨菌分裝凝固分裝凝固1mg/ml菌懸液10-4 mg/ml 10-2 mg/ml 100倍稀釋100倍稀釋接種0.01ml接種0.01ml2-3周新鮮菌落結(jié)果報(bào)告計(jì)算耐藥百分比： 含藥培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)耐藥百分比= - 100% 對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù) 若耐藥百分比大于或等于1%，則認(rèn)為受試菌對(duì)該抗結(jié)核藥耐藥。結(jié)果計(jì)算對(duì)照管應(yīng)能計(jì)算出實(shí)際菌落數(shù)4周后觀察結(jié)果，如果生長(zhǎng)不良，可稍延后報(bào)

12、告結(jié)果，但不能超過(guò)6周.耐藥菌長(zhǎng)的慢，藥效喪失）結(jié)果報(bào)告 無(wú)藥 Isoniazid Ethambutol 接種物 培養(yǎng)基 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 + + 3 10-5 26 9 0 耐藥百分比 34.6 0.1 結(jié)果解釋 耐藥 敏感影響藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性的因素實(shí)驗(yàn)室布局、設(shè)備、物資是否滿足要求負(fù)責(zé)培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)人員的能力工作量的保證藥物保存不當(dāng)、濃度計(jì)算錯(cuò)誤、效價(jià)計(jì)算不準(zhǔn)確，稀釋不準(zhǔn)確影響藥物的實(shí)際濃度藥敏試驗(yàn)方法選擇不當(dāng)培養(yǎng)物：菌的新鮮程度、傳代次數(shù)、代表性影響藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性的因素培養(yǎng)基：藥物加入到不同培養(yǎng)基后活性的改變（含藥培養(yǎng)基的制備），培養(yǎng)基中某些拮抗劑或化學(xué)

13、物質(zhì)可干擾藥物的作用，培養(yǎng)基中藥物濃度變化（加熱失活、過(guò)濾除菌、不適宜的溶劑導(dǎo)致的不完全溶解）接種： 接種量、菌液的分散度（R、S）、代表性，稀釋度，菌的活性；穩(wěn)定的孵育條件孵育溫度和時(shí)間耐藥的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)結(jié)果的判讀質(zhì)量控制若高稀釋度菌液（10-4mg/ml）在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)少于20個(gè)菌落，則應(yīng)從對(duì)照管傳代培養(yǎng)，重復(fù)試驗(yàn)。每批試驗(yàn)以結(jié)核分枝桿菌參考菌株（H37Rv敏感株） 做為敏感對(duì)照，以檢測(cè)含藥培養(yǎng)基的質(zhì)量、稀釋和接種量等因素。室內(nèi)質(zhì)控對(duì)照培養(yǎng)基的質(zhì)控 可接種快速生長(zhǎng)分枝桿菌，如偶然分枝桿菌，如接種后5天還未長(zhǎng)出菌落，則培養(yǎng)基 未達(dá)到質(zhì)量要求。藥敏培養(yǎng)基的質(zhì)控 菌株H37Rv（AC

14、TT27294）實(shí)間質(zhì)控藥敏試驗(yàn)的熟練度測(cè)試 對(duì)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的菌株進(jìn)行系統(tǒng)的（耐藥株）或隨機(jī)（敏感株）抽查，并采用雙盲進(jìn)行測(cè)試比較?？菇Y(jié)核藥物敏感性試驗(yàn)熟練度測(cè)試從2008年開(kāi)始，省結(jié)核病參比室每年對(duì)宜昌、武漢、荊州、咸寧、黃岡五個(gè)地市結(jié)防院所結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行一、二線抗結(jié)核藥敏試驗(yàn)熟練度測(cè)試。2013年對(duì)全省16個(gè)地市結(jié)防專業(yè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室、耐藥定點(diǎn)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室、?？漆t(yī)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培訓(xùn)和測(cè)試，除一個(gè)實(shí)驗(yàn)室一線藥，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室二線藥結(jié)果不合格外，其他實(shí)驗(yàn)室結(jié)果非常理想。藥敏試驗(yàn)的局限性藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確性高低與測(cè)試的藥物有關(guān)； 對(duì)于一線藥物，INH、RFP準(zhǔn)確性高，而SM、EMB和PZA的可靠性和重復(fù)性較差。

15、對(duì)于二線藥物如氨基糖苷類、多肽類和氟喹諾酮類的藥敏試驗(yàn)重復(fù)性和可靠性較好，其他二線藥尚無(wú)可靠的藥敏試驗(yàn)方法 可靠性差的原因與臨床反應(yīng)的相關(guān)性：臨界耐藥濃度、體外試驗(yàn)不一定完全反應(yīng)藥物在體內(nèi)的作用方法本身的復(fù)雜性和不穩(wěn)定性藥敏試驗(yàn)的局限性藥物濃度的不穩(wěn)定，蛋白結(jié)合、熱滅活、不完全溶解、過(guò)濾除菌和藥物效價(jià)變化等均可導(dǎo)致藥物損失。實(shí)驗(yàn)操作、培養(yǎng)基的PH值、孵育的溫度和時(shí)間都可影響藥敏試驗(yàn)結(jié)果。二線藥敏試驗(yàn)的臨界濃度與藥物的最小抑菌濃度接近，加大了敏感和耐藥的錯(cuò)分幾率，導(dǎo)致可重復(fù)性較差。二線藥物有交叉耐藥，分子機(jī)制不詳。二線藥敏試驗(yàn)結(jié)果的解釋：報(bào)告耐藥：很有可能治療無(wú)效報(bào)告敏感：需要謹(jǐn)慎解釋（結(jié)合用藥

16、史和臨床反應(yīng)）說(shuō) 明醫(yī)生應(yīng)該詳細(xì)了解病人的病史、準(zhǔn)確記錄用藥史，用藥時(shí)間越長(zhǎng)，耐藥的可能性就越高。特別是常規(guī)治療期間出現(xiàn)臨床或細(xì)菌學(xué)治療失敗（涂陽(yáng)或培陽(yáng)）則高度提示耐藥的產(chǎn)生。如果病人治療超過(guò)1月仍涂陽(yáng)或培陽(yáng)，即使藥敏結(jié)果報(bào)告為敏感，也要考慮該藥物“可能耐藥”。如果某一藥物的既往用藥史提示可能由于耐藥而無(wú)效，即使實(shí)驗(yàn)室報(bào)告該藥敏感，也不能將其作為方案中的四個(gè)核心藥物。實(shí)驗(yàn)室報(bào)告耐藥，而病人從未使用過(guò)該藥物的可能性也存在，有可能感染的是原發(fā)性耐藥株，也可能是實(shí)驗(yàn)室的錯(cuò)誤或某些二線藥物藥敏試驗(yàn)特異性有限所致。國(guó)家參比室推薦的耐藥新診斷技術(shù)方法商品檢測(cè)目的液體培養(yǎng)（2007年）Bact/TLERT

17、3D; MGIT診斷結(jié)核感染及藥物敏感性分子線性探針實(shí)驗(yàn)（2008年）GenoType MTBDR and MTBDRplus；INNO-LiPA Rif. TB； 診斷結(jié)核感染及對(duì)異煙肼和利福平的藥物敏感性DNA微陣列芯片法生物結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒診斷結(jié)核感染及對(duì)異煙肼和利福平的藥物敏感性自動(dòng)化檢測(cè)和MDR篩選實(shí)驗(yàn)（2010年）Cepheid GeneXpert 儀器和xpert MTB模塊診斷結(jié)核感染及對(duì)利福平的耐藥性其他正在開(kāi)發(fā)或評(píng)估的新技術(shù)方法商品檢測(cè)目的流體芯片法MDR-TB檢測(cè)熒光定量PCR溶解曲線法檢測(cè)MDR-TB/XDR-TBMODS（顯微鏡觀察藥敏實(shí)驗(yàn)）無(wú)商品化試劑

18、盒檢測(cè)分枝桿菌的藥物敏感性噬菌體生物擴(kuò)增法診斷結(jié)核感染及藥物敏感性新的固體藥敏方法硝酸鹽還原試驗(yàn)（無(wú)商品化試劑盒）診斷菌株對(duì)異煙肼和利福平的敏感性薄層瓊脂培養(yǎng)法（無(wú)商品化試劑盒）診斷結(jié)核感染以及對(duì)異煙肼和利福平的敏感性顏色指示方法刃天青法（無(wú)商品化試劑盒）檢測(cè)菌株對(duì)利福平和異煙肼的敏感性耐藥分子診斷的基本原理利福平/異煙肼耐藥性的產(chǎn)生與結(jié)核分枝桿菌特定基因某些位點(diǎn)的突變相關(guān)?？菇Y(jié)核藥基因基因功能利福平rpoB編碼DNA依賴RNA聚合酶，參與mRNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程異煙肼katG編碼過(guò)氧化氫-過(guò)氧化物酶，參與INH體內(nèi)的轉(zhuǎn)化inhA編碼煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)依賴的enoyl-ACP還原酶，參與

19、脂酸的合成快速藥敏-商業(yè)化線性探針檢測(cè)（LPAs） 可使用涂陽(yáng)痰標(biāo)本和培養(yǎng)物進(jìn)行操作快速（1天）需PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和技術(shù)不能檢測(cè)造成耐藥突變的熱點(diǎn)區(qū)域外的突變價(jià)格比較昂貴4243去 污 染DNA 提取擴(kuò) 增雜交清洗，檢測(cè)顏色結(jié)果解釋LPA操作流程關(guān)于LPA的建議 適用于地區(qū)及以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室 僅適用于涂陽(yáng)標(biāo)本和結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性培養(yǎng)物的檢測(cè) 操作需要至少有3個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室以避免交叉污染 僅能檢測(cè)MDR，XDR的檢測(cè)仍需要依靠傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn) 可以獨(dú)立作為MDR的診斷工具 對(duì)于MDR病人，仍需要傳統(tǒng)的培養(yǎng)（固體或液體培養(yǎng)）檢測(cè)治療效果（培養(yǎng)陰轉(zhuǎn)）建議的覆蓋面: 每50100萬(wàn)人口至少需要1個(gè)LPA實(shí)驗(yàn)室結(jié)

20、核耐藥檢測(cè)基因芯片激光共焦掃描儀軟件判讀結(jié)核耐藥檢測(cè)芯片獲北京市自主創(chuàng)新產(chǎn)品證書(shū)樣品制備儀雜交儀通 量：兩個(gè)一線抗結(jié)核藥速 度： 6 小時(shí)（比傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)法快 50-100 倍）靈敏度：103 CFU/反應(yīng)特異性：對(duì)照設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)；自動(dòng)判讀基于rpoB/katG/inhA的基因突變，快速檢測(cè)分離株或者痰樣本中結(jié)核桿菌多藥耐藥（利福平、異煙肼）。International Journal of Tuberculosis and Lung Disease, 13:914-920, 2009（IF=2.3）45獲國(guó)家醫(yī)療器械證書(shū)和歐盟CE認(rèn)證基因芯片基因芯片是指采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方法，將核酸片段有序地固化于支持物的表面，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中靶分子雜交，通過(guò)特定的儀器對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。檢測(cè)過(guò)程雜交反應(yīng)雜交清洗清洗干燥掃描檢測(cè)數(shù)據(jù)分析檢測(cè)分析PCR擴(kuò)增DNA 提取樣品制備芯片結(jié)果圖例芯片雜交質(zhì)控芯片制備質(zhì)控芯片制備質(zhì)控芯片雜交質(zhì)控靶基因擴(kuò)增質(zhì)控陰性對(duì)照質(zhì)控空白對(duì)照質(zhì)控國(guó)家推薦意見(jiàn)在地市級(jí)以上結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室使用用于涂陽(yáng)患者或者陽(yáng)性培養(yǎng)物Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)利福平耐藥直接標(biāo)本檢測(cè)100分鐘可獲得結(jié)果DNA/RNA提取和純化擴(kuò)增