激素測定原理

1、由內(nèi)分泌腺和內(nèi)分泌細(xì)胞合成和釋放的各種激素(hormone)，隨血液循環(huán)運送 到相應(yīng)的靶器官或靶細(xì)胞，調(diào)節(jié)其代謝或功能，由于不同于通過腺管的外分泌腺 體，故稱為內(nèi)分泌(endocrine)。一些內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的物質(zhì)也可通過自分泌 (autocrine)或旁分泌(paracrine)的方式發(fā)揮作用。機(jī)體主要的內(nèi)分泌腺包 括垂體、甲狀腺、甲狀旁腺、腎上腺、胰腺和性腺，由其所分泌的多種激素對調(diào) 節(jié)各系統(tǒng)、器官、組織和細(xì)胞的代謝，維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起重要作用。內(nèi)分泌系 統(tǒng)通過精細(xì)的調(diào)節(jié)機(jī)制來維護(hù)機(jī)體各系統(tǒng)的功能協(xié)調(diào)和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，一旦出現(xiàn) 任何偏離，如內(nèi)分泌腺破壞、功能亢進(jìn)、激素合成缺陷，使激素分泌過多

2、或過少； 或激素受體和(或)受體后缺陷、激素抗體出現(xiàn)等使對激素的敏感性異常，導(dǎo)致 多系統(tǒng)甚至全身代謝或功能失衡，引起內(nèi)分泌疾病。內(nèi)分泌疾病的實驗診斷主要 包括：檢測血液或體液中激素及其代謝物水平或轉(zhuǎn)運蛋白的濃度；對某些內(nèi) 分泌腺特有的生理功能、調(diào)節(jié)代謝的對象進(jìn)行檢測；動態(tài)功能試驗；此外，尋 找代謝紊亂證據(jù)對協(xié)助診斷也十分重要，部分疾病還應(yīng)檢查自身抗體等。但是， 影響內(nèi)分泌疾病實驗診斷的因素很多，如生物節(jié)律性變化、年齡、藥物、妊娠等， 而且標(biāo)本采集的時間、身體姿勢和運動狀態(tài)、飲食和生活習(xí)慣及實驗方法等均可 對檢測結(jié)果的評價產(chǎn)生影響。因此，在診斷內(nèi)分泌疾病時，實驗檢查結(jié)果應(yīng)密切 結(jié)合臨床進(jìn)行分析。

3、目錄-內(nèi)分泌激素的測定方法-甲狀腺激素及有關(guān)蛋白測定-甲狀旁腺素與降鈣素測定-腎上腺皮質(zhì)激素測定顯示部分顯示全部內(nèi)分泌激素的測定方法編輯本段回目錄激素測定法(methods of hormone determina-tion)對體液或組織中激素 含量的測定方法。按照世界衛(wèi)生組織分類原則，可把激素測定方法分為生物鑒定， 化學(xué)測定，蛋白結(jié)合測定和細(xì)胞化學(xué)測定4類。生物鑒定以樣品中所含激素引起動物的某些特異生物反應(yīng)為基礎(chǔ)的測定方 法。是20世紀(jì)20年代發(fā)展起來的。例如，胰島素降低血糖；雄激素引起閹雞雞 冠生長;雌激素使嚙齒類動物陰道上皮角質(zhì)化；甲狀腺激素可以促進(jìn)蝌蚪變態(tài)等。 生物鑒定有兩個特點：活體

4、注射；以生物反應(yīng)作為鑒定指標(biāo)。因此，對鑒定 條件的嚴(yán)格控制十分重要。如給藥途徑、注射劑量、溶劑和懸浮液的性質(zhì)，動物 種類、年齡、性別和健康狀況等。此外，所選終點反應(yīng)指標(biāo)應(yīng)為特異反應(yīng)。如腎 上腺素能升高血糖，但不能依此指標(biāo)來鑒定腎上腺素。因為胰高血糖素、促腎上 腺皮質(zhì)素、腎上腺皮質(zhì)激素也可通過不同作用途徑引起血糖上升。此外，各種激 素在體內(nèi)的反應(yīng)可能是多途徑的；不同動物對同一激素的反應(yīng)也可能有所不同。 由于這些復(fù)雜情況在選擇生物鑒定的最終反應(yīng)指標(biāo)時，必須要考慮其客觀性、精 確性、靈敏性、特異性、重復(fù)性和方便性。測定技術(shù)應(yīng)立足于儀器的客觀測定， 而不是依賴于主觀估計。如性甾體激素能改變?nèi)说捏w型和毛

5、發(fā)分布，但這些指標(biāo) 難以客觀測定。生物鑒定的優(yōu)點是反應(yīng)特異的生物活性，能真正代表激素的生物效應(yīng)，所以 它是一切測定方法的基礎(chǔ)。生物鑒定的缺點是靈敏性差；動物用量大；實驗延續(xù) 時間長，難以鑒定多量樣品?；瘜W(xué)測定20世紀(jì)40年代隨著化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對一些小分子激素（如甾 體激素）的分子結(jié)構(gòu)以及它們的代謝產(chǎn)物有了比較明確的了解，在此基礎(chǔ)上發(fā)展 起來的以激素或代謝產(chǎn)物分子上的特異基團(tuán)同某種試劑的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)的測 定方法。它只能測定一些小分子化合物，靈敏度比生物鑒定高但操作程序復(fù)雜， 使用不普遍。蛋白結(jié)合測定目前最通用的一種激素測定方法，也是命名最混亂的一種測 定方法。通常用的免疫測定法，放射免疫測定

6、法，受體結(jié)合測定法和血漿蛋白結(jié) 合測定法，都屬于這一類測定方法。世界衛(wèi)生組織根據(jù)其測定原理對蛋白結(jié)合測 定法提出新的分類標(biāo)準(zhǔn)和統(tǒng)一命名。這些分類標(biāo)準(zhǔn)包括：在測定中是否需要標(biāo) 記物；標(biāo)記的是被測物還是結(jié)合蛋白；在測定系統(tǒng)中被測物過量還是結(jié)合蛋 白過量；測定的是被測物本身（直接法）還是結(jié)合蛋白（間接法）；在測定 系統(tǒng)中是否需要分離步驟。據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，以免疫測定為例，介紹幾種測定方法：不用標(biāo)記物的蛋白結(jié)合測定法一一免疫測定法基于被測物（抗原）與其特 異結(jié)合蛋白（抗體）結(jié)合時所出現(xiàn)的沉淀線作為測定指標(biāo)的，在測定系統(tǒng)中加入 的抗體是過量的。操作較為迅速和方便。但這一測定法只適應(yīng)于測定大分子物質(zhì)， 被測物的

7、濃度較高，只有這樣才形成能用肉眼看到的抗原-抗體復(fù)合物，這類方 法應(yīng)用較少。標(biāo)記抗原的免疫測定法放射免疫測定法這是以標(biāo)記抗原和未標(biāo)記抗原 與同一抗體的競爭性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的。隨著未標(biāo)記抗原增加，在反應(yīng)系統(tǒng)中復(fù)合物中標(biāo)記的抗原越來越少，因而在 儀器上所測到的放射性記數(shù)也越來越少，由此可以作出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，并從標(biāo)準(zhǔn) 曲線上查出被測樣品的含量。放射免疫測定法既能測定蛋白質(zhì)類的大分子物質(zhì)， 也能測定半抗原一類的小分子物質(zhì)。放射免疫測定法的靈敏度高，樣品用量少， 并便于自動化操作。放射免疫測定法屬結(jié)合蛋白（抗體）限量測定，標(biāo)記的是被 測物（抗原），所以它屬于直接測定。標(biāo)記抗體的免疫測定免疫放射計量測定法

8、這是標(biāo)記特異抗體。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入過量的標(biāo)記抗體以便使全部被測抗原與之結(jié)合，然后，將結(jié)合和未結(jié) 合的抗體分開。用吸附劑除去未結(jié)合的抗體，因此最后在儀器上測到的是結(jié)合型 的抗體，這是一種間接測定，并且是一種過量蛋白結(jié)合試劑測定法。它與放射免 疫測定法有本質(zhì)上的區(qū)別。過量蛋白結(jié)合試劑測定法反應(yīng)迅速，反應(yīng)更為靈敏， 但特異性較差。為了克服這一不足，有人發(fā)展了一種夾心面包免疫放射計量測定 法，大大提高了特異性和靈敏度。非同位素標(biāo)記的免疫測定除用同位素作標(biāo)記物之外，還有許多化合物可用 作標(biāo)記物。如酶、熒光素、病毒、金屬、紅細(xì)胞、乳酸和其他許多特異顯色顆粒。 非同位素免疫測定的命名可按放射免疫命名的格式來

9、表示。如：放射免疫測定、 酶免疫測定、熒光免疫測定和病毒免疫測定等。用非同位素標(biāo)記抗體的免疫計量測定，也可仿照免疫放射計量測定法的命名 來表示。如：免疫酶計量測定；免疫熒光計量測定。以上僅僅以抗體作為結(jié)合試劑為例命名，對以其他結(jié)合蛋白為結(jié)合試劑相似 的測定，也可以同樣格式命名。不經(jīng)分離步驟的免疫測定法猝滅測定差不多所有標(biāo)記測定法都需要一 種適當(dāng)?shù)姆蛛x步驟，以便把反應(yīng)系統(tǒng)中最終的結(jié)合型和游離型標(biāo)記物分開進(jìn)行測 定。但是分離步驟會導(dǎo)致偏差，影響測定結(jié)果。有些分離技術(shù)需要熟練的技巧。 猝滅型測定法一般用于測定半抗原化合物。其基本原理是，先將標(biāo)記物一一酶與 半抗原分子結(jié)合，當(dāng)抗原同酶結(jié)合后在空間構(gòu)型上

10、發(fā)生變化，此抗原與抗體結(jié)合 后其酶不再同底物發(fā)生作用，酶的活性失效（或稱作猝滅）。細(xì)胞化學(xué)測定放射免疫測定法雖然靈敏度高，操作方便，但所測結(jié)果不能 完全代表激素的生物活性，因為激素分子的免疫活性中心和生物活性中心往往是 不一致的。近年有人發(fā)展了一種細(xì)胞化學(xué)測定方法，大大推進(jìn)了測定技術(shù)的發(fā)展。許多激素在其靶細(xì)胞中，可直接或間接引起一系列氧化還原反應(yīng)，不同劑量 的激素在靶細(xì)胞中所引起的反應(yīng)程度（或狀態(tài)），可以通過某種組織化學(xué)和細(xì)胞 化學(xué)方法（對特異酶或反應(yīng)底物的顯色反應(yīng)）顯示出不同程度的染色，這些染色 反應(yīng)可通過非常靈敏的儀器（微光密度測定儀）定量地記錄下來，這就是細(xì)胞化 學(xué)測定法的基本原理。細(xì)胞

11、化學(xué)測定，實際上是一種生物測定法，但是，它兼有放射免疫測定法和 生物測定法的雙重優(yōu)點，其靈敏度比放射免疫測定法高5001000倍。血液樣品 可作1 : 100或1 ： 1000稀釋，每次測定血液用量極微。在測定技術(shù)上，現(xiàn)已開 始用組織切片來代替組織塊，大大提高了測定效率。此方法的缺點是延續(xù)時間長， 并要用貴重儀器和消耗大量干冰，所以難以推廣。一、生物測定法是傳統(tǒng)的測定方法，它是用動物體內(nèi)實驗或其離體器官、組織、細(xì)胞和激素 受體的體外實驗，直接測定激素的生物活性，其優(yōu)點是直接反映激素的生物活性。 該方法是在相同條件下比較待測定樣品和標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生相同效應(yīng)的劑量比值。標(biāo)準(zhǔn) 品與待測樣品性質(zhì)要相同或近似

12、，其實驗數(shù)據(jù)要根據(jù)生物變異規(guī)律和設(shè)計原理進(jìn) 行統(tǒng)計學(xué)處理。生物活性測定包括以下幾種方法：（一）動物體內(nèi)的測定方法是用整體或切除某一內(nèi)分泌腺體的小鼠、大鼠、豚鼠、貓、犬和兔等動物，按規(guī) 定劑量及途徑給予動物標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品，根據(jù)產(chǎn)生同樣生物效應(yīng)，比較標(biāo)準(zhǔn)品 和待測樣品比值，推知待測樣品的生物活性。該方法適用于藥用激素測定。其優(yōu) 點可直接反映激素的生物活性，而其缺點是標(biāo)本量大、動物多，受動物種屬、來 源、體質(zhì)、年齡及性別等因素影響反應(yīng)的靈敏度和準(zhǔn)確性。（二）細(xì)胞生物化學(xué)方法不僅保持生物活性，并且可定量測定。（三）離體細(xì)胞培養(yǎng)測定生物活性法是通過體外培養(yǎng)原代細(xì)胞或細(xì)胞株，加入激素標(biāo)準(zhǔn)與激素樣品，產(chǎn)生

13、的生物 功能改變，得知激素樣品的生物活性，該方法適于小樣品激素活性的測定，是研 究激素功能與結(jié)構(gòu)關(guān)系及其影響因素的較好方法。（四）放射受體分析法（radioreceptor assay,RRA）是利用過量的放射性核素標(biāo)記配體和非標(biāo)記的配體，如激素的放射性核素標(biāo)記物 和激素樣品在一定條件下，競爭有限的特異受體結(jié)合位置的方法。利用放射受體 分析法計算激素受體的相對結(jié)合親和力，可以推知待測樣品有無激素生物活性。 RRA方法只代表激素與受體結(jié)合親和力，并不能準(zhǔn)確反應(yīng)激素結(jié)合后的生物活性, RRA值與生物活性是成正比關(guān)系。二、免疫測定法（一）凝集試驗是利用顆?？乖苯优c抗體反應(yīng)發(fā)生凝集現(xiàn)象稱為直接凝集反

14、應(yīng)。若將一些 可溶性抗原（或抗體）吸附在惰性顆粒載體表面上，與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生 凝集反應(yīng)，稱作間接凝集反應(yīng)。抗原與顆粒載體相連接的稱正向間接凝集反應(yīng)。 抗體與顆粒載體相連接的稱反向間接凝集反應(yīng)。這種方法用于早孕診斷的快速免 疫膠乳法和羊紅細(xì)胞血凝抑制試驗。（二）免疫比濁法此法分為兩種，一種是膠乳比濁分析，是利用直徑在15600nm的化學(xué)膠乳顆粒 作為抗原的包被物，提高抗原和抗體的結(jié)合物的濁度，用光度計可直接測定，靈 敏度可達(dá)10 8mol/L。另一種是直接比濁法，是使抗原和抗體的復(fù)合物在溶液中形成足夠大的沉淀顆粒，可以用透射光或散射光比濁法分析，其靈敏度在 10 810 3mol/L,上

15、述方法用于血清、尿或腦脊液中含量較高的特殊蛋白測 定。（三）標(biāo)記免疫測定它可分為抗原過量分析法和抗體過量分析法。在抗原過量分析法又分為放射性免 疫分析法和非放射性免疫分析法1 .抗原過量分析法（飽和分析法或稱競爭抑制分析法），其基本反應(yīng)是標(biāo)記抗 原與未標(biāo)記抗原競爭有限抗體或特異結(jié)合劑上的結(jié)合位點。（1）放射免疫分析（radioimmunoassay, RIA）：是將同位素分析的靈敏性和抗 原-抗體反應(yīng)的特異性的兩大特點結(jié)合起來的一種微量測定技術(shù)。其原理是標(biāo)記 抗原與其特異抗體反應(yīng)，產(chǎn)生標(biāo)記抗原-抗體復(fù)合物，反應(yīng)物與產(chǎn)物保持著可逆 的動態(tài)平衡。如果在反應(yīng)系統(tǒng)中同時存在非標(biāo)記抗原，且標(biāo)記與非標(biāo)記抗

16、原對于 抗體是具有同樣的親和力，當(dāng)抗體與標(biāo)記抗原的量都是恒定時，抗原和標(biāo)記抗原 之和大于抗體上有效結(jié)合點的數(shù)目時，根據(jù)同位素稀釋原理，隨著抗原濃度的增 加，標(biāo)記抗原和抗體的復(fù)合物數(shù)量相應(yīng)減少，則抗原與標(biāo)記抗原和抗體的復(fù)合物 之間存在著函數(shù)關(guān)系。因為標(biāo)記抗原對抗體結(jié)合被未標(biāo)記抗原的競爭結(jié)合所抑制, 故產(chǎn)生一條抑制曲線。這條曲線反映了標(biāo)記抗原結(jié)合程度或游離程度或者是二者 之比與未標(biāo)記抗原的函數(shù)關(guān)系，這一條曲線就是對樣品進(jìn)行定量的依據(jù)。RIA方 法廣泛應(yīng)用于內(nèi)分泌的各種激素，包括蛋白質(zhì)、多肽和類固醇激素的測定，但必 須記住“免疫反應(yīng)”與生物活性并不是同義詞，具有免疫反應(yīng)部分，不一定具有 生物活性。（

17、2）非放射性免疫測定法：是應(yīng)用非同位素標(biāo)記物，如酶標(biāo)記物適用于樣品中 含有較高的被測物濃度的免疫測定法，還有一些非同位素標(biāo)記物，如化學(xué)發(fā)光及 熒光標(biāo)記物，具有的靈敏度超過同位素標(biāo)記物。應(yīng)用這些非同位素標(biāo)記物建立的 免疫分析法有酶免分析法（enzyme immunoassay,EIA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay, CLIA）及時間分辨熒光免疫分析法。酶免 疫分析（EIA）是將酶催化放大作用和抗原與抗體免疫反應(yīng)的特異性相結(jié)合的一 種測定方法。根據(jù)測定過程中是否需要將結(jié)合的酶標(biāo)記物和游離的標(biāo)記物分離， 而分為均相分析與非均相分析兩類。均相測定中由

18、于免疫反應(yīng)后有酶活性改變， 不需將游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物分開。該方法操作步驟簡單、快速，靈敏度為10 9mol/L,主要用于小分子半抗原測定，但因受樣品中非特異干擾物影響，其靈 敏度不如非均相EIA高。非均相EIA分為競爭性和非競爭性兩大類，競爭性非 均相又分為酶標(biāo)記抗原和酶標(biāo)記抗體的EIA。酶標(biāo)記抗原與抗原相互競爭有限抗 體結(jié)合，洗去游離抗原和酶標(biāo)記抗原，測定固體抗體結(jié)合的酶標(biāo)記抗原的酶活性， 即可測得被測物量。此法快速，非特異性結(jié)合低，但靈敏度不如RIA高。酶標(biāo)抗 體EIA是用酶標(biāo)記抗體作為示蹤劑，使標(biāo)記抗體和未標(biāo)記抗體競爭同固相抗原結(jié) 合，固相抗原結(jié)合的酶標(biāo)抗體同被測抗體的濃度成反比，測定

19、固相抗原結(jié)合的酶 標(biāo)抗體的酶活性，即可定量測定被測抗體濃度，其靈敏度同RIA。2 .抗體過量分析酶聯(lián)免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)： 是非競爭性、非均相的酶免疫分析法或稱夾心EIA,它是抗體過量分析法，其基 本原理是使用兩種抗體，一種作固定抗體，另一種作酶標(biāo)抗體，被測抗原可同時 與兩種抗體結(jié)合，夾在兩種抗體之間，這種雙位點夾心原理明顯提高了測定特異 性和靈敏度，目前被廣泛應(yīng)用。免疫放射分析法(immunoradiometric assay,IRMA):是應(yīng)用雙位點，非競 爭性結(jié)合和過量抗體的免疫放射分析技術(shù)，其基本原理是選擇一

20、對各自與被測抗 原分子上不同位點結(jié)合，彼此完全互不干擾的單抗，其中一種作為固相抗體，另 一種抗體用放射性核素標(biāo)記，作為被測抗原進(jìn)行特異性定量指示劑，經(jīng)過免疫反 應(yīng)，根據(jù)固相載體上抗體-抗原-標(biāo)記抗體結(jié)合物的放射活性，可知被測物抗原的 含量。這種方法特異好、靈敏度高、快速、簡便，但不適于小肽和類固醇激素， 因為小分子物質(zhì)很難獲得抗兩個不同結(jié)合位點的單抗。熒光免疫分析(fluorescence immunoassay,FIA)是將熒光素標(biāo)記在抗體 或蛋白質(zhì)抗原上作為示蹤物，根據(jù)相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合原理，測定結(jié)合的或者游 離的熒光強(qiáng)度，即可知被測抗體含量。由于熒光測定中受操作系統(tǒng)的本底熒光的 干擾及激

21、發(fā)光源散發(fā)光的影響，方法穩(wěn)定性差，靈敏度也受限，進(jìn)一步創(chuàng)建了以 鑭系元素螯合物作為示蹤物的免疫測定方法稱時間分辨熒光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,Tr-FIA)這種方法消除非特異本底熒光的 干擾，提高方法特異性和靈敏度，且標(biāo)記化合物穩(wěn)定、方法簡單、快速。化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合的一種新型超微量分析技術(shù)。其檢測原理與 放射免疫(RIA)和酶免疫分析法(EIA)相似，不同之處是以發(fā)光物質(zhì)代替同位 素或酶作為標(biāo)記物，或以發(fā)光試劑作為相應(yīng)底物，并借助其發(fā)光強(qiáng)度直接

22、進(jìn)行測 定。其測定方法可分為使用限量的特異性抗體進(jìn)行競爭結(jié)合分析，也可應(yīng)用過量 的標(biāo)記抗體做非競爭結(jié)合分析。發(fā)光反應(yīng)系統(tǒng)中是以化學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)的，該系統(tǒng) 是由發(fā)光化合物、氧化劑、催化劑組成，不同發(fā)光體系的反應(yīng)條件、發(fā)光強(qiáng)度和 波長等均有差別，所以出現(xiàn)了許多種方法，如化學(xué)發(fā)光免疫測定法、化學(xué)發(fā)光酶 免疫分析法、化學(xué)發(fā)光ELISA等，這些方法具有無污染、穩(wěn)定、快速及超微量分 析等優(yōu)點，被廣泛用于抗原、半抗原和抗體的檢測。免疫測定方法已廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域，其中在婦產(chǎn)科用來測定雄激素(睪酮、雙 氫睪酮、脫氫異雄酮、雄烯二酮)、雌激素(雌酮、雌二醇、雌三醇、雌四醇)、 孕激素(孕酮、17 口-羥孕酮)、人

23、絨毛膜促性腺激素、人胎盤催乳素、促黃體 生成素、促卵泡生成素、性激素結(jié)合蛋白、生長激素抑制素、泌乳素等激素的測 定。在婦科腫瘤疾病診斷中也廣泛應(yīng)用。腫瘤標(biāo)志物的檢測方法腫瘤標(biāo)志物(tumor marker)是腫瘤組織和細(xì)胞由于癌基因或抑癌基因和其 他腫瘤相關(guān)基因及其產(chǎn)物異常表達(dá)所產(chǎn)生的抗原和生物活性物質(zhì)，在正常組織和 良性疾病時，幾乎不產(chǎn)生或產(chǎn)量甚微，可在腫瘤患者組織、體液和排泄物中檢出， 它反映了癌的發(fā)生和發(fā)展過程及腫瘤相關(guān)基因的激活或失活程度。此外，在患者 機(jī)體內(nèi)，由于腫瘤組織侵潤正常組織，引起機(jī)體免疫功能和代謝異常，產(chǎn)生一些 生物活性物質(zhì)和因子，雖然這些物質(zhì)和因子特異性低,但與腫瘤的發(fā)生

24、發(fā)展有關(guān)， 也可用于腫瘤診斷，故也將其稱為腫瘤標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)志物可分為兩大類，即由 腫瘤組織產(chǎn)生及腫瘤與宿主相互作用而產(chǎn)生的兩類腫瘤標(biāo)志物。前者包括分化抗 原（淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物）、胚胎抗原、同功酶、激素、組織和器官特異抗原、 癌基因和抑癌基因及其產(chǎn)物、癌基因病毒的整合DNA、糖蛋白或其他糖蛋白或糖 脂、多胺及唾液酸等。另一類宿主反應(yīng)標(biāo)志物包括血清鐵蛋白、免疫復(fù)合物、急 性期蛋白、同功酶、白細(xì)胞介素-2受體、腫瘤壞死因子及新喋呤等。檢測腫瘤 標(biāo)志物除一些血清酶可用測定活力的方法定量外，對無酶活力的蛋白類或其它腫 瘤標(biāo)志物大多需用免疫法測定?，F(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物主要用于輔助臨床診斷、觀察 治療反應(yīng)、

25、盡早發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷等。但目前還沒有任何一種標(biāo)志 物是對腫瘤絕對特異的，因為某些良性病變也可出現(xiàn)不同程度陽性反應(yīng)，所以， 腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果，必須結(jié)合臨床分析，才能得到正確診斷。三、分子生物學(xué)的應(yīng)用傳統(tǒng)的疾病診斷方法大致有三種即臨床學(xué)診斷、血清學(xué)診斷及生化學(xué)診斷，這些 方法都是以疾病的表型改變?yōu)橐罁?jù)的。在大多情況下表型改變出現(xiàn)的時間較晚， 且不是很特異，使明確診斷有一定困難。因此，應(yīng)用基因診斷，直接探查基因存 在和缺陷，從而對人體狀態(tài)和疾病作出診斷。按其原理分為三大類：DNA探針技 術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）技術(shù)和二者結(jié)合的技術(shù)。

26、 DNA探針技術(shù)包括Southern印跡雜交、檢測DNA圖譜、Northern印跡雜交主要 檢測mRNA而不是DNA、點雜交、液相雜交、夾心雜交、寡核苷酸探針技術(shù)及原 位雜交。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)包括：PCR結(jié)合斑點雜交檢測基因點突變。PCR結(jié)合酶解DNA限制性片段長度多態(tài)性（restriction fragment length polymorphism,RFLPs）作為遺傳標(biāo)志，進(jìn)行缺陷基因的連鎖分析和產(chǎn)前診斷。 多重PCR快速檢出基因中的缺失及點突變。PCR產(chǎn)物的直接測序?；蛟\斷是 一種強(qiáng)有力的診斷方法，它已廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前診斷，單基因病或多基因病診斷以 及基因治療遺傳病都有很大進(jìn)

27、展。四、生物芯片技術(shù)在醫(yī)學(xué)中應(yīng)用生物芯片（biochip或bioarray）是根據(jù)生物分子間特異相互作用的原理， 將生化分析過程集成于芯片表面，從而實現(xiàn)對DNA、RNA、多肽、蛋白質(zhì)以及其 他生物成分的高通量快速檢測。主要是通過不同方法將生物分子（寡核苷酸、cDNA、 genomic DNAx多肽、抗體、抗原等）固著于硅片、玻璃片（珠）、塑料片（珠）、 凝膠、尼龍膜等固相介質(zhì)上，形成的生物分子點陣。在此類芯片的基礎(chǔ)上，又發(fā) 展出微流體芯片（microfluidics chip）或稱微電子芯片（microelectronic chip） 即為微縮實驗芯片（lab-on-a-chip）。目前最常見的生物芯片是基因芯片（gene chip；又叫DNA chip，DNA microarray），其中基因表達(dá)譜芯片的應(yīng)用最為廣 泛，這種芯片可以檢測整個基因組范圍的眾多基因在mRNA