免疫檢測(cè)與防治課件

1、第11講 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) 的基本原理免疫學(xué)檢測(cè)方法： 依據(jù)免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的測(cè)定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)方法。 一、基本原理 抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，并呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象，如凝集或沉淀，以此檢測(cè)抗原或抗體。第一節(jié) 體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 的特點(diǎn)及其影響因素抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) 1.抗原抗體結(jié)合的特異性 抗原抗體結(jié)合除空間構(gòu)型互補(bǔ)外，還以氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水鍵等非共價(jià)方式結(jié)合，一定條件下復(fù)合物可解離成游離狀態(tài)，且仍保持原有性質(zhì)。 2.抗原抗體結(jié)合的可逆性 復(fù)合物解離度主要取決于特異性抗體超變區(qū)與相應(yīng)抗原表位三維空間構(gòu)型的互補(bǔ)程度，互補(bǔ)程度越高，分子間距越小，作用力越大，兩者結(jié)合越

2、牢固，不易解離；反之，則容易發(fā)生解離。 3.抗原抗體結(jié)合的比例與濃度 抗原與抗體結(jié)合比例合適，則可形成肉眼可見(jiàn)的大結(jié)合物；反之形成肉眼不可見(jiàn)的小結(jié)合物。 4.抗原抗體反應(yīng)的階段性 第二階段：可見(jiàn)反應(yīng)階段。數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)至數(shù)日，因素影響多。第一階段：特異結(jié)合階段。僅幾秒到幾分鐘、尚無(wú)可見(jiàn)反應(yīng)；抗原抗體反應(yīng)的主要影響因素1.抗原和抗體濃度、比例2.電解質(zhì)3.溫度 4.酸堿度二、血清學(xué)反應(yīng)的種類 1.凝集反應(yīng)細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體，或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)現(xiàn)象。 2.沉淀反應(yīng)毒素、組織浸液以及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反

3、應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物。3.免疫標(biāo)記技術(shù)用酶、熒光素、同位素等物質(zhì)標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，檢測(cè)抗原或抗體的技術(shù)。如免疫酶技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫測(cè)定。第一抗體抗原第一抗體抗原第二抗體生物酶第一抗體抗原-第二抗體顯色 第二節(jié) 免疫細(xì)胞的測(cè)定 淋巴細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)主要的免疫細(xì)胞，檢測(cè)其數(shù)量和功能是了解機(jī)體免疫狀態(tài)的重要手段。 一 、淋巴細(xì)胞的分離 常用ficoll（淋巴細(xì)胞分離液）密度梯度離心除去紅細(xì)胞、粒細(xì)胞而獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），再經(jīng)吸附除去單核細(xì)胞而得到淋巴細(xì)胞。若要分離T細(xì)胞，可用尼龍毛柱、抗CD3單抗、E花結(jié)試驗(yàn)等分離。二、免疫細(xì)胞細(xì)胞的鑒定 根據(jù)細(xì)胞的某些標(biāo)志，

4、采用免疫熒光法、磁珠分離法、流式細(xì)胞術(shù)等方法可確定細(xì)胞不同類型和比例。（一）T細(xì)胞功能測(cè)定 1. T細(xì)胞增殖試驗(yàn) 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等絲裂原及抗CD3單抗等能非特異性激活培養(yǎng)的T細(xì)胞，使其轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞的試驗(yàn)。 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定 在該增殖過(guò)程中，細(xì)胞DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成增加，細(xì)胞形態(tài)改變。也可檢測(cè)特異性抗原致敏的T細(xì)胞。 （1）氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷摻入法：該法靈敏、可靠，應(yīng)用廣泛，但需特殊儀器（液體閃爍儀），易有放射性污染。 （2）MTT法：該法操作簡(jiǎn)單，無(wú)放射性污染，但敏感性相對(duì)較差。 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定2. 細(xì)胞毒試驗(yàn)： Tc、NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞有直接殺傷作

5、用，可根據(jù)待檢效應(yīng)細(xì)胞的性質(zhì)，選用相應(yīng)的靶細(xì)胞。 （1）51Cr釋放法：用51Cr標(biāo)記靶細(xì)胞，記數(shù)儀測(cè)定釋放的51C活性。 （2）MTT法：其原理與增殖試驗(yàn)相同，但甲 生成量與靶細(xì)胞溶解破壞水平呈負(fù)相關(guān)。 （3）乳酸脫氫酶釋放法：細(xì)胞受損致膜通透性改變，乳酸脫氫酶釋放到培養(yǎng)液中。 3 細(xì)胞因子檢測(cè)： CK的檢測(cè)有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，鑒定分離的淋巴細(xì)胞，監(jiān)測(cè)某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞免疫功能。常用的檢測(cè)方法有以下三種：（1）ELISA法：（2）生物活性測(cè)定法：（3）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）： 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定 4 皮膚實(shí)驗(yàn) 正常機(jī)體對(duì)某種抗原產(chǎn)生細(xì)胞免疫后，用相同抗原做皮膚試驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)以局部紅腫為

6、特征的DTH。細(xì)胞免疫正常時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，細(xì)胞免疫低下則呈陰性反應(yīng)。 該方法簡(jiǎn)便，可幫助診斷某些病原微生物感染（如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌等）及免疫缺陷病等。 淋巴細(xì)胞功能測(cè)定（二）B細(xì)胞功能測(cè)定 B細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫，檢查B細(xì)胞的數(shù)量與功能是確定體液免疫是否正常的重要手段。1 B細(xì)胞增殖試驗(yàn)2 抗體形成細(xì)胞的測(cè)定：吸附有特異性抗原的SRBC與抗體形成細(xì)胞分泌的Ig特異性結(jié)合后活化補(bǔ)體，溶解SRBC。又稱溶血空斑試驗(yàn)。第12講 免疫學(xué)防治 “國(guó)防建設(shè)”學(xué)習(xí)要求：1.掌握人工主動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。免疫學(xué)防治：應(yīng)用免疫學(xué)理論預(yù)防和治療疾病，包

7、括免疫預(yù)防和免疫治療。一、疫苗1.定義：為預(yù)防、控制傳染病的發(fā)生和流行，用于人體預(yù)防接種的生物制品。包括疫苗、菌苗和類毒素。2.基本要求：安全實(shí)用有效對(duì)絕大多數(shù)人群有保護(hù)性作用，使用后群體抗感染能力強(qiáng)，理想的疫苗：同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫，維持時(shí)間長(zhǎng)。接種程序簡(jiǎn)單，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)，便于運(yùn)輸和儲(chǔ)存，價(jià)格低?；钜呙缫筮z傳性狀穩(wěn)定，無(wú)返祖、致癌和致畸作用，無(wú)熱原性和過(guò)敏原?？垢腥究鼓[瘤計(jì)劃生育防止免疫病理?yè)p傷3.疫苗應(yīng)用二、免疫預(yù)防方式免疫預(yù)防自然免疫：顯性或隱性感染， 胎兒從母親獲得人工免疫：人工主動(dòng)免疫 人工被動(dòng)免疫免疫預(yù)防自然免疫：顯性或隱性感染， 胎兒從母親獲得人工免疫：人工主動(dòng)免疫 人工被

8、動(dòng)免疫（一）人工主動(dòng)免疫1.定義：用疫苗接種機(jī)體，使之產(chǎn)生 特異性免疫，從而預(yù)防感染的措施。2.疫苗滅活疫苗（死疫苗）與減毒活疫苗活疫苗：人工的方法使病原體減毒或從自然界篩選病原體無(wú)毒株或微毒株所制成的活的微生物制劑。也稱減毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。死疫苗：選用免疫原性強(qiáng)的病原微生物，經(jīng)人工大量培養(yǎng)，經(jīng)理化方法將其殺死后制成的疫苗。無(wú)毒力，但仍保持其免疫原性。傷寒、百日咳、鉤端螺旋體、斑疹傷寒、乙型腦炎等疫苗死疫苗與活疫苗特點(diǎn)的比較含義：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。類毒素特點(diǎn)：失去毒性而仍保留其免疫原性。新型疫苗亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。食用轉(zhuǎn)基因植物以預(yù)防接種已初步成功

9、。含義：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。類毒素特點(diǎn)：失去毒性而仍保留其免疫原性。（二）人工被動(dòng)免疫1.定義：給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細(xì)胞因子等制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。2.制劑抗毒素：細(xì)菌外毒素或類毒素免疫動(dòng)物制備的血清。注意：對(duì)人而言既是抗體也是抗原，因而要防止超敏反應(yīng)的發(fā)生，使用前需皮試。舉例：破傷風(fēng)抗毒素，白喉抗毒素人免疫球蛋白制劑：混合血漿或胎盤血中分離制成的免疫球蛋白濃縮劑。舉例：肝炎、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎。細(xì)胞因子和單克隆抗體： IFN- IFN-、 G-CSF、GM-CSF、 IL-2，人源單抗。舉例：腫瘤、艾滋病有效預(yù)防手段。（三）人工主動(dòng)與被動(dòng)免疫的特點(diǎn)比較3.計(jì)劃免疫 第三節(jié) 免疫治療 針對(duì)異常的免疫狀態(tài)，應(yīng)用免疫制劑、免疫調(diào)節(jié)藥物或其他措施來(lái)調(diào)節(jié)或重建免疫功能，以達(dá)到治療疾病的目的。免疫增強(qiáng)療法免疫抑制療法感染、腫瘤超敏反應(yīng)、自身免疫病、移植排斥反應(yīng)、嚴(yán)重炎癥免疫重建療法再障、免疫缺陷主動(dòng)免疫治療被動(dòng)免疫治療刺激或增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)，使機(jī)體自身產(chǎn)生抵抗疾病的能力輸注免疫效應(yīng)細(xì)胞或分子，發(fā)揮治療疾病的作用又稱 過(guò)繼免疫療法特異性免疫療法非特異性免疫療法主動(dòng)被動(dòng)主動(dòng)被動(dòng)瘤苗抗體、TIL佐劑（卡介苗）LAK、細(xì)胞因子可用