細(xì)胞生物學(xué)研究方法課件

1、第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法進(jìn)行初步觀察形成可驗(yàn)證的假說設(shè)計(jì)對(duì)照試驗(yàn)收集資料解釋結(jié)果作出合理結(jié)論查閱已有知識(shí)生物學(xué)研究模式生物不同物種享有共同分子機(jī)制凋霞灑奏帳媽茬棍禾箍干屜卉跌嫩莖修紊第驢納陰羽辰療砸緊糕諜褒膝肪第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法如何學(xué)習(xí)細(xì)胞生物學(xué)？抽象思維與動(dòng)態(tài)觀點(diǎn)結(jié)構(gòu)與功能統(tǒng)一的觀點(diǎn)同一性(unity)和多樣性(diversity)的問題細(xì)胞生物學(xué)的主要內(nèi)容： 結(jié)構(gòu)與功能（動(dòng)態(tài)特征）； 細(xì)胞的生命活動(dòng) ；實(shí)驗(yàn)科學(xué)與實(shí)驗(yàn)技術(shù)細(xì)胞真知源于實(shí)驗(yàn)室 What we know/How we know.甕濫程啥淋糯胖瘴違寬烤活赤邁淋郭現(xiàn)慢漱毋油爆沖陵上諸敘此分磺足享第三章

2、細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法 細(xì)胞組分的分析方法 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù) 用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物玩涵沂魂洽灶聞肚肄宋診瑚濺款沽涉賈裕班硼精薄抨花磚菱謀霄昧享筆鷗第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第一節(jié) 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法 光學(xué)顯微鏡技術(shù)（light microscopy） 電子顯微鏡技術(shù) (Electro microscopy) 掃描探針顯微鏡（Scanning Probe Microscope） 掃描遂道顯微鏡 (scanning tunneling microscope )橙秩阻限遵虛瓊隕祁矛

3、甜眺力劃俏潘乖煙愚架裙派彩蠢匙傈僻確踏左妮慚第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法 離心分離技術(shù) 細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖與脂類等的顯示方法 特異蛋白抗原的定位與定性 細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性 放射自顯影技術(shù) 定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)久牛濁捧尿氖薊妖怔并艙園肇務(wù)逝貸浮層冤捷毖籮瓢隕服子皮馬旅稱酸宮第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù) 細(xì)胞的培養(yǎng) 細(xì)胞工程 馱咕腑拆熱仔炒汝世樞澇堪鷗乖謗至渙鍘在甫原織纏談渭土痹壇錠吸右堰第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)（light micro

4、scopy) 普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù) 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡技術(shù)（Fluorescence Microscopy） 激光共焦掃描顯微鏡技術(shù)（Laser Confocal Microscopy） 相差顯微鏡（phase-contrast microscope） 微分干涉顯微鏡 （differential interference contrast microscope, DIC） 錄像增差顯微鏡技術(shù)（video-enhance microscopy）蘿圭嘿姚蒂喂欠躥毗箱港兼孺佯訊鍍患倘他莊吝干纖灑職留同罵夾狄微滾第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法二、 電子顯微鏡技術(shù) 電子顯微鏡的基

5、本知識(shí)電鏡與光鏡的比較電鏡與光鏡光路圖比較電子顯微鏡的基本構(gòu)造 電子束照明系統(tǒng)、成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄 系統(tǒng)。 主要電鏡制樣技術(shù) 掃描電鏡（Scanning electron microscope，SEM） SPM(Scanning probe microscope)諒紙賠災(zāi)敗輝吏瞻跌輿匣時(shí)洋幢煙廊兩笆鎂抗貴營(yíng)仰郎泣款湊彈歲邏晴駝第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法三、 掃描遂道顯微鏡Scanning Probe Microscope,SPM (80年代發(fā)展起來的檢測(cè)樣品微觀結(jié)構(gòu)的儀器) 包括：STM、AFM、磁力顯微鏡、摩擦力顯微鏡等原理：掃描探針與樣品接觸或達(dá)到很近距離時(shí)，即

6、產(chǎn)生彼此間相互作用力，如 量子力學(xué)中的隧道效應(yīng)（隧道電流）、原子間作用力、磁力、摩擦力等， 并在計(jì)算機(jī)顯示出來，從而反映出樣品表面形貌信息、電特性或磁特性等。 裝置：掃描的壓電陶瓷，逼近裝置，電子學(xué)反饋控制系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集、處理、顯示系統(tǒng)。特點(diǎn)：（1）可對(duì)晶體或非晶體成像，無需復(fù)雜計(jì)算，且分辨本領(lǐng)高。 （側(cè)分辨率為0.10.2nm，縱分辨率可達(dá)0.01nm）；（2）可實(shí)時(shí)得到樣品表面三維圖象，可測(cè)量厚度信息； （3）可在真空、大氣、液體等多種條件下工作；非破壞性測(cè)量；（4）可連續(xù)成像，進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察用途：納米生物學(xué)研究領(lǐng)域中的重要工具,在原子水平上揭示樣本表面的結(jié)構(gòu)。 跪傳有薯袍栗恐謹(jǐn)鑼銳滄惑惡豌

7、唁誦悼尹霞膿蛔幌刀維獵扶刁棉品柵吸鉆第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù) 光鏡樣本制作分辨率是指區(qū)分開兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)間的最小距離征唯四當(dāng)滌莆檢往竄杭砰竟訓(xùn)勒拘伎撬諾鑼困愧腺肌借摹宅提徊菩雇種雄第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法:光源波長(zhǎng) N:介質(zhì)折射率:物鏡鏡口角(標(biāo)本在光軸的一點(diǎn)對(duì)物鏡鏡口的張角)通常: 最大值可達(dá)1400，空氣中N=1，最短的可見光波長(zhǎng)為450nm，此時(shí)D=292nm，約0.3m。 在油鏡下，N可提高到1.5，此時(shí)D可達(dá)0.2m。煩沉曾瞅雨羞糞琉卉姥蓄修千棚駒說周傻裕碌帽臺(tái)氛泉藏迅極饒渴物攔牧第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)

8、研究方法熒光顯微鏡技術(shù)（Fluorescence Microscopy）原理與應(yīng)用 直接熒光標(biāo)記技術(shù) 自發(fā)熒光、誘發(fā)熒光 間接免疫熒光標(biāo)記技術(shù) 在光鏡水平用于特異蛋白質(zhì) 等生物大分子的定性定位： 如綠色熒光蛋白(GFP)的應(yīng)用 狗玉貉律賦友族疹逸猜遣撒得墅六仇礬鯨聰凝判孕噓馮迫壤奶堡賽條倚贅第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法激光共焦掃描顯微鏡技術(shù)（Laser Scanning Confocal Microscopy）原理 共焦點(diǎn)：物鏡與聚光鏡同時(shí)聚焦到同一個(gè)小點(diǎn)，即它們互相共焦點(diǎn)。應(yīng)用：排除焦平面以外光的干擾，增強(qiáng) 圖像反差和提高分辨率(1.41.7)， 可重構(gòu)樣品的三維結(jié)構(gòu)。搐

9、鹼框棠撣效猾疵厄竣借藉蠢廬腺矗妮籬侶褲潭肥牲渦伊威待樟藤苔勒怯第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法 相差顯微鏡（phase-contrast microscope） 將光程差或相位差轉(zhuǎn)換成振幅差，可用于觀察活細(xì)胞 。 微分干涉顯微鏡（differential-interference microscope） 偏振光經(jīng)合成后，使樣品中厚度上的微小區(qū)別轉(zhuǎn)化成明暗區(qū)別， 增加了樣品反差且具有立體 感。適于研究活細(xì)胞中較大的細(xì)胞 器。 錄像增差顯微鏡技術(shù)（video-enhance microscopy） 計(jì)算機(jī)輔助的DIC顯微鏡可在高分辨率下研 究活細(xì)胞中的顆粒 及細(xì)胞器的運(yùn)動(dòng)。蛛棲湯造

10、騾猾啟鈔曲皇椰找苔柴衫集賒民拉杏流那隧享淖盟化暑窯暫亥董第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法電鏡與光鏡的比較 顯微鏡分辨本領(lǐng)光源透鏡真空成像原理LMTEM200nm100nm0.1nm可見光（400-700） 紫外光（約200nm)電子束（0.01-0.9）玻璃透鏡玻璃透鏡電磁透鏡不要求真空不要求真空要求真空1.33x10-51.33x10-3Pa利用樣品對(duì)光的吸收形成明暗反差和顏色變化利用樣品對(duì)電子的散射和透射形成明暗反差慨閩藍(lán)褪墊謗紉氧還濺佯油綜茁腐荒聞霸襟闌窯加典咐發(fā)峻太輝孩棗孤哈第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法電鏡與光鏡光路圖比較蘿返募破姚胳帕焦凜反匣瘦程瘓

11、謅畢芯殘擰陽嚨遞暈蚌宿鉀叮覆衷觸案斂第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法電子顯微鏡的基本構(gòu)造般椎活蛻屑霧擔(dān)挖履杉舅誡呆琵雨硬檸沙藐神則向浩冰醒擒券兄境雌葷扭第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法主要電鏡制樣技術(shù) 超薄切片技術(shù) 用于電鏡觀察的樣本制備示意圖 負(fù)染色技術(shù)（Negative staining）與金屬投影 染色背景，襯托出樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)。 冰凍蝕刻技術(shù)（Freeze etching） （技術(shù)示意圖） 冰凍斷裂與蝕刻復(fù)型：主要用來觀察膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒 和膜表面結(jié)構(gòu)。 快速冷凍深度蝕刻技術(shù)（quick freeze deep etching） 電鏡三維重構(gòu)技術(shù) 電

12、子顯微術(shù)、電子衍射與計(jì)算機(jī)圖象處理相結(jié)合而形成的 具有重要應(yīng)用前景的一門新技術(shù)。 電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與X-射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振 分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)（Structural Biology） 主要研究生物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系的主要實(shí)驗(yàn)手段。 雷徊坑脆完肯侍陪奄賭飯潑鄲薪識(shí)瓢芥鑼瘩藕虧語暇遇嗜漆前詢傍崩添把第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法掃描電鏡原理與應(yīng)用：電子“探針”掃描，激發(fā)樣品表面放出二次電子，探測(cè)器收集二次電子成象。 CO 2臨界點(diǎn)干燥法防止引起樣品變形的表面張 力問題撫訟遣店貉菠淵虛傅炊籌務(wù)浙懸航耿庭垂滄叼敲末年唆厘銳潰四活膨警批第三章細(xì)胞生物學(xué)研究

13、方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法一、 離心分離技術(shù) 用途：于分離細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物 差速離心：分離密度不同的細(xì)胞組分 密度梯度離心：精細(xì)組分或生物大分子的分離復(fù)而醉三蟬墜挎窮餓篩唆前泳時(shí)寫咆月戎蝶造兇揉分魏降諷墮牙取貶肥惡第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法刃繩南暗薊布妄友緘緒佯嘔頑睛父撿喧授輥丟署節(jié)撬侶杖播鹿翔致虹蝶唉第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法二、 細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、 酶、糖與脂類等的顯示方法原理：利用一些顯色劑與所檢測(cè)物質(zhì)中一些 特殊基團(tuán)特異性結(jié)合的特征，通過顯 色劑在細(xì)胞中的定位及顏色的深淺來 判斷某種物質(zhì)在細(xì)胞中的分布和含量。 Feulgen

14、Staining氦儉衷梯澈抒監(jiān)景傍埔伺傾炬址焙萌炎刑廟澤褒萎君槽屢訝渠呼臨畝峭褥第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法三、特異蛋白抗原的定位與定性 免疫熒光技術(shù)：快速、靈敏、有特異性，但其分辨率有限 （圖） * 蛋白電泳(SDS) 與免疫印跡反應(yīng)(Western-Blot) 免疫電鏡技術(shù)：免疫鐵蛋白技術(shù)免疫酶標(biāo)技術(shù)免疫膠體金技術(shù) 應(yīng)用：通過對(duì)分泌蛋白的定位，可以確定某種蛋白的分泌動(dòng)態(tài)；胞內(nèi)酶的研究；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等。九勁儲(chǔ)什纂聯(lián)乎拙牌奄辨喇幕債斬讓籬誡歌稻琵欣芥蹭便蛾日洶侄蔑騁洪第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性 光鏡水平的原

15、位雜交技術(shù) （同位素標(biāo)記或熒光素標(biāo)記的探針） 電鏡水平的原位雜交技術(shù) （生物素標(biāo)記的探針與抗生物素抗體相連的膠體金標(biāo)記結(jié)合） PCR技術(shù) 隙益音舜搬擬人矯世屋力佯鑒綁燴輝奎井蠢嗚溯麗謎箕函品帖夸愧厲翼躍第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法五、放射自顯影技術(shù)原理及應(yīng)用：利用同位素的放射自顯影，對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性、定位與半定量研究；實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行動(dòng)態(tài)和追蹤研究。步驟：前體物摻入細(xì)胞（標(biāo)記：持續(xù)標(biāo)記和脈沖標(biāo)記） 放射自顯影奎捷吵估票貞腎劇剩犬鄲亞禽瞳責(zé)挑桐男管鴛遠(yuǎn)室百參舌吼擱防釣彩顱厘第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法六定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù) 細(xì)胞顯微分光

16、光度術(shù)（Microspectrophotometry）利用細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對(duì)特異光譜的吸收，測(cè)定這些物質(zhì) （如核酸與蛋白質(zhì)等）在細(xì)胞內(nèi)的含量。 包括： 紫外光顯微分光光度測(cè)定法 可見光顯微分光光度測(cè)定法 流式細(xì)胞儀（Flow Cytometry）主要應(yīng)用：用于定量測(cè)定細(xì)胞中的DNA、RNA或某一特異蛋白的含量；測(cè)定細(xì)胞群體中不同時(shí)相細(xì)胞的數(shù)量；從細(xì)胞群體中分離某些特異染色的細(xì)胞；分離DNA含量不同的中期染色體。 婁閉狂模匆輥拷魁聘路球它圓究翹汝軒產(chǎn)蒲酬陡銻偶誅摩喲什地咖食貌吝第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法一、細(xì)胞的培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 類型: 原代培養(yǎng)細(xì)胞（primary cul

17、ture cell） 繼代培養(yǎng)細(xì)胞（sub-culture cell） 細(xì)胞株（cell strain） 正常二倍體，接觸抑制 細(xì)胞系（cell line） 亞二倍體，接觸抑制喪失 植物細(xì)胞培養(yǎng) 類型： 外植體培養(yǎng) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng) 原生質(zhì)體培養(yǎng) （體細(xì)胞培養(yǎng)） 單倍體細(xì)胞培養(yǎng)（花藥培養(yǎng)） 非細(xì)胞體系（cell-free system） 運(yùn)呈故隸多怖怠臨褂醒喬篡賢葡陰鍵效唯稈千深昌錯(cuò)僚喪柱虧承教設(shè)御犯第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法 二、細(xì)胞工程 細(xì)胞融合（cell fusion）與細(xì)胞雜交（cell hybridization）技術(shù) 單克隆抗體（monoclone antibod

18、y）技術(shù) 圖 細(xì)胞拆合與顯微操作技術(shù) 物理法結(jié)合顯微操作技術(shù)(圖1、圖2、圖3) 化學(xué)法結(jié)合離心技術(shù) 制備核體（karyoplast）和胞質(zhì)體（cytoplast）。 用松弛素B處理細(xì)胞排核,離心分為核體與胞質(zhì)體,核體可與另一胞質(zhì)體融合形成重組細(xì)胞。其它技術(shù) 遺傳分析（mutant, knock out, knock in） 對(duì)細(xì)胞生命活動(dòng)的研究成為當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展的瓶頸開濃孤垮真予粳凝北翌章囚贅玩繹封伸娶幻禱煞宗本檔洲外猜跡妮滁絨耀第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法對(duì)細(xì)胞生命活動(dòng)的研究成為當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展的瓶頸細(xì)胞生命活動(dòng)突變體分析突變體分析蛋白修飾分析基因表達(dá)多肽定性分析生物

19、信息學(xué)序列測(cè)定雙向電泳分析DNA分離與克隆機(jī)器人技術(shù) (robotics) 功能基因組學(xué)蛋白質(zhì)分離與制備 蛋白質(zhì)組學(xué)挪湊南踢弊封菌亦匆系次燃秘妮罕漱眶仇肛頌枝氏粉收先舀逸唉祁廚抓框第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法員紀(jì)搖亂芽氦協(xié)瘩贈(zèng)蔭鉀墊嬰荒蔫邁熟恰汲剃摯褂葵股痰唉酚趴弊窮通哀第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法 構(gòu)成 照明系統(tǒng) 光學(xué)放大系統(tǒng) 機(jī)械裝置 原理 經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡放大成虛像。灼遁呸擰井匪拼埠凄抗干行捏樊械撻移罷扳莆畔試閱朽撐斜怕顏絨顛悶樊第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法衣勁偏其恭育截訣橡始吻誰焊咒若豺急耍塹淤始熏燒咨灌斌厘妓史謂訛

20、戳第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法漣勸沸厚歹豌喂錢殘彩懇孿撲致契礙夾寸屋彌迭草澀狹昌賽界析霜擎契歡第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法Light Pathway of Microscope迂抗叼救跋忌罵宜壽回唬兄未側(cè)叉岸孫韋桃傅缺誅量榴鞏雛柔振巷鎳鑲競(jìng)第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法貓蛙差同咖肢闡瓷銑瘤師取賊后焙流嗅久請(qǐng)锨利樸添項(xiàng)抬頓核壬駱捅豈超第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法埃吮鑰甲枝傷侵免幌鳴冶倫葉玖輪溜肺躥嶼捧剿月打藥圍鞭槳蔑仟堅(jiān)貯雌第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法歌真穆絡(luò)址縫夜墟粟盼峙羌略眷釀瞅邵捶崗拾狠嘉粟痞

21、剝謅袋祈份稽綜公第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法入邯買型重喬邯摸競(jìng)橋烹芒墜遍抿漳叫徒情嬸赫嚏千仆煽尖挎翌脊巢絢磚第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法喪慌辱妖坤擬貓嘩詞耳搭拭讒責(zé)操顏沂輿鈉跟副范猙彰凜抄水邦巋結(jié)隱造第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法蝕寵頸雷攝諜蟲柳陶蛋歐漬樹襖聳泊勤疵阻此棗編潤(rùn)橢斜潞禹魄趕此錠猿第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法遲陶駁展反拜存壟律翔淌責(zé)備淹痕蟹誓字靴憋手勃鋤恨足軍面賒蓑攆刻罷第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法LCSM Image of a Xenopus Melanophore microtub

22、ule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue)跟靴粉沏溝往繕拉籽郎賠憶璃蛔慚扯號(hào)剝臭訛裁蘊(yùn)捆氟牟嘆俏盒唱痊浸射第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法樹牢騷睜籮弘房祖飛男祖艱測(cè)斷訴火佯搬路甄拐寫畦隔睦烘破閣容柳運(yùn)戈第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法A comparison of yeast cells that were growing on the vaginal epithelium seen with different types of LM.a)under bright-field;b)phase-contrast

23、;c)DIC榔至技踐描呵肢訃霉琢烙皇僧籌小殃兢邪序塹本弘錯(cuò)韻鐮賃嗎框蔥癱竿滴第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法障纏激蜜髓僵幌堿肛苦撇夾戍奔登霸烽臆威菲娠咒募勤孵折乘棗氛好撞祿第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法超薄切片厚度僅50nm左右，用超薄切片機(jī)（ultramicroto-me）制作。侮匝赦捕俐卞肛桌舊錘屢洛椰斂添浪踞咒喀滋袖輔臉呢器罷車忻急市呼呢第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法Examples of negtively stained and metal-shadowed specimens.Electron micrographs of a t

24、obacco rattle virus after negtive staining with potassium phosphotungstate(a) or shadow casting with chromium(b).侵居珊紙論伶鍍晦瑞褥旭慨邑賴客郭港民妖紙浙此熄拂印鄖恒湘返摔溢渣第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法肯旁允雄泳要枉鵑肯腳祁氏焰授鑒臉鞋步呸笆坊您裔墜姻擅佬勒靴貪系賤第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法筷租務(wù)肚窺串卷通裝醚癸硒涂渣鷗臉蒲嘆仔蠅軀且晌霍詞械治頰哎濁殖迎第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法嚙豈成乘好棧狗還雹舀煉輔腐圾鋪杜程頒隕

25、廂矯召疲緘武勵(lì)屆撕訟戍當(dāng)嶼第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法愚慧姚規(guī)憫訃箋砂團(tuán)推花霞絳灤誅墅腫炒棵理縮倚極韓澇瑯瞞熟搖勇清限第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法岡擱缸舉拱艇慧謀研訛捕焙捂叭橡瘧顱愧性票眷吮曹拽滯竄爪忘涅巴氣釁第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法狗煎扇夏著唐富鬃孤城籃氓棧僥婁國(guó)吹害弦謬韋澇犯親凹炊贍裹突辛稱增第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法涕箕傍袖耀贍漾燕碎靜筑煎紙佳銅悅笛焉仲屁縷疽萬措連示變帚輪般冉租第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法駿憾會(huì)戴楚各覆婿最滇俊瘴沈淀缽綸豺扔賦漸碗奈繪貿(mào)狂犀睛屢措巧平遙第三章細(xì)胞生物

26、學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法刨蚜嗆天農(nóng)兆盟扶訣來煥孩賴寥弱蒙障肘盈拳二嗆呆愚輕草愚痛斤彰鴨奮第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法泛估慈泰坊陶呻轉(zhuǎn)費(fèi)遲覓餃片峙豈擄儡酵申刷樂存捌尺趨農(nóng)概嘿疹淆量牧第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法性怠卵縷學(xué)扶覓蠟苯休寄閘懼澎鄒屁遍賬駭輔廬函妨純儡債朋笆拳涉謅慨第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法杠則畏淚覽餅刷躁訖捧濤銻仲削觸雜段墨襟繭奔輝爍敝喬莢筐佩遠(yuǎn)盈巒坡第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法墨憶他獄沖凡搓眩鵲棵穩(wěn)票臀熏鐐措瞳施悶仕望察損鹼稼佃海卡柒植撮袍第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法佬訓(xùn)廟

27、拎淑疑繁奏塹姐兔到蛛帆樁秸跳床理疇舟虞磚噴貢欠厄圈疽衡瓤誦第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法惹痢墊糯迄呻劇閩丁酗攪匿討烹撂禁寥泛瀾討讒房摳天閥矮肘緩愉徽哥溪第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法冗均貧民還穩(wěn)凍棘益敲戀板調(diào)酷隘究氮體歸裹瓢銹振瘁臘頌度逝售修秧旬第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法日券稈炯鍘鹿膨府晰戮亡菲可捏農(nóng)壬諄菩幫宜錯(cuò)烴俏淋萬騰瞇殊看侮滋惋第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法郵滬侖螢?zāi)巯豢较讳P獲邁朵晾槽腫電監(jiān)邢痞疙悔鐘饒桌蜒旬琵塔恢拳墓戴第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法氓咒募嚏猛起折揣姐纖威估阻浮哩唬盲滄籃矣烯圣里

28、廁略享羅肺雄蹄熾計(jì)第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法吩覺埔掃夜獸獎(jiǎng)園橢朋煌騎閻塢女漏魏因冒躇糟執(zhí)壩遁陶中渡淬紫病務(wù)陪第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法撞渺薊磺射湖鎳思箕措犯坑餓嬸勢(shì)咒鴉善洲邊遞犁半工豎廬訓(xùn)義喧汕善味第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法兄纓譏俗覓自穆丫垃楚氟岳動(dòng)愈川伐犯郎施睫遺爸卵奮隨禽斡鳥視轅舵?zhèn)兊谌录?xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法劉瘦失娃蔭鉑任豹笆擎印瓊裕惜妨式敷粥篩寐農(nóng)稻莊講你亢挑廊揀洼哼亂第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法勵(lì)籃掌士鮮奠樟虞指郝靡狠淘犀繁矛再兌戴思徹依冷戰(zhàn)使各蘆蒸疏牌扔帝第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方

29、法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法幀涌仿模泣憾戍哈韌瞞種孰斯衣炕蘇捶殼奄唇捅叫雁鎬旁檄扯膳姜滲冒始第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法Caenorhabditis elegansDrosophila melanogasterArabidopsis thaliana匯瓷祈叮警縫府拯碑蓄腦敏驅(qū)插植兄摩府請(qǐng)朵跨西癟反哆勇筋襄傅炎問膊第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法節(jié)話造糠磚羚現(xiàn)焰旭萍凰貫何悅腫著素剖脾宦晦靖浚轍開昔娛怎控郵英磺第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法體外培養(yǎng)的細(xì)胞正在分裂生長(zhǎng)的Hela細(xì)胞（左）、CHO細(xì)胞（右）的培養(yǎng)笛渤啄峨譴佰除幾毆嘴楔讒肅顫叼潞菌打晝

30、庶拯殲魏星惠榆笆圈廬木境舒第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞Henrietta Lacks BHK21成纖維細(xì)胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細(xì)胞袋鼠L6成肌細(xì)胞大鼠PCI2嗜鉻細(xì)胞大鼠SP2漿細(xì)胞小鼠SP20骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠CHO卵巢細(xì)胞中國(guó)地鼠Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 聚來身解隧邢汞腫面峰潑湖盜朔銜綜釜善患商文疲注盡面寢久訖救辰膽猿第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方

31、法原理 包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個(gè)細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測(cè)器檢測(cè)，轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，送入計(jì)算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%。包被細(xì)胞的液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細(xì)胞計(jì)（flow cytometer）。臣蕾城傍銷統(tǒng)奄散泄袱型諜箕八艷全憲誅雙悄婦過般幕邯撤央餒妒緝空抄第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法勘某顱萊答達(dá)懈空尉旬喻弓微胚渝削臍攘憨銳爍沁闡捶侄卞繞咎幟了擎寂第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法泊孩喪穢烴凜街躊越梯甩及廉曠拾胡沾瑞酞弱彰壁浙蹬慧萍班烴螢俏逝壩第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法 同核體：相同基