液相色譜分析條件選擇

1、第四章高效液相色譜法和超臨界流體色譜法4.5.1 一般條件選擇4.5.2 分離類型的選擇4.5.3 流動相的選擇第五節(jié)液相色譜分析條件的選擇choice of analytical condition for HPLCHigh performance liquid chromatography and Supercritical fluid chromatography 2022/7/304.5.1 一般條件的選擇1. 影響分離的因素與提高柱效的途徑 液體的擴(kuò)散系數(shù)僅為氣體的萬分之一，則在高效液相色譜中,速率方程中的分子擴(kuò)散項B/u較小，可忽略不計，即 H = A + C u 液體的黏度比氣體

2、大100倍，密度為氣體的1000倍，故降低傳質(zhì)阻力是提高柱效主要途徑。載體粒度較大時的LC曲線。2022/7/30 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色譜中，不可能通過增加柱溫來改善傳質(zhì)。分離過程需要保持恒溫。 改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。上圖為粒度較大時的LC曲線左圖為粒度較小時的LC曲線2022/7/30 2.流速 流速是調(diào)整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。 3.固定相及分離柱 氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。2022/7/304.5.2 分離類

3、型選擇2022/7/304.5.3 流動相的選擇選擇流動相時應(yīng)注意以下幾個普遍性的問題： （1）盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。 （2）避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。 （3）試樣在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。 （4）選擇的流動相應(yīng)滿足檢測器的要求。如當(dāng)使用紫外檢測器時，流動相不應(yīng)有紫外吸收。2022/7/30 在選擇流動相時，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。常用溶劑的極性大小順序為： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮

4、正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷己烷煤油(最小) 當(dāng)純?nèi)軇┎荒軡M足分離要求時，多采用混合溶劑或梯度洗脫。 2022/7/30多元混合溶劑的溶劑極性參數(shù)計算 式中i 為混合溶劑中各溶劑的體積百分?jǐn)?shù)。 二元混合溶劑的則為 式中A， B分別為二元混合溶劑中溶劑A和溶劑B的體積百分?jǐn)?shù)。 2022/7/30多元混合溶劑的溶劑極性參數(shù)計算 色譜分析需要調(diào)節(jié)流動相極性使試樣組分的容量因子k的數(shù)值在適宜范圍內(nèi)。 對于正相色譜，二元溶劑的極性參數(shù)P 和組分的k值存在如下關(guān)系： 式中、分別為初始和調(diào)節(jié)后二元溶劑的極性參數(shù)。k1、k2為組分相應(yīng)的容量因子。2022/7/30

5、例4-3 在一反相色譜柱上，當(dāng)流動相為30%甲醇和70%水(體積比)時，某組分的保留時間為25.6min，死時間為0.35min，如何調(diào)節(jié)溶劑配比使組分容量因子為5？ 解：初始值 = 0.75 即調(diào)整溶劑比例為75%甲醇和25%水可使該組分的k值為5。2022/7/30溶劑的選擇性 溶劑和樣品分子間的作用力用接受質(zhì)子的能力xe、給予質(zhì)子的能力xd和靜電力xn(由偶極矩決定)三種參數(shù)來表征，并以xe、xd和xn構(gòu)成一個三角坐標(biāo)圖 。 溶劑可分為八組而分別位于圖中不同區(qū)。I組的xe值較大，屬質(zhì)子受體溶劑；VII組的xd值較大，屬質(zhì)子給于體溶劑；V組的xn值較大，屬偶極作用力溶劑。同組溶劑在分離中具有相似的選擇性，不同組差別較大。2022/7/30溶劑的選擇性2022/7/30請選擇內(nèi)容結(jié)束4.1 高效液相色譜法的特性 4.2 高效液相色譜儀 4.3 液相色譜固定相與