食品工程畢業(yè)論文-蘑菇多糖的提取

1、-PAGE . z.畢業(yè)論文論文題目: 蘑菇多糖的提取 所在學(xué)院：食品工程分院 專業(yè)班級：學(xué)生：指導(dǎo)教師：二0一五年 四 月-. z目 錄題目 HYPERLINK l _Toc416341124摘要及關(guān)鍵詞 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc4163411241前言1HYPERLINK l _Toc4163411252 材料與方法1HYPERLINK l _Toc4163411262.1 試驗材料與試驗方法1HYPERLINK l _Toc4163411272.2 主要儀器與試劑1HYPERLINK l _Toc4163411292.2.1測定方法1HYPERLI

2、NK l _Toc4163411292.2.2蘑菇多糖的提取流程2HYPERLINK l _Toc4163411313.結(jié)果與分析2HYPERLINK l _Toc4163411323.1熱水法提取蘑菇多糖的方案2HYPERLINK l _Toc4163411333.1.1提取的方法2HYPERLINK l _Toc4163411343.1.2提取的步驟3HYPERLINK l _Toc4163411353.2多糖提取率的計算3HYPERLINK l _Toc4163411364.討論3HYPERLINK l _Toc4163411374.1正交實驗確定最正確提取工藝3HYPERLINK l

3、_Toc4163411384.1.1正交實驗確定微波輔助熱水提法最正確提取工藝3HYPERLINK l _Toc4163411394.2結(jié)論4HYPERLINK l _Toc416341153參考文獻5HYPERLINK l _Toc416341152致6-. z蘑菇多糖的提取摘 要 :蘑菇多糖是從蘑菇子實體中提取的水溶性蛋白多糖，是其主要活性成分，蘑菇多糖是提高人體免疫力的首選營養(yǎng)品。蘑菇多糖的主要藥理活性有：有較強的抗癌活性，是三高人群和癌癥患者的理想營養(yǎng)品。關(guān)鍵詞 :蘑菇多糖，提取The mushroom polysaccharide e*tractionAbstract: mushro

4、om polysaccharide from mushroom polysaccharide e*tracted from fruit body of water-soluble protein, is the main active ingredient, mushroom polysaccharide is to improve the immunity of choice for nutrition. Mushroom polysaccharides of the main pharmacological activities: strong anticancer activity, i

5、s the three high crowd ideal nutrition and cancerKeywords：Mushroom polysaccharide and e*tract-. z1前言蘑菇多糖對正常機體并無免疫促進作用，但能使荷瘤式或感染后的機體的免疫應(yīng)答得以提高。其制劑在動物體篩選試驗中未見直接抗癌效果，卻明顯促進體外淋巴細胞培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)化作用。曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)胸腺切除的動物注射抗淋巴細胞血清后，可削弱蘑菇多糖的抗腫瘤活性，且它的作用還能被巨噬細胞抑制劑角叉菜膠和硅膠所削弱。所以說，蘑菇多糖是一種胸腺依賴型T細胞導(dǎo)向并有巨噬細胞參與的特殊免疫佐劑。它能識別脾臟及肝臟中抗原的巨噬細胞，促

6、進淋巴細胞活化因子的產(chǎn)生，釋放各種輔助性T細胞因子，增強宿主腹腔巨噬細胞吞噬率，當(dāng)宿主機體注射蘑菇多糖數(shù)小時后，一些具生理活性的血清因子如急性期蛋白誘導(dǎo)因子、血管擴和出血誘導(dǎo)因子、IL-1生成誘導(dǎo)因子、IL3和集落刺激因子的水平到達峰值。這些因子作用于淋巴細胞、肝細胞、血管皮細胞后，產(chǎn)生許多有效免疫應(yīng)答，同時導(dǎo)致胸腺的前體T細胞趨于成熟、分化、增殖并向釋放。2材料與方法2.1 試驗材料與試劑原料：蘑菇試劑：蒸餾水，葡萄糖，苯酚，鋁片，3NaHCO 固體，濃硫酸，95%乙醇稀鹽酸，PH試紙，復(fù)合酶木瓜蛋白酶：纖維素酶=2：12.2 主要儀器與設(shè)備設(shè)備和儀器：100ml容量瓶，6個50ml容量瓶，

7、玻璃棒，蒸餾裝置溫度計、沸石、三口燒瓶、 冷凝管，燒杯假設(shè)干，錐形瓶假設(shè)干，棕色瓶一個，抽濾瓶，1、2、5、10ml吸液管，電子天平，真空枯燥箱，恒溫水浴鍋，紫外分光光度計，粉碎機，40、60、80、100目的篩子， DL700-0.551.5超高壓等靜壓機大隆高壓設(shè)備廠，真空泵，THZ-82A臺式恒溫振蕩器，臺式離心機2.2.1 測定方法1、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的配制 精細稱取105枯燥至恒重的葡萄糖100.0mg，加蒸餾水溶解并定容于100ml容量瓶中，搖勻，配成濃度為1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液備用。 2、5%苯酚試劑的配制。 苯酚水浴加熱溶解后稱取100g，加鋁片0.1g(先用1：6的鹽酸除去

8、鋁片外表氧化鋁后，再稱量使用)，參加碳酸氫鈉30g，蒸餾，收集178-182的餾分，取餾出液7.5g，參加蒸餾水150mL，得5.0的苯酚溶液，置于棕色瓶中備用。 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚硫酸比色法，用紫外分光光度計測定多糖含量。 精細吸取已配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml置于6個50ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度線，搖勻。精細吸取2ml，分別參加5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速參加5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，以溶劑蒸餾水為空白作對照，在400600nm掃描，最大吸收波長為490nm。 在49

9、0nm處，測吸光值，以濃度為縱坐標(biāo)，吸光值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度Yug/ml與吸光值*的回歸方程：Y=15.336*-0.0298，R2=0.9997。在2.515.0 ug/ml圍呈線性關(guān)系2.2.2 蘑菇多糖的提取流程蘑菇多糖屬于極性大分子化合物，其特定的構(gòu)造與免疫活性密切相關(guān)。一般認為:增加多糖溶解度有利于提高其生理活性;中等相對分子質(zhì)量多糖的活性超過過高的或過低的相對分子質(zhì)量多糖;可溶于熱水的多糖被證實有抗腫瘤活性。目前蘑菇多糖的提取多采用熱水及稀堿溶液，防止在強酸、堿溶液中進展，否則極易造成多糖中糖苷鍵斷裂及構(gòu)象變化。常用的別離純化方法大致經(jīng)過沸水浸提、乙醇沉淀

10、、透析及柱層析等步驟。成分功能蘑菇多糖是從優(yōu)質(zhì)蘑菇子實體中提取的有效活性成分，蘑菇多糖中的活性成分是具有分支的- (1-3)-D-葡聚糖，主鏈由-(1-3)-連接的葡萄糖基組成，沿主鏈隨機分布著由-(1-6)連接的葡萄糖基，呈梳狀構(gòu)造。研究說明蘑菇的活性多糖成分-(1-3)-D- 葡聚糖對抑制異源的、同源的、甚至是遺傳性的腫瘤都有效。分子式:(c6h10o5)n ，分子量:4080萬。蘑菇的主要成分是多糖類和不飽和脂肪酸，還含有大量的可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D的麥角甾醇和菌甾醇，經(jīng)熱水提取的蘑菇多糖可調(diào)節(jié)人休有免疫功能的T細胞活性，可降低甲基膽蒽誘發(fā)腫瘤的能力。香菇對癌細胞有強烈的抑制作用，對小白鼠肉瘤

11、180的抑制率為97.5%，對艾氏癌的抑制率為80%。蘑菇還含有雙鏈核糖核酸，能誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素，具有抗病毒能力。功能主治:不能手術(shù)或復(fù)發(fā)性胃癌、肝癌、膀胱癌，使用本品能緩解病癥，提高病人免疫功能，糾正微量元素失調(diào)。蘑菇含有水溶性鮮味物質(zhì)，可用作食品調(diào)味品，其主要成分是5-烏苷酸等核酸成分。香味成分主要蘑菇酸分解生成的香菇精(lentionione)。所以蘑菇是人們重要的食用、藥用菌和調(diào)。結(jié)果與分析3.1熱水法提取蘑菇多糖的方案 原料：蘑菇。 試劑：0.5%NaOH，95%乙醇，蒸餾水。 設(shè)備和儀器：燒杯假設(shè)干，玻璃棒，溫度計，錐形瓶假設(shè)干，漏斗，水浴鍋，稱量天平，THZ-82A臺式恒溫振蕩器,

12、臺式離心機，紫外線分光光度計。 3.1.1 提取的方法：1、粉碎度對提取率的影響 分別稱取40、60、80、100目的蘑菇粉5g，放入到250mL的錐形瓶中，參加蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取完畢，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別參加5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速參加5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。 3.1.2提取的步驟：2、料液比對提取率的影響稱取80目的蘑菇粉5g六份，放

13、入到250mL的錐形瓶中，分別參加蒸餾水75、100、125、150、175、200ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取兩次，提取完畢，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別參加5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速參加5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。3、提取溫度對提取率的影響 稱取80目的蘑菇粉5g，放入到250mL的錐形瓶中，參加蒸餾水100ml，混合均勻后置于65、75、80、85、90、95、100水浴鍋中，

14、水浴提取2h，提取兩次，提取完畢，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別參加5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速參加5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。 4、提取時間對提取率的影響 稱取80目的蘑菇粉5g五份，放入到250mL的錐形瓶中，參加蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2、3、4、5、6h，提取完畢，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別參加5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速參加5ml濃硫酸，振搖5

15、min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。 5、提取次數(shù)對提取率的影響 稱取80目的蘑菇粉5g四份，放入到250mL的錐形瓶中，參加蒸餾水100ml，混合均勻后置于90水浴鍋中，水浴提取2h，提取1、2、3、4次，提取完畢，冷卻至室溫，將兩次提取液混合后過濾，取2ml濾液分別參加5%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速參加5ml濃硫酸，振搖5min，置沸水浴上加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，即以溶劑蒸餾水為空白作對照，在490nm處用分光光度計測吸光值，計算多糖提

16、取率，得到粉碎度與提取率的關(guān)系。3.2 多糖提取率的計算多糖=總糖-復(fù)原糖 多糖提取率%=多糖量/子實體干重*100%討論4.1正交實驗確定最正確提取工藝4.1.1正交實驗確定微波輔助熱水提法最正確提取工藝 影響微波輔助熱水提取蘑菇多糖提起率的因素主要料液化比、提時間、微波處理時間、提溫度等，以下采用正交法確定微波輔助熱水提取蘑菇多糖的最適條件，結(jié)果見表1。通過以下正交實驗可以得出微波輔助熱水提法最正確提取工藝條件。表1微波輔助熱水提取蘑菇多糖正交實驗結(jié)果如圖表1由極差分析結(jié)果，影響蘑菇多糖提取率因素的主次順序為：DCBA,即提溫度微波處理時間提時間液化比，最優(yōu)水平為A3B2C2D2微波輔助提

17、取蘑菇多糖最正確提取條件為：料液比1：25，提溫度80，提時間3H，在此條件下蘑菇多糖提取得率可達7.70%。4.2結(jié)論通過微波輔助熱水提取法提蘑菇多糖的單因素實驗說明，當(dāng)提的料液比為1:20-1:30，提時間為3h-5h,提溫度為80-85，微波輔助時間為3min-4min，提取次數(shù)為1次時，蘑菇多糖的提取效果較好。在此根底上，對料液比、提時間、微波處理時間、提溫度4個因素在3個水平上進展了實驗。結(jié)果說明，微波輔助提取蘑菇多糖最正確提取條件為：料液比1：25，提溫度80，提時間3H，在此條件下蘑菇多糖提取得率可達7.70%。參考文獻1珺;鐘耀廣;長江;蘑菇多糖的別離純化方法研究進展J;北方園

18、藝;2008年12期.2志國;杜琪珍;盛利燚;制備型高速逆流色譜別離純化蘑菇多糖J;分析化學(xué);2009年03期 .3艷,王兆梅,郭祀遠;生物活性多糖高級構(gòu)造的研究方法進展J;化工;2005年08期.4 賀正芳，食品的酶促褐變及其控制J.食品工業(yè)科技,2010(4):1825 晨霞，果蔬貯運與加工M .中國農(nóng)業(yè), 2007,5.175176.6建民;蘑菇多糖的研究進展J;農(nóng)學(xué)通報;2006年03期 .7衣美艷;秀萍;吳紅棉;胡雪瓊;馬氏珠母貝各組織及其糖胺聚糖中四種重金屬含量分析A;省食品學(xué)會第六次會員大會暨學(xué)術(shù)研討會論文集C;2012年 . 8禹興海;傅正生;潔;光華;短梗霉多糖別離純化和鑒定A;首屆中國中西部地區(qū)色譜學(xué)術(shù)交流會暨儀器展覽會論文集C;2006年 . 9 義勇;樺褐孔菌多糖純化、構(gòu)造及其抗腫瘤機制研究D;江南大學(xué);2010年10 磊;四種真菌多糖抗氧化和抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性的研究D;大學(xué);2010年11 王國佳;紅;蘑菇多糖的研究進展J;解放軍藥學(xué)學(xué)報;2011年05期12 韋丁;健;蘑菇多糖含量測定過程中加樣回收率的比擬J;食品研究與開發(fā);2010年10期13 王國佳;紅;蘑菇多糖中藥注射液含量測定方法的改良J;解放軍藥學(xué)學(xué)報;2012年02期14