免疫學(xué)教學(xué)課件第16章基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)

1、第十六章基于抗原-抗體反應(yīng)的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)第1頁(yè)，共50頁(yè)?？乖c相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱為抗原抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)既可在體內(nèi)作為體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)機(jī)制自然發(fā)生；也可在體外作為免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的出現(xiàn)。第2頁(yè)，共50頁(yè)。第3頁(yè)，共50頁(yè)。在體內(nèi)，可表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬或中和毒素等作用，有時(shí)亦可引起免疫病理?yè)p傷；在體外，依相應(yīng)抗原物理性狀（顆粒狀或可溶性）以及反應(yīng)的條件（電解質(zhì)、補(bǔ)體等）不同，可出現(xiàn)凝集、沉淀、細(xì)胞溶解和補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)。第4頁(yè)，共50頁(yè)。一、抗原-抗體反應(yīng)的一般規(guī)律 抗原-抗體反應(yīng)的特異性； 抗原-抗體反應(yīng)的比例與結(jié)合物的可見性； 抗原-抗體反應(yīng)的可逆性； 抗原-抗體反應(yīng)的

2、階段性；第一節(jié) 抗體-抗原反應(yīng)概論第5頁(yè)，共50頁(yè)?？乖?抗體反應(yīng)的特異性第6頁(yè)，共50頁(yè)。第7頁(yè)，共50頁(yè)。第8頁(yè)，共50頁(yè)?？乖?抗體反應(yīng)的比例與結(jié)合物的可見性；第9頁(yè)，共50頁(yè)。第10頁(yè)，共50頁(yè)。網(wǎng)格學(xué)說(shuō)：大多數(shù)天然抗原是多價(jià)，抗體大多為兩價(jià)，在一定濃度范圍內(nèi)，當(dāng)抗原和抗體分子比例合適時(shí)，可相互連接成為巨大網(wǎng)格狀聚集體，形成肉眼可見的沉淀物。但當(dāng)抗原或抗體過(guò)量時(shí)，由于其結(jié)合價(jià)不能相互飽和，就只能形成較小的沉淀物或可溶性抗原-抗體復(fù)合物。第11頁(yè)，共50頁(yè)。第12頁(yè)，共50頁(yè)。抗原-抗體反應(yīng)的可逆性抗原和抗體的結(jié)合是可逆的。兩者的結(jié)合的穩(wěn)定性取決于分子間包括氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水

3、鍵等多種共價(jià)作用。第13頁(yè)，共50頁(yè)。第14頁(yè)，共50頁(yè)。第15頁(yè)，共50頁(yè)。第16頁(yè)，共50頁(yè)?？乖?抗體反應(yīng)的階段性第17頁(yè)，共50頁(yè)。第18頁(yè)，共50頁(yè)。二、抗原-抗體反應(yīng)的影響因素與制定原則第19頁(yè)，共50頁(yè)。第20頁(yè)，共50頁(yè)。第21頁(yè)，共50頁(yè)。第22頁(yè)，共50頁(yè)。三、抗原-抗體反應(yīng)的應(yīng)用醫(yī)學(xué)領(lǐng)域；農(nóng)業(yè)領(lǐng)域；基礎(chǔ)生命科學(xué)領(lǐng)域；第23頁(yè)，共50頁(yè)。第二節(jié) 抗原-抗體反應(yīng)類型第24頁(yè)，共50頁(yè)。一、凝集反應(yīng)第25頁(yè)，共50頁(yè)。第26頁(yè)，共50頁(yè)。第27頁(yè)，共50頁(yè)。第28頁(yè)，共50頁(yè)。2、間接凝集反應(yīng)第29頁(yè)，共50頁(yè)。第30頁(yè)，共50頁(yè)。第31頁(yè)，共50頁(yè)。3、間接凝集抑制試驗(yàn)可溶性

4、抗原與相應(yīng)的抗體充分結(jié)合后，再加入抗原致敏的免疫微球，此時(shí)因抗體已被可溶性抗原結(jié)合占用，不能再與免疫微球上的抗原結(jié)合而產(chǎn)生凝集現(xiàn)象。第32頁(yè)，共50頁(yè)。第33頁(yè)，共50頁(yè)。第34頁(yè)，共50頁(yè)。4、SPA：金黃色葡萄球菌蛋白A第35頁(yè)，共50頁(yè)。第36頁(yè)，共50頁(yè)。5、第37頁(yè)，共50頁(yè)?？骨虻鞍自囼?yàn)第38頁(yè)，共50頁(yè)。第39頁(yè)，共50頁(yè)。第40頁(yè)，共50頁(yè)。 沉淀性反應(yīng)是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在合適的電解質(zhì)的條件下，發(fā)生特異結(jié)合并形成可見的免疫復(fù)合物沉淀。參與反應(yīng)的抗原稱為沉淀原，抗體稱為沉淀素。 單向免疫擴(kuò)散； 雙向免疫擴(kuò)散； 火箭免疫電泳； 對(duì)流免疫電泳； 免疫電泳；二、沉淀性反應(yīng)第41頁(yè)

5、，共50頁(yè)。1、直接補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)；2、間接補(bǔ)體試驗(yàn)；三、補(bǔ)體參與的反應(yīng)1、病毒中和試驗(yàn)；2、毒素中和試驗(yàn)；四、中和反應(yīng)第42頁(yè)，共50頁(yè)。用熒光素、放射性核素或酶等示蹤物質(zhì)標(biāo)記的抗體（或抗原）進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)，標(biāo)記物與抗體（或抗原）的化學(xué)聯(lián)結(jié)不會(huì)改變抗體（或抗原）的免疫學(xué)特性，同時(shí)標(biāo)記物的特性依然存在，使檢測(cè)靈敏度大大提高，可以對(duì)微量物質(zhì)進(jìn)行定性、定量或定位檢測(cè)。五、免疫標(biāo)記技術(shù)第43頁(yè)，共50頁(yè)。免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合的一種方法。它以酶作為標(biāo)記物，與抗體或抗原聯(lián)結(jié)，相應(yīng)的抗原或抗體作用后，此時(shí)加入酶作用的底物，通過(guò)酶的催化作用，使無(wú)色的底物水解、氧化或還原反應(yīng)，形成有色的可見物質(zhì)，表面酶存在，進(jìn)一步證明了相應(yīng)抗原和抗體的反應(yīng)。（一）、免疫酶技術(shù)第44頁(yè)，共50頁(yè)。第45頁(yè)，共50頁(yè)。第46頁(yè)，共50頁(yè)。第47頁(yè)，共50頁(yè)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色