藥物分析學(xué)課件：第九章 二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析

1、2022/8/41第九章 二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析2022/8/42二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物2022/8/43第一節(jié) 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、常見藥物的結(jié)構(gòu)二氫吡啶類藥物的基本骨架：二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物2022/8/44硝苯地平尼群地平尼莫地平二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物2022/8/45苯磺酸氨氯地平非洛地平二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物2022/8/46二、主要理化性質(zhì)1. 二氫吡啶環(huán)的還原性 氧化還原反應(yīng)鑒別或氧化還原滴定法含量測定2. 硝基的氧化性 重氮化-偶合反應(yīng)鑒別2022/8/473. 二氫吡啶環(huán)氨基質(zhì)子解離性4. 穩(wěn)定性5. 旋光性6. 吸收光譜特性二、主要理化性質(zhì)2022/8/48第二

2、節(jié) 鑒別試驗一、化學(xué)鑒別法（一）與亞鐵鹽反應(yīng) 二氫吡啶類藥物苯環(huán)上硝基具有氧化性，可將氫氧化亞鐵氧化為紅棕色氫氧化鐵沉淀。2022/8/49一、化學(xué)鑒別法（一）與亞鐵鹽反應(yīng)2022/8/410（二）與氫氧化鈉試液反應(yīng)與氫氧化鈉試液反應(yīng)顯橙紅色一、化學(xué)鑒別法2022/8/411（三）沉淀反應(yīng)與汞鹽生成白色沉淀，與碘化鉍鉀生成橙紅色沉淀一、化學(xué)鑒別法2022/8/412（四）重氮化-偶合反應(yīng)BP2010硝苯地平的鑒別： 取本品25mg，加10ml鹽酸-水-乙醇混合溶液（1.53.5 5），溫?zé)?，加入鋅粒0.5g，放置5分鐘，濾過，濾液加亞硝酸鈉溶液（10g/L）5ml，放置2分鐘，再加入氨基磺酸銨

3、溶液（50g/L）2ml，搖勻，加入鹽酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即顯紅色（持續(xù)5分鐘以上）。一、化學(xué)鑒別法2022/8/413二、分光光度法（一）紫外分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的鑒別： 避光操作。取本品的內(nèi)容物約1g，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，取10ml，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，在353nm與303nm的波長處分別測定吸光度，在353nm與303nm的吸光度比值應(yīng)為2.12.3。二、光譜鑒別2022/8/414（二）紅外分光光度法ChP2010尼群地平片的鑒別： 避光操作。取本品（約相當(dāng)于尼群地平100mg），研細，加丙酮10ml，振

4、搖使溶解，濾過，濾液暗處揮干，殘渣經(jīng)減壓干燥，依法測定。本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集600）一致。二、光譜鑒別2022/8/415（一）高效液相色譜法ChP2010尼莫地平片的鑒別： 在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致。三、色譜鑒別2022/8/416（二）薄層色譜法BP2010硝苯地平的鑒別： 取本品加甲醇制成每1ml 中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取硝苯地平對照品適量，加甲醇制成每1ml 約含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠F254薄層板上，以乙酸乙酯-環(huán)己烷（4060）為展開劑

5、，展開，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應(yīng)與對照品溶液的主斑點一致。三、色譜鑒別2022/8/417鑒別下列藥物中，可將氫氧化亞鐵氧化為紅棕色氫氧化鐵沉淀的是（ ）A 鹽酸丁卡因B 阿司匹林C 非洛地平D 尼莫地平D2022/8/418下列藥物的丙酮溶液與氫氧化鈉試液反應(yīng)顯橙紅色的是 （ ）A 苯巴比妥B 鹽酸普魯卡因C 尼群地平D 阿司匹林鑒別C2022/8/4193 下列藥物中，可在酸性條件下被鋅粉還原并用重氮化-偶合反應(yīng)鑒別的是（ ）A 苯甲酸鈉B 硝苯地平C 鹽酸丁卡因D 非洛地平鑒別B苯環(huán)上硝基被還原為芳伯氨基。非洛地平無苯環(huán)上硝基2022/8/

6、4204 配伍：A 還原性B 解離性C 弱堿性D 氧化性E 紫外吸收鑒別1 丙酮溶液與氫氧化鈉反應(yīng)顯橙紅色 ( )2 與碘化鉍鉀生成橙紅色沉淀 ( )3與氯化汞生成白色沉淀 ( )BCC2022/8/4215 配伍：A 重氮化-偶合反應(yīng) B 水解后重氮化-偶合反應(yīng)C 還原后重氮化-偶合反應(yīng) D 氧化后重氮化-偶合反應(yīng)E 有機破壞后重氮化-偶合反應(yīng)鑒別1 鹽酸普魯卡因 ( )2 對乙酰氨基酚 ( )3 硝苯地平 ( )ABC2022/8/422第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)的檢查 二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學(xué)歧化作用，引入雜質(zhì)，因此各國藥典標(biāo)準(zhǔn)中均規(guī)定在避光條件下進行有關(guān)物質(zhì)檢查，大多采用HPLC

7、法。2022/8/423 硝苯地平在光照和氧化劑存在條件下分別生成兩種降解氧化產(chǎn)物：雜質(zhì)I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯雜質(zhì)II：2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯雜質(zhì)I雜質(zhì)II第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)的檢查2022/8/424ChP2010硝苯地平有關(guān)物質(zhì)的檢查： 避光操作。取本品，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(雜質(zhì))對照品與2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(雜質(zhì))對照品，精密稱定，加甲醇溶

8、解并定量稀釋制成每1ml中各約含10g的混合溶液，作為對照品貯備液；分別精密量取供試品溶液與對照品貯備液各適量，用流動相定量稀釋制成每1ml中分別含硝苯地平2g、雜質(zhì)1g與雜質(zhì)1g的混合溶液，作為對照溶液。第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)的檢查2022/8/425 照高效液相色譜法試驗。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(60:40)為流動相；檢測波長為235nm。取硝苯地平對照品、雜質(zhì)對照品與雜質(zhì)對照品各適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1ml中各約含1mg、10g與10g的混合溶液，取20l，注入液相色譜儀，雜質(zhì)峰、雜質(zhì)峰與硝苯地平峰之間的分離度均應(yīng)符合要求。取對照溶液20l，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈

9、敏度，使硝苯地平色譜峰的峰高約為滿量程的50%；第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)的檢查2022/8/426再精密量取供試品溶液與對照溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有與雜質(zhì)峰、雜質(zhì)峰保留時間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計算，均不得過0.1%；其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液中硝苯地平峰面積（0.2%）；雜質(zhì)總量不得過0.5%。第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)的檢查2022/8/427第四節(jié) 含量測定一、鈰量法硝苯地平與硫酸鈰反應(yīng)的摩爾比為12。2022/8/428ChP2010硝苯地平的含量測定： 取本品約0.4g，精密稱定，加無水乙醇50ml，微熱使溶解，加高

10、氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、鄰二氮菲指示液3滴，立即用硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，在水浴中加熱至50左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.32mg的C17H18N2O6。2022/8/429二、紫外-可見分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的含量測定： 避光操作，取本品10粒置小燒杯中，用剪刀剪破嚢殼，加無水乙醇少量，振搖使溶解后，將內(nèi)容物與嚢殼全部轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，用無水乙醇反復(fù)沖洗剪刀及小燒杯，洗液并入錐形瓶中，將錐形瓶密塞，置40水浴中加熱15分鐘，并

11、時時振搖，將內(nèi)容物移入100ml量瓶中，用無水乙醇反復(fù)沖洗嚢殼和錐形瓶，洗液并入量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在353nm的波長處測定吸光度；另取尼群地平對照品適量，精密稱定，用無水乙醇溶解并定量稀釋制成1ml中約含20g的溶液，同法測定，計算，即得。2022/8/430三、高效液相色譜法ChP2010尼莫地平分散片的含量測定： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水（353827）為流動相；檢測波長為235nm。理論板數(shù)按尼莫地平峰計算不低于8000，尼莫地平峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合

12、要求。2022/8/431測定法 避光操作。取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當(dāng)于尼莫地平10mg)，置50ml量瓶中，加流動相適量，超聲處理15分鐘使尼莫地平溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心10分鐘(每分鐘3000轉(zhuǎn))，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取尼莫地平對照品，精密稱定，用流動相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含20g的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。2022/8/432第五節(jié) 體內(nèi)二氫吡啶類藥物的分析 氨氯地平分子結(jié)構(gòu)中含有一個手性碳原子，故具有一對光學(xué)異構(gòu)體R-(+)-

13、氨氯地平與S-(-)-氨氯地平，僅S-(-)-氨氯地平具有血管擴張作用，其中左旋氨氯地平藥效是消旋氨氯地平的2倍，因此需進行血漿中氨氯地平對映體的手性分離與立體選擇性藥動學(xué)研究。2022/8/433樣品處理：血漿樣品1.0ml，與1.0ml用流動相制備的內(nèi)標(biāo)溶液(10 ng/ml)混合后，取1.8ml上載至C18固相萃取柱(萃取柱預(yù)先用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗滌2次，再用5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml沖洗平衡)，分別用5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml和水-甲醇(65:35)1.0ml洗滌，再用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗脫，洗脫液在60下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)至干，殘渣物加250l流

14、動相溶解，吸取100l注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進行分析。 人血漿中氨氯地平對映體的固相萃取LC-MS/MS法測定：2022/8/434色譜與質(zhì)譜條件 色譜柱為Chiral-AGP柱(150mm4.0mm，5m)，流動相為10 mmol/L醋酸銨緩沖液(pH4.5)-正丙醇(99:1)，流速0.9 ml/min，柱溫30。APCI離子源，溫度350，輔助氣(N2)流速2 L/min，氣簾氣(N2)壓力410kPa流速1.2 L/min，電暈放電電流2A，正離子選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)M+H+離子，N2碰撞能量15eV，用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z409238(氨氯地平)和m/z260116(S-(-)-普萘洛爾)。2022/8/435SRM氨氯地平的LC-MS/MS離子流圖A. 空白血漿 B. 空白血漿添加0.5ng/ml的氨氯地平消旋體2022/8/436總結(jié)二氫吡啶類鈣通道阻滯藥 1 母核-