分析化學(xué)吸光光度法的基本原理和儀器分析

1、分析化學(xué)吸光光度法的基本原理和儀器分析化學(xué)分析：常量組分(1%), Er 0.1%0.2% 依據(jù)化學(xué)反應(yīng), 使用玻璃儀器 化學(xué)分析與儀器分析方法比較儀器分析：微量組分(105為高靈敏度; 104*選擇性好*顯色劑在測定波長處無明顯吸收。 對照性好, max60 nm .*反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定。*顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好。448.4.2 顯色條件的確定c(R)c(R)c(R)1. 顯色劑用量（c(M)、pH一定）Mo(SCN)32+ 淺紅Mo(SCN)5 橙紅Mo(SCN)6- 淺紅Fe(SCN)n3-n452. 顯色反應(yīng)酸度（c(M)、 c(R)一定）pH1pHpH2pH46鄰

2、二氮菲亞鐵反應(yīng)完全度與pH的關(guān)系 Fe2+3RHHA檸檬酸c(R)R=10-4molL-13103FeR347pH38為適宜的酸度范圍483. 顯色溫度及顯色時(shí)間另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、表面活性劑等T1()T2()t(min)A498.4.3 干擾及消除Co2, Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2 (藍(lán))NaFSCNCo2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN測Co2(含F(xiàn)e3+) : (掩蔽法)1.化學(xué)法 50Co2+, Zn2+,Ni2+, Fe2+ CoR,ZnR NiR,FeRCoR, Zn2+ ,Ni2+ , Fe2+ 鈷試劑RH+測Co2 :(生成

3、絡(luò)合物性質(zhì)不同)如不能通過控制酸度和掩蔽的辦法消除干擾，則需采取分離法。測Fe3:(控制pH)Fe3+, Cu2+FeSS （紫紅）Cu2+pH 2.5SS512. 物理法 選擇適當(dāng)?shù)臏y定波長515655415500釷-偶氮砷III 鈷-亞硝基紅鹽 AA絡(luò)合物絡(luò)合物試劑試劑52 1. 僅絡(luò)合物有吸收，溶劑作參比。 如 phenFe2+ 標(biāo)準(zhǔn)曲線2.待測液也有吸收，被測液作參比。 如 測汽水中的 Fe3. 顯色劑或其他試劑也有吸收，空白溶液作參比 例:鄰二氮菲光度法測Li2CO3中的 Fe， 參比溶液為不含Li2CO3樣品的所有試劑。4. 干擾組分與顯色劑有反應(yīng),又無法掩蔽消除時(shí)： 1）掩蔽被測

4、組分，再加入顯色劑，作參比.2）加入等量干擾組分到空白溶液中,作參比. - 選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤?38.5 吸光光度法的應(yīng)用1. 單一組分測定1) 金屬離子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-鈷試劑2) 磷的測定: DNA中含P9.2%, RNA中含P9.5%, 可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O磷鉬黃(小)磷鉬(V)藍(lán)(大)Sn2+543) 蛋白質(zhì)測定溴甲酚綠、考馬司亮藍(lán)等4) 氨基酸測定茚三酮(紫色化合物)5) 水質(zhì)檢測: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+-6) 藥

5、物含量測定比吸光系數(shù)定量；荷移光譜法測定.7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。552. 多組分的測定 xl1, eyl1, exl2, eyl2由x,y標(biāo)液 在1, 2處分別測得在1處測組分x, 在2處測組分yb) 在1處測組分x; 在2處測總吸收,扣除x吸收,可求yc) x,y組分不能直接測定A1=exl1bcx+ eyl1bcy(在1處測得A1) A2 =exl2bcx+ eyl2bcy(在2處測得A2)56 3. 光度滴定NaOH滴定 對硝基酚 pKa=7.15 間硝基酚 pKa=8.39 pKa

6、 =1.24V1V2V(NaOH)/mL對硝基酚間硝基酚酸形均無色.堿形均黃色57典型的光度滴定曲線依據(jù)滴定過程中溶液吸光度變化來確定終點(diǎn)的滴定分析方法。Vsp滴定劑吸收Vsp被滴物吸收Vsp滴定劑與待測物均吸收Vsp產(chǎn)物吸收584. 絡(luò)合物組成的測定(1)摩爾比法: 固定cM ,改變cR 1:13:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3,0 59(2)等摩爾連續(xù)變化法:M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:260表觀形成常數(shù)的測定 (設(shè)M、R均無吸收)0.5cM/cM:R=1:1A0Ac(M)=c(R)=cMmRn型 ?615.一元弱酸離解常數(shù)的測定 p330HL HLK

7、aH+L/HL高酸度下，幾乎全部以HL存在，可測得AHLHLc(HL)；低酸度下，幾乎全部以L存在，可測得AL Lc(HL).代入整理：HLL或配制一系列c相同,pH不同的溶液,測A.62MO吸收曲線Aa(HL)Ab(L)123456Ab654321Aa350400450500550600/nmA曲線pH11.10, 1.3822.6533.0643.4853.9865.53,6.80由每份溶液的一對pH、A，可求得一個(gè)Ka, 取平均值即可.63MO離解常數(shù)的測定作圖法AHL3.32(pKa)123456ApH=pKapHAL0.60.40.20-0.2-0.4-0.63.04.0pH3.34646. 雙波長分光光度法消除干擾(不要求)在2， A2 = Ax2+Ay2在1， A1= Ax1+Ay1A= A2 - A1 = Ax2+Ay2 (Ax1+Ay1) = Ax2 Ax1 = AxAy2 Ay1Ax =(x2 x1)bcx消除了y的干擾X被測Y干擾211Ay1AX1Ay2AX2A/nm65雙波長分光光度法消除渾濁背景干擾 1 2AA 1 -A