從環(huán)境中分離酵母菌-試驗(yàn)設(shè)計(jì)案

1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案從環(huán)境中分離酵母菌班級(jí)：10級(jí)生科（2）班組員：劉楠楠：2潘婷：2李煒昊：2馬森：2實(shí)驗(yàn)：從環(huán)境中分離由醉母菌實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案一、采樣采樣的理由：酵母菌與人類(lèi)的關(guān)系密切酵母菌是一類(lèi)單細(xì)胞真菌的俗稱(chēng)，分類(lèi)學(xué)上分屬于子囊菌綱半知菌類(lèi)特征：.個(gè)體一般以單細(xì)胞狀態(tài)存在；.多數(shù)營(yíng)出芽生殖，有的裂殖；.能發(fā)酵糖類(lèi)產(chǎn)能；.細(xì)胞壁常含有甘露聚糖；.喜在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中生長(zhǎng)。酵母菌分布：主要生長(zhǎng)在偏酸的含糖環(huán)境中，在水果、蜜餞的表 面和果園土壤中最為常見(jiàn)。種類(lèi)：據(jù)1982年的資料，已知的酵母有56屬，500多種。酵 母 菌與人類(lèi)的關(guān)系極其密切。千百年來(lái).人類(lèi)幾乎天天離不開(kāi)酵母菌， 例如酒

2、類(lèi)的生產(chǎn)，面包的制作，乙醇和甘油發(fā)酵，石油及油品的脫蠟， 飼用、藥用等的生產(chǎn)。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)和構(gòu)造期跑壁細(xì)尼摩液泡粒佇藏粒電子顯微鏡下的釀酒酵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)示意圖細(xì)胞直徑比細(xì)菌粗10倍左右，如 Saccharomycescerevisiae細(xì)胞 的寬度為2.5-10 m,長(zhǎng)度為4.521 pm。因此在光學(xué)顯微鏡下可以 模糊地看到它們細(xì)胞內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)分化。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球 狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。細(xì)胞壁：酵母細(xì)胞壁呈三明治”結(jié)構(gòu)卜層：甘露聚糖（約占30%,以e糖昔鍵聯(lián)結(jié)（并非所有酵母菌都 有） 內(nèi)層：葡聚糖（約占30-40%,由D-葡萄糖以（3 -糖昔鍵聯(lián)結(jié)）中間層：蛋白質(zhì)

3、（含6-8%,多為酶類(lèi)）細(xì)胞膜： 酵母菌的細(xì)胞膜與原核生物的基本相同。 但有的酵母菌如釀酒酵母中含有固醇類(lèi)（苗醇）、VitD的前體-麥角固醇，這在原核 生物是罕見(jiàn)的。細(xì)胞核：核膜：核孔4070nm ,透性比任何生物膜都大。?染色體：由DNA和組蛋白牢固結(jié)合而成，呈線(xiàn)狀，數(shù)目因種而 異。?核仁：核內(nèi)有一或幾個(gè)區(qū)域rRNA含量很高，這一區(qū)域?yàn)楹巳剩?是合成核糖體的場(chǎng)所。?中心體：在核膜外，由蛋白質(zhì)亞基組成的細(xì)絲 狀結(jié)構(gòu)，在細(xì)胞繁殖分裂中起作用細(xì)胞核的功能：攜帶遺傳信息，控制細(xì)胞的增殖和代謝酵母菌的繁殖方式酵母菌的菌落大而厚，圓形，光滑濕潤(rùn)，粘性，顏色單調(diào)。常見(jiàn)白色、土黃色、紅 色。采樣的方法：原理

4、：大多數(shù)酵母菌為腐生，其?；钭钸m pH為4.5 6,常見(jiàn) 于含糖分較高的環(huán)境中、例如果園十、菜地十及果皮等植物表面。故 可以從甘蔗、成熟葡萄或蘋(píng)果等果皮上取樣。利用酵母菌喜歡酸性環(huán) 境的特點(diǎn)，常用酸性液體培養(yǎng)基獲得酵母菌的培養(yǎng)液 （這樣做的好處 是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)）實(shí)驗(yàn)材料和用具1、蘋(píng)果果皮、0.1%美藍(lán)染液、1ml的無(wú)菌吸管、無(wú)菌培養(yǎng)皿等。2、豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基原料：黃豆芽（100克）、葡萄糖（50克）、蒸儲(chǔ)水（1000ml）, 自然PH配制方法： 陳新鮮豆芽100克，放入燒杯中，加水 1000ml, 煮沸約30min,用紗布過(guò)濾，用水補(bǔ)足原量，再加入葡萄糖 50克， 煮沸融化

5、，121c滅菌20min.實(shí)驗(yàn)步驟1、接種：取一小塊果皮，不需沖洗，直接接入到豆芽汁葡萄糖培 養(yǎng)液試管中，置28 30 C ,培養(yǎng)24小時(shí),可見(jiàn)培養(yǎng)液變混濁。2、培養(yǎng)，用無(wú)菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液 0.1ml,注入另一管乳 酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液中，置28 30 C再培養(yǎng)24小時(shí)或稍長(zhǎng)（過(guò)長(zhǎng) 貝U霉菌長(zhǎng)出）。3、觀察：用無(wú)菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的 0.1%美藍(lán) 染色液中，混勻后加蓋玻片制成水浸片，先用低倍鏡后換高倍鏡觀察 酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況。4、活酯母菌可使美藍(lán)還原、從而使菌體不著色、用此方法可判斷 酵母菌的死活。芽殖過(guò)程：?母細(xì)胞形成小突起（AD）?核裂（E-G）?原生質(zhì)分配

6、（H-I）?新膜形成（J-K）?形成新細(xì)胞壁（L）二、分離原理：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板。用劃線(xiàn)法分離酵母菌培養(yǎng)液，從而得到單個(gè)菌落。挑取單個(gè)菌落反復(fù)再次劃線(xiàn)分離純化，最終可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)： 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：原料：馬鈴薯（200克）、葡萄糖（20克）、瓊脂（15-20克）、蒸儲(chǔ)水（1000ml）,自然PH配制方法：將馬鈴薯去皮后、切片、加水煮爛（煮沸2030分鐘、能被玻璃棒戳破即可），用4層紗布過(guò)濾，再加入糖和瓊脂，加熱融化后 再補(bǔ)足水分至1000ml,并在121攝氏度條件下高壓滅菌 20分種。 方法:平板劃線(xiàn)法圖用4平板則線(xiàn)操作雷圖Vflg創(chuàng)線(xiàn)分離圖三、鑒定原理

7、：大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚, 菌落表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊 緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別 為黑色。啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落各種酵母菌的菌落。方法:制玻片并在顯微鏡下觀察其形態(tài)四、實(shí)驗(yàn)的過(guò)程記錄及其結(jié)果、結(jié)果分析（期2012/5/272012/5/282012/5/302012/5/312012/6/1記錄配制豆芽 汁葡萄糖 培養(yǎng)液， 并接種， 用的材料 是成熟的 蘋(píng)果皮。在28 C的環(huán)境卜培養(yǎng)了 24小 時(shí)，觀察現(xiàn) 象，培養(yǎng)液 變渾濁。配制豆芽 汁培養(yǎng)基， 進(jìn)一步進(jìn) 行培養(yǎng)。.取菌液制 片并滴加少 許

8、的美藍(lán)染 液，用顯微鏡 觀察，醉母菌 大部分為活 的，且處于母 細(xì)胞形成小 突起階段。.配制馬鈴 署葡萄糖瓊 脂培養(yǎng)基，用 劃線(xiàn)法分離 醉母菌.觀察培養(yǎng)基上 的菌落，菌落表 面光滑、濕潤(rùn)， 容易挑起，苗落 的質(zhì)地很均勻， 為乳白色。初步 斷定分離純化由 來(lái)的是醉母菌。.鏡檢，在顯微 鏡卜觀察大部分 醉母菌處于核裂 階段，少數(shù)處于 新膜形成階段。可斷定為醉母菌五、結(jié)果及結(jié)果分析：在本實(shí)驗(yàn)中，我們的最根本目的是從環(huán) 境中分離由醉母菌，依據(jù)醉母菌的特性，我們選擇從成熟的 蘋(píng)果皮中提取,依據(jù)醉母菌的形態(tài)、菌落特征我們進(jìn)行了鑒 定，最終在經(jīng)過(guò)六天的實(shí)驗(yàn)后從環(huán)境中提取由了解母菌，但 在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中所提取由來(lái)的醉母菌的量不多，分析原因大 概有如下兩點(diǎn)：1.蘋(píng)果皮在接種前洗過(guò)，把一些菌洗掉了。2.接種時(shí)，接種的量不足，導(dǎo)致后續(xù)的培養(yǎng)由來(lái)的量也不足。六、實(shí)驗(yàn)感想：此次實(shí)驗(yàn)是由四人的一個(gè)小組合作完成，在