沉淀法與吸附法

1、關(guān)于沉淀法和吸附法第一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(一)鹽析法(二)有機(jī)溶劑沉淀法 (三)等電點(diǎn)沉淀法(四)生成鹽復(fù)合物沉淀法一、沉淀法第二張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月一、 沉 淀 法 沉淀是通過改變條件或加入某種試劑，使溶液中的溶質(zhì)由液相轉(zhuǎn)變?yōu)楣滔辔龀龅倪^程。成本低設(shè)備簡(jiǎn)單收率高濃縮倍數(shù)高操作簡(jiǎn)單優(yōu)點(diǎn)：第三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月鹽析法:多用于分離純化各種蛋白質(zhì)和酶。有機(jī)溶劑沉淀法：多用于生物小分子、多糖及核酸等 產(chǎn)品的分離純化，也有用于蛋白質(zhì)的沉淀。等電點(diǎn)沉淀法：用于氨基酸、蛋白質(zhì)及其他兩性物質(zhì) 的沉淀。生成鹽復(fù)合物沉淀法：用于多種化合物，特別

2、是小分 子物質(zhì)的沉淀。第四張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(一)鹽析法 高濃度的中性鹽能破壞蛋白質(zhì)、酶等的膠體性質(zhì)，中和微粒上的電荷，促使蛋白質(zhì)等發(fā)生沉淀或絮凝現(xiàn)象。 logS- Ks S離子強(qiáng)度為時(shí)的蛋白質(zhì)的溶解度； Ks鹽析常數(shù)，與溫度和pH無關(guān)； 值是溶質(zhì)的特征常數(shù)，對(duì)于蛋白質(zhì)而言，其大小主要取決于不同蛋白質(zhì)的性質(zhì)，它也與溶液的溫度和pH值有關(guān)，但與鹽的種類無關(guān);為便于計(jì)算，用鹽的摩爾數(shù)m代替離子強(qiáng)度I，則 logS-Ks m1、鹽析原理第五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月鹽析機(jī)理示意圖 第六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2

3、022年6月第八張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月鹽離子與蛋白質(zhì)分子爭(zhēng)奪水分子，降低了用于溶解蛋白質(zhì)的有效水量，減弱了蛋白質(zhì)的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度下降；鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質(zhì)溶解度下降；鹽離子引起原本在蛋白質(zhì)分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。第九張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強(qiáng)度的關(guān)系圖pH6.6，溫度25，logS0=17gL-1第十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月不同蛋白質(zhì)的溶解度曲線第十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)的鹽析分布曲線第十二張，PPT共四十四頁，

4、創(chuàng)作于2022年6月溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b) 第十三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)起始濃度的影響高濃度蛋白質(zhì)溶液可以減少鹽的用量，但蛋白質(zhì)濃度太高，會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的共沉作用。2、影響鹽析的主要因素第十四張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月無機(jī)鹽種類的影響不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強(qiáng)度的關(guān)系（25）()NaCl; ()KCl; ()MgSO4; ()NH4SO4; ()Na2SO4; ()K2SO4; ()檸檬酸三鈉離子強(qiáng)度越大，蛋白質(zhì)的溶解度越低。不同蛋白質(zhì)鹽析所需離子強(qiáng)度不同?？捎貌煌柠}濃度將各種蛋白質(zhì)分別沉淀析出。第十五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)

5、作于2022年6月溫度的影響升溫，可增加許多無機(jī)鹽和小分子有機(jī)物的溶解度。但在高鹽濃度中，蛋白質(zhì)等生物大分子物質(zhì)的溶解度隨溫度的升高反而減小。第十六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月pH對(duì)的影響 鹽析pH的選擇要以不降低產(chǎn)物的活性為原則。由于蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)最易沉淀，可選擇等電點(diǎn)的pH作為鹽析的pH第十七張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月二次鹽析第十八張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(二)等電點(diǎn)沉淀法 是利用兩性電解質(zhì)在電中性時(shí)溶解度最低的原理，進(jìn)行物質(zhì)分離純化的方法。 中性鹽的濃度增加時(shí)，相應(yīng)于最低溶解度的pH值向偏酸

6、方向移動(dòng)；同時(shí)最低溶解度會(huì)有所增大。 等電點(diǎn)沉淀法應(yīng)在低離子強(qiáng)度下操作。 許多蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)都在偏酸性的范圍內(nèi)。第二十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(二)等電點(diǎn)沉淀法 是利用兩性電解質(zhì)在電中性時(shí)溶解度最低的原理進(jìn)行物質(zhì)分離純化的方法。 中性鹽的濃度增加時(shí)，相應(yīng)于最低溶解度的pH值向偏酸方向移動(dòng)；同時(shí)最低溶解度會(huì)有所增大。 等電點(diǎn)沉淀法應(yīng)在低離子強(qiáng)度下操作。 許多蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)都在偏酸性的范圍內(nèi)。第二十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月許多無機(jī)酸的價(jià)格低廉，并能為食品標(biāo)準(zhǔn)允許。缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：酸化時(shí)，容易引起蛋白質(zhì)失活，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)低pH比較敏感。第二十二張，PPT共四十四頁，

7、創(chuàng)作于2022年6月等電點(diǎn)沉淀實(shí)例從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI8.9，可先于pH 3.0左右進(jìn)行等電點(diǎn)沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(zhì)(pI=3.0)。工業(yè)生產(chǎn)胰島素(pI5.3)時(shí)，先調(diào)pH至8.0除去堿性蛋白質(zhì)，再調(diào)pH至3.0除去酸性蛋白質(zhì)(同時(shí)加入一定濃度的有機(jī)溶劑以提高沉淀效果)。第二十三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月等電點(diǎn)沉淀實(shí)例堿性磷酸酯酶的pI沉淀提取：發(fā)酵液調(diào)pH 4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH 9.0的0.1 mol/L Tris-HCl緩沖液重新溶解，加入2040%飽和度的硫酸銨分級(jí)，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液

8、再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。 第二十四張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(三)有機(jī)溶劑沉淀法 許多水溶性有機(jī)溶劑如丙酮、乙醇、甲醇等能使溶于水的小分子生物物質(zhì)以及核酸、多糖、蛋白質(zhì)等生物大分子發(fā)生沉淀作用。其主要作用是降低水溶液的介電常數(shù)。1、有機(jī)溶劑沉淀的原理第二十五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月有機(jī)溶劑沉淀原理圖第二十六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月分辨能力比鹽析法高一種溶質(zhì)只在一個(gè)比較窄的有機(jī)溶劑范圍內(nèi)沉淀沉淀不需脫鹽有機(jī)溶劑密度低，與沉淀物密度差大， 容易進(jìn)行固液分離有機(jī)溶劑容易蒸發(fā)，不會(huì)在成品中殘留， 因此適用于食品、藥品的制備。優(yōu)點(diǎn)：第二十七張

9、，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月容易引起蛋白質(zhì)變性失活有機(jī)溶劑易燃、易爆，對(duì)安全要求較高需冷卻、降溫、低溫操作。缺點(diǎn)：對(duì)同一種溶劑，蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量越大，沉淀所需有機(jī)溶劑的量越少。第二十八張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2、影響有機(jī)溶劑沉淀的因素有機(jī)溶劑的種類：選擇的溶劑必須能與水互溶，但與產(chǎn)物如蛋白質(zhì)等不發(fā)生反應(yīng)。溫度：降低溫度可以增加收率。同時(shí)許多生物分子如蛋白質(zhì)、核酸等對(duì)溫度特別敏感，溫度稍有升高，便發(fā)生變性。pH：選擇溶解度最低時(shí)的pH，有助于提高沉淀效果。因此在接近等電點(diǎn)處，以引起沉淀所需有機(jī)溶劑的量較少。合適的pH也可大大提高分離的分辨能力。第二十九張，PPT共四

10、十四頁，創(chuàng)作于2022年6月樣品濃度和分子質(zhì)量：低濃度樣品需用有機(jī)溶劑的量較大，但共沉作用小，有利于提高分離的效果；但低濃度樣品損失較大，回收率低，具有生理活性的樣品容易產(chǎn)生稀釋變性。金屬離子和離子強(qiáng)度：Mn2+、Fe2+、Co2+、Zn2+等陽離子能與蛋白質(zhì)中的羧基、氨基和含有氮雜環(huán)的化合物結(jié)合，形成難溶復(fù)合物，有利于沉淀。但離子強(qiáng)度過大，不利分離。第三十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3、有機(jī)溶劑沉淀實(shí)例第三十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）生成鹽復(fù)合物沉淀檸檬酸鈣鹽沉淀1、提取過程的化學(xué)反應(yīng)： 2C6H8O7H2O+3CaCO3 Ca3(C6H5O7)24H2

11、O+3CO2+H2O Ca3(C6H5O7)24H2O+3H2SO4+ 4H2O 2C6H8O7H2O+3CaSO4 2H2O第三十二張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1、工藝流程：第三十三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3、中和與酸解中和：濾液中除含檸檬酸外，還含可溶性的殘 糖以及蛋白質(zhì)、金屬離子等雜質(zhì)。利用 檸檬酸鈣難溶于水的特點(diǎn)，與雜質(zhì)分離 的過程。酸解：中和所得鈣鹽經(jīng)過濾、洗滌，與硫酸反 應(yīng)生成檸檬酸和硫酸鈣沉淀，過濾，濾 液含較純的檸檬酸。第三十四張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月4、生產(chǎn)設(shè)備及操作調(diào)漿：調(diào)漿罐，3050%濃度；中和：中和罐，濾液、鈣漿泵入，

12、攪拌， 70-90 ，控制 終點(diǎn)；過濾：過濾槽、帶式過濾機(jī)， 90熱水逆流洗滌；酸解：酸解罐，攪拌，稀酸調(diào)漿，加熱，加硫酸， 控制終點(diǎn)；過濾：過濾槽、帶式過濾機(jī)， 90熱水逆流洗滌， 至pH大于4。第三十五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(一)吸附過程的基礎(chǔ)理論(二)吸附類型(三)影響吸附過程的因素二、吸附法第三十六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 選擇性吸附法用于：分離精制各種產(chǎn)品、空氣的凈化、除菌、脫色、除熱源、去組胺等雜質(zhì)。吸附作用：物質(zhì)從流體相(氣體或液體)濃縮到固體表面 的過程。吸附劑：在表面上能夠發(fā)生吸附作用的固體。吸附物：被吸附的物質(zhì)。(一)吸附過程的基礎(chǔ)理論

13、不同固體物質(zhì)的表面自由能不同，所以對(duì)其他物質(zhì)的吸附能力不同，表面自由能越高，吸附能力越強(qiáng)。第三十七張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 吸附作用力也是范德華力。它是一組分子引力的總稱，包括三種力，即定向力、誘導(dǎo)力和色散力。定向力：是極性分子之間產(chǎn)生的作用力，是極性分子間 的靜電引力，分子的極性越大，力也越大。誘導(dǎo)力：指極性分子和非極性分子之間的吸引力，極性 分子產(chǎn)生的電場(chǎng)作用會(huì)誘導(dǎo)非極性分子極化， 兩者之間相互吸引而發(fā)生吸附作用。這種力與 溫度無關(guān)。第三十八張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月色散力：是非極性分子之間的引力，當(dāng)分子外圍電子運(yùn)動(dòng) 及原子核在零點(diǎn)附近震動(dòng)，正負(fù)電荷中心出

14、現(xiàn)瞬 時(shí)相對(duì)位移時(shí)，產(chǎn)生快速變化的瞬時(shí)偶極矩，能 使外圍非極性分子極化，反過來又影響瞬時(shí)偶極 矩的變化而產(chǎn)生這種色散力。與溫度無關(guān)。此外，還有氫鍵力，這是介于庫侖引力和范德華力之間的定向力，比誘導(dǎo)力和色散力都大。第三十九張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(二)吸附類型1、物理吸附： 吸附劑和吸附物通過分子間的引力產(chǎn)生的吸附。特點(diǎn)：吸附作用不僅局限于活性中心，而是整個(gè)自由界面；分子被吸附后，一般動(dòng)能降低，所以吸附是放熱反應(yīng)；物理吸附的吸附熱較小，吸附物分子的狀態(tài)變化不大，所需活化能很小，多數(shù)在較低的溫度下進(jìn)行；物理吸附是可逆的，吸附作用一般沒有選擇性。第四十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2、化學(xué)吸附吸附劑與吸附物之間由于電子轉(zhuǎn)移發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的吸附。特點(diǎn)：需要一定的活化能；具有顯著的選擇性，一種吸附劑只對(duì)特定的物質(zhì)有吸附作用；吸附速度較慢，升高溫度速度增加；吸附后也較穩(wěn)定，不易解吸，且解吸具有選擇性；吸附熱較大。物理吸附與化學(xué)吸附雖有區(qū)別，但有時(shí)很難嚴(yán)格劃分，也可以在同一體系中向時(shí)發(fā)生。第四十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（三） 影響吸附的因素溶液中，固體吸附劑的吸附要考慮三種