抗體聯(lián)合應(yīng)用與病理診斷課件

1、免疫組化應(yīng)用的意義鑒別診斷預(yù)后判斷指導(dǎo)治療查找病原體分子分型抗體為何要聯(lián)合使用腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展是多分子信號通路發(fā)生異常改變的結(jié)果，單一的生物標(biāo)志常難以鑒別診斷。沒有100%針對某一抗原（某一疾?。┑奶禺惪贵w。一種抗體常在多種疾病中表達(dá)。聯(lián)合應(yīng)用可以達(dá)到1+12的效果。 一. 乳腺癌ER/PR/HER2每個病人需要常規(guī)檢測判斷預(yù)后、決定治療方案、生物靶向治療的依據(jù)ER、PR判讀標(biāo)準(zhǔn)陽性信號定位于細(xì)胞核判定方法和標(biāo)準(zhǔn)有差異。建議采用：1. 注明陽性（需給出比例）、陰性，如ER（+，90%），PR（-）。2. 陽性臨界值選擇：只要存在明確的瘤細(xì)胞核染色即可，如ER（+，8%）；當(dāng)陽性細(xì)胞特少時，可也

2、可表述為ER（+，1%）。3. 不必考慮染色強(qiáng)度。（步宏教授推薦）ER（+，90%）PR（+，70%）ER（）ER（+，2%）ER、PR表達(dá)的意義：ER、PR陰性的癌細(xì)胞增殖不受內(nèi)分泌激素的調(diào)控，腫瘤分化程度較低，預(yù)后較差，內(nèi)分泌治療無效。ER、PR陽性，特別是高表達(dá)者，腫瘤組織分化程度較高，惡性度低，預(yù)后較好，內(nèi)分泌治療往往有效。PR、ER陽性患者輔助治療的選擇要視其術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險級別而定，而復(fù)發(fā)風(fēng)險與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Her-2表達(dá)等有密切關(guān)系，一般低危險和中危險首選內(nèi)分泌治療，高風(fēng)險則以化療為主。HER2基因擴(kuò)增（過表達(dá)）的臨床意義 表皮生長因子受體-2(HER-2) 是位于染色體17q21，

3、編碼185kDa具有跨膜酪氨酸激酶活性的生長因子受體，參與細(xì)胞生長、分化的調(diào)節(jié)。 乳 腺 癌預(yù)后因子 + 預(yù)測因子HER2：預(yù)后指標(biāo)HER2陽性患者生存期較低 平均生存期 HER2陽性 3年 HER2陰性 67年HER2：乳腺癌危險因素的定義 G1 T2 ER/PR+淋巴結(jié)-HER2 -LVI 無淋巴結(jié)-，HER2 +， ER/PR-或LVI浸潤，淋巴結(jié)1-3HER2 -， ER/PR+ 年齡35 G2-3 T2淋巴結(jié)1-3和HER2 +， ER/PR-或淋巴結(jié)4低 中 中 高 低高RISKRISKHER2：預(yù)測指標(biāo)HER2狀態(tài)預(yù)示腫瘤對治療的反應(yīng)內(nèi)分泌治療 HER2陽性患者相對耐藥CMF方案

4、 HER2陽性患者相對耐藥蒽環(huán)類 對大劑量蒽環(huán)類相對敏感紫杉類藥物 相對敏感HER2狀態(tài)提示病人預(yù)后HER2陽性者腫瘤進(jìn)展快，惡性度高。HER2陽性者赫賽汀治療有效，預(yù)后反而好。Her-2的檢測方法免疫組化（IHC）方法簡單、價廉顯色原位雜交（CISH） 熒光原位雜交（FISH）金標(biāo)準(zhǔn)條件苛刻、昂貴HER2免疫組化判讀標(biāo)準(zhǔn) 評分：01+（），2+（），3+（）浸潤性腫瘤細(xì)胞無著色為陰性(0)瘤細(xì)胞呈弱且不完整的胞膜著色或10瘤細(xì)胞呈較弱的胞膜染色為 (1+)10瘤細(xì)胞有較弱但完整的胞膜著色或30瘤細(xì)胞呈強(qiáng)且完整的胞膜著色為 (2+)30%腫瘤細(xì)胞呈較強(qiáng)的完整細(xì)胞膜染色為(3+)HER2 (0)

5、HER2 (1+)HER2 (3+)HER2 (2+)圖1圖2圖3圖41+2+2+3+二. 甲狀腺癌CK19/GAL-3/HBME-1甲狀腺病變鑒別難點(diǎn)甲狀腺濾泡性腺瘤（FA）和濾泡性癌（FC）微小浸潤良性乳頭狀增生（主要是結(jié)節(jié)性甲狀腺腫）和乳頭狀癌（PC）濾泡性腺瘤和濾泡型乳頭狀癌CK19、GAL3、HBME-1、ERK、RET、P16、CyclinD1、p27、CITED-1、FNI和HNWCK在甲狀腺良、惡性腫瘤之間的表達(dá)均有差異， 但前三種對診斷最有幫助。Expression of the markers in differentiated thyroid carcinoma (DTC

6、) and benign thyroid nodule 引自Park報道Papillary carcinoma showing diffuse expression of galectin-3 (A), HBME-1 (B), Papillary carcinoma showing diffuse expression of CK19 (C), and cyclin D1 (D).Benign papillary hyperplasia in nodular hyperplasia showing focal expression of galectin-3 (A) and no expres

7、sion of HBME-1 (B).Follicular carcinoma showing focal expression of galectin-3 (A) and diffuse expression of HBME-1 (B) in area of capsular invasion. Follicular adenoma showing no expression of galectin-3 (C) and focal expression of HBME-1 (D).在對三者聯(lián)合應(yīng)用的研究中觀察到。96.5(8184)的乳頭狀癌和63.1(2438)的濾泡性癌至少出現(xiàn)三者中的一

8、個標(biāo)志陽性；三者同時陽性對診斷癌具有54(2037)的敏感性和100(053)的特異性；而三者同時陰性對診斷甲狀良性病變具有38(2053)的敏感性和100(3737)的特異性。兩者以上的抗體聯(lián)合應(yīng)用共表達(dá)對鑒別良惡性的作用明顯增強(qiáng)。 Sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, and diagnostic accuracy of the immunohistochemical markers in the diagnosis of differentiated thyroid

9、carcinoma3項(xiàng)抗體同時標(biāo)記，可起到取長補(bǔ)短的作用，提高特異性和準(zhǔn)確率。由于免疫組化結(jié)果受諸多因素的影響，在實(shí)際應(yīng)用中一定要以組織學(xué)為主診斷，免疫組化能提高我們對組織學(xué)診斷的信心和把握，它不能作為獨(dú)立診斷的依據(jù)。 引自Park報道提示CK19在淋巴結(jié)異位甲狀腺腫為陰性，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性PC為陽性，對二者有較好的鑒別作用。GaL-3對FC的敏感性稍低（60%），但在包膜下明顯陽性，故對FC的微小浸潤有特殊的標(biāo)記作用，GaL-3甲狀腺包塊穿刺細(xì)胞學(xué)可出現(xiàn)假陽性應(yīng)引起注意。三. 子宮頸上皮內(nèi)瘤變P16/Ki-67 最常使用的抗體。宮頸活檢的重要任務(wù)識別宮頸上皮內(nèi)瘤變和HPV感染 HPV感染與P

10、16 高危型的HPV感染 癌基因蛋白E7產(chǎn)生 E7結(jié) 合在RB基因 RB基因功能喪失 P16蛋白過表達(dá)。P16：HPV表達(dá)和活動指標(biāo)，宮頸上皮內(nèi)瘤變輔助標(biāo)記中度、高度危險性HPV病變 強(qiáng)陽性低危性HPV病變 表層細(xì)胞片狀陽性CIN23 陽性反應(yīng)性病變（非HPV感染） 陰性P16INK4p16CIN1CIN2/3P16P16P16P16Ki-67抗原是除G0期外所有細(xì)胞周期上都有表達(dá)的一種非組蛋白性蛋白質(zhì)Ki-67在大多數(shù)低級別SIL和宮頸濕疣的鱗狀上皮上2/3細(xì)胞中有表達(dá)。正常宮頸組織，慢性宮頸炎，及鱗狀上皮化生僅在基底層有少量上皮表達(dá)。注意鱗狀上皮化生偶爾也在上皮上層表達(dá)Ki-67，但陽性細(xì)

11、胞數(shù)量較少。HPV感染 上皮細(xì)胞程度增殖 Ki-67染色增強(qiáng)在宮頸病變中的作用HPV感染輔助工具 上皮上層細(xì)胞可陽性CIN分級參考 CIN3細(xì)胞陽性40%CIN1CIN2CIN3HPV感染的直接證據(jù)是原位雜交等分子病理技術(shù)檢測到病毒的DNA P16和Ki-67間接反應(yīng)HPV感染P16不能區(qū)別LSIL和HSILP16和Ki-67可用來推斷是否HPV感染和CIN以及CIN的級別提示P63、CK17P63 增生細(xì)胞強(qiáng)陽性CK17 正常細(xì)胞陰性，增生成熟細(xì)胞陽性四. 胃腸道間質(zhì)瘤CD117/ CD34/SMA/ S-100/ Desmin/ Ki-67中國胃腸道間質(zhì)瘤病理專家組推薦 1. CD117

12、（95%病例特征性表達(dá)） 2. CD34 （70%病例表達(dá)） 3. SMA （40%局灶性表達(dá)） 4. S-100 （5%） 5. Desmin （2%） 6. Ki-67 用于標(biāo)記瘤細(xì)胞增殖指數(shù)。GIST CD117 CD34五. 轉(zhuǎn)移性腺癌來源判斷CK7/CK20/villin原發(fā)灶不明的轉(zhuǎn)移性腫瘤約占5一15%。確定腫瘤原發(fā)灶有助于確定治療方案和病人預(yù)后的評估。單一的抗體很難從眾多的腫瘤中找到其來源?？贵w聯(lián)合使用可以縮小原發(fā)灶的搜尋范圍。CK7、 CK20及villin用于判斷轉(zhuǎn)移性腺癌的來源8種模式實(shí)際應(yīng)用第一步先檢測這三種抗體參照表格來推斷腫瘤可能存在于哪些范圍中，哪些腫瘤可以排除。根據(jù)腫瘤檢出率來考慮其發(fā)生的可能性。 例如：腫瘤出現(xiàn)了CK7+CK20+villin+的模式，要考慮胃腺癌、膽管癌、卵巢黏液癌等，可排出肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、卵巢漿液性癌。第二步根據(jù)具體情況，采用其他相對特異的抗體 例如：胃腸道用CDX2，肺癌和甲狀腺癌用TTF-1等，為最終確定腫瘤的器官來源提供有價值的信息。結(jié)腸癌卵巢轉(zhuǎn)移CK20CEA轉(zhuǎn)移性粘液腺癌CK20CK20CEAvillin原發(fā)性卵巢癌CK20CK7六. 不易明確組織來源的腫瘤 CK-Pan(AE1/AE3)/Vime