抗體聯(lián)合應(yīng)用與病理診斷課件

1、免疫組化應(yīng)用的意義鑒別診斷預(yù)后判斷指導(dǎo)治療查找病原體分子分型抗體為何要聯(lián)合使用腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展是多分子信號(hào)通路發(fā)生異常改變的結(jié)果，單一的生物標(biāo)志常難以鑒別診斷。沒(méi)有100%針對(duì)某一抗原（某一疾?。┑奶禺惪贵w。一種抗體常在多種疾病中表達(dá)。聯(lián)合應(yīng)用可以達(dá)到1+12的效果。 一. 乳腺癌ER/PR/HER2每個(gè)病人需要常規(guī)檢測(cè)判斷預(yù)后、決定治療方案、生物靶向治療的依據(jù)ER、PR判讀標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞核判定方法和標(biāo)準(zhǔn)有差異。建議采用：1. 注明陽(yáng)性（需給出比例）、陰性，如ER（+，90%），PR（-）。2. 陽(yáng)性臨界值選擇：只要存在明確的瘤細(xì)胞核染色即可，如ER（+，8%）；當(dāng)陽(yáng)性細(xì)胞特少時(shí)，可也

2、可表述為ER（+，1%）。3. 不必考慮染色強(qiáng)度。（步宏教授推薦）ER（+，90%）PR（+，70%）ER（）ER（+，2%）ER、PR表達(dá)的意義：ER、PR陰性的癌細(xì)胞增殖不受內(nèi)分泌激素的調(diào)控，腫瘤分化程度較低，預(yù)后較差，內(nèi)分泌治療無(wú)效。ER、PR陽(yáng)性，特別是高表達(dá)者，腫瘤組織分化程度較高，惡性度低，預(yù)后較好，內(nèi)分泌治療往往有效。PR、ER陽(yáng)性患者輔助治療的選擇要視其術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別而定，而復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Her-2表達(dá)等有密切關(guān)系，一般低危險(xiǎn)和中危險(xiǎn)首選內(nèi)分泌治療，高風(fēng)險(xiǎn)則以化療為主。HER2基因擴(kuò)增（過(guò)表達(dá)）的臨床意義 表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER-2) 是位于染色體17q21，

3、編碼185kDa具有跨膜酪氨酸激酶活性的生長(zhǎng)因子受體，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的調(diào)節(jié)。 乳 腺 癌預(yù)后因子 + 預(yù)測(cè)因子HER2：預(yù)后指標(biāo)HER2陽(yáng)性患者生存期較低 平均生存期 HER2陽(yáng)性 3年 HER2陰性 67年HER2：乳腺癌危險(xiǎn)因素的定義 G1 T2 ER/PR+淋巴結(jié)-HER2 -LVI 無(wú)淋巴結(jié)-，HER2 +， ER/PR-或LVI浸潤(rùn)，淋巴結(jié)1-3HER2 -， ER/PR+ 年齡35 G2-3 T2淋巴結(jié)1-3和HER2 +， ER/PR-或淋巴結(jié)4低 中 中 高 低高RISKRISKHER2：預(yù)測(cè)指標(biāo)HER2狀態(tài)預(yù)示腫瘤對(duì)治療的反應(yīng)內(nèi)分泌治療 HER2陽(yáng)性患者相對(duì)耐藥CMF方案

4、 HER2陽(yáng)性患者相對(duì)耐藥蒽環(huán)類 對(duì)大劑量蒽環(huán)類相對(duì)敏感紫杉類藥物 相對(duì)敏感HER2狀態(tài)提示病人預(yù)后HER2陽(yáng)性者腫瘤進(jìn)展快，惡性度高。HER2陽(yáng)性者赫賽汀治療有效，預(yù)后反而好。Her-2的檢測(cè)方法免疫組化（IHC）方法簡(jiǎn)單、價(jià)廉顯色原位雜交（CISH） 熒光原位雜交（FISH）金標(biāo)準(zhǔn)條件苛刻、昂貴HER2免疫組化判讀標(biāo)準(zhǔn) 評(píng)分：01+（），2+（），3+（）浸潤(rùn)性腫瘤細(xì)胞無(wú)著色為陰性(0)瘤細(xì)胞呈弱且不完整的胞膜著色或10瘤細(xì)胞呈較弱的胞膜染色為 (1+)10瘤細(xì)胞有較弱但完整的胞膜著色或30瘤細(xì)胞呈強(qiáng)且完整的胞膜著色為 (2+)30%腫瘤細(xì)胞呈較強(qiáng)的完整細(xì)胞膜染色為(3+)HER2 (0)

5、HER2 (1+)HER2 (3+)HER2 (2+)圖1圖2圖3圖41+2+2+3+二. 甲狀腺癌CK19/GAL-3/HBME-1甲狀腺病變鑒別難點(diǎn)甲狀腺濾泡性腺瘤（FA）和濾泡性癌（FC）微小浸潤(rùn)良性乳頭狀增生（主要是結(jié)節(jié)性甲狀腺腫）和乳頭狀癌（PC）濾泡性腺瘤和濾泡型乳頭狀癌CK19、GAL3、HBME-1、ERK、RET、P16、CyclinD1、p27、CITED-1、FNI和HNWCK在甲狀腺良、惡性腫瘤之間的表達(dá)均有差異， 但前三種對(duì)診斷最有幫助。Expression of the markers in differentiated thyroid carcinoma (DTC

6、) and benign thyroid nodule 引自Park報(bào)道Papillary carcinoma showing diffuse expression of galectin-3 (A), HBME-1 (B), Papillary carcinoma showing diffuse expression of CK19 (C), and cyclin D1 (D).Benign papillary hyperplasia in nodular hyperplasia showing focal expression of galectin-3 (A) and no expres

7、sion of HBME-1 (B).Follicular carcinoma showing focal expression of galectin-3 (A) and diffuse expression of HBME-1 (B) in area of capsular invasion. Follicular adenoma showing no expression of galectin-3 (C) and focal expression of HBME-1 (D).在對(duì)三者聯(lián)合應(yīng)用的研究中觀察到。96.5(8184)的乳頭狀癌和63.1(2438)的濾泡性癌至少出現(xiàn)三者中的一

8、個(gè)標(biāo)志陽(yáng)性；三者同時(shí)陽(yáng)性對(duì)診斷癌具有54(2037)的敏感性和100(053)的特異性；而三者同時(shí)陰性對(duì)診斷甲狀良性病變具有38(2053)的敏感性和100(3737)的特異性。兩者以上的抗體聯(lián)合應(yīng)用共表達(dá)對(duì)鑒別良惡性的作用明顯增強(qiáng)。 Sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, and diagnostic accuracy of the immunohistochemical markers in the diagnosis of differentiated thyroid

9、carcinoma3項(xiàng)抗體同時(shí)標(biāo)記，可起到取長(zhǎng)補(bǔ)短的作用，提高特異性和準(zhǔn)確率。由于免疫組化結(jié)果受諸多因素的影響，在實(shí)際應(yīng)用中一定要以組織學(xué)為主診斷，免疫組化能提高我們對(duì)組織學(xué)診斷的信心和把握，它不能作為獨(dú)立診斷的依據(jù)。 引自Park報(bào)道提示CK19在淋巴結(jié)異位甲狀腺腫為陰性，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性PC為陽(yáng)性，對(duì)二者有較好的鑒別作用。GaL-3對(duì)FC的敏感性稍低（60%），但在包膜下明顯陽(yáng)性，故對(duì)FC的微小浸潤(rùn)有特殊的標(biāo)記作用，GaL-3甲狀腺包塊穿刺細(xì)胞學(xué)可出現(xiàn)假陽(yáng)性應(yīng)引起注意。三. 子宮頸上皮內(nèi)瘤變P16/Ki-67 最常使用的抗體。宮頸活檢的重要任務(wù)識(shí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變和HPV感染 HPV感染與P

10、16 高危型的HPV感染 癌基因蛋白E7產(chǎn)生 E7結(jié) 合在RB基因 RB基因功能喪失 P16蛋白過(guò)表達(dá)。P16：HPV表達(dá)和活動(dòng)指標(biāo)，宮頸上皮內(nèi)瘤變輔助標(biāo)記中度、高度危險(xiǎn)性HPV病變 強(qiáng)陽(yáng)性低危性HPV病變 表層細(xì)胞片狀陽(yáng)性CIN23 陽(yáng)性反應(yīng)性病變（非HPV感染） 陰性P16INK4p16CIN1CIN2/3P16P16P16P16Ki-67抗原是除G0期外所有細(xì)胞周期上都有表達(dá)的一種非組蛋白性蛋白質(zhì)Ki-67在大多數(shù)低級(jí)別SIL和宮頸濕疣的鱗狀上皮上2/3細(xì)胞中有表達(dá)。正常宮頸組織，慢性宮頸炎，及鱗狀上皮化生僅在基底層有少量上皮表達(dá)。注意鱗狀上皮化生偶爾也在上皮上層表達(dá)Ki-67，但陽(yáng)性細(xì)

11、胞數(shù)量較少。HPV感染 上皮細(xì)胞程度增殖 Ki-67染色增強(qiáng)在宮頸病變中的作用HPV感染輔助工具 上皮上層細(xì)胞可陽(yáng)性CIN分級(jí)參考 CIN3細(xì)胞陽(yáng)性40%CIN1CIN2CIN3HPV感染的直接證據(jù)是原位雜交等分子病理技術(shù)檢測(cè)到病毒的DNA P16和Ki-67間接反應(yīng)HPV感染P16不能區(qū)別LSIL和HSILP16和Ki-67可用來(lái)推斷是否HPV感染和CIN以及CIN的級(jí)別提示P63、CK17P63 增生細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性CK17 正常細(xì)胞陰性，增生成熟細(xì)胞陽(yáng)性四. 胃腸道間質(zhì)瘤CD117/ CD34/SMA/ S-100/ Desmin/ Ki-67中國(guó)胃腸道間質(zhì)瘤病理專家組推薦 1. CD117

12、（95%病例特征性表達(dá)） 2. CD34 （70%病例表達(dá)） 3. SMA （40%局灶性表達(dá)） 4. S-100 （5%） 5. Desmin （2%） 6. Ki-67 用于標(biāo)記瘤細(xì)胞增殖指數(shù)。GIST CD117 CD34五. 轉(zhuǎn)移性腺癌來(lái)源判斷CK7/CK20/villin原發(fā)灶不明的轉(zhuǎn)移性腫瘤約占5一15%。確定腫瘤原發(fā)灶有助于確定治療方案和病人預(yù)后的評(píng)估。單一的抗體很難從眾多的腫瘤中找到其來(lái)源?？贵w聯(lián)合使用可以縮小原發(fā)灶的搜尋范圍。CK7、 CK20及villin用于判斷轉(zhuǎn)移性腺癌的來(lái)源8種模式實(shí)際應(yīng)用第一步先檢測(cè)這三種抗體參照表格來(lái)推斷腫瘤可能存在于哪些范圍中，哪些腫瘤可以排除。根據(jù)腫瘤檢出率來(lái)考慮其發(fā)生的可能性。 例如：腫瘤出現(xiàn)了CK7+CK20+villin+的模式，要考慮胃腺癌、膽管癌、卵巢黏液癌等，可排出肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、卵巢漿液性癌。第二步根據(jù)具體情況，采用其他相對(duì)特異的抗體 例如：胃腸道用CDX2，肺癌和甲狀腺癌用TTF-1等，為最終確定腫瘤的器官來(lái)源提供有價(jià)值的信息。結(jié)腸癌卵巢轉(zhuǎn)移CK20CEA轉(zhuǎn)移性粘液腺癌CK20CK20CEAvillin原發(fā)性卵巢癌CK20CK7六. 不易明確組織來(lái)源的腫瘤 CK-Pan(AE1/AE3)/Vime