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1、5.3選修三熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測(cè)樣本中某種DNA含量。其原理是:在PCR反應(yīng)體系中每加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針,當(dāng)Taq酶催化子鏈延伸至探針處,會(huì)水解探針,使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)接受到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一次,就有一個(gè)熒光分子生成。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是引物與探針均具特異性,與模板結(jié)合時(shí)遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則Taq酶可以催化子鏈沿著3-5方向延伸,需dNTP作為原料反應(yīng)最終的熒光強(qiáng)度與起始狀態(tài)模板DNA含量呈正相關(guān)若用cDNA作模板,上述技術(shù)也可檢測(cè)某基因的轉(zhuǎn)錄水平下列實(shí)驗(yàn)中相關(guān)操作的敘述正確的是觀察口腔上皮細(xì)胞臨時(shí)裝片時(shí),需滴加蒸餾水以維持細(xì)胞正常形態(tài)制備植物根尖有絲分裂裝片

2、的步驟為:解離-染色-清水漂洗-制片植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中需使用無(wú)菌水對(duì)消毒后的外植體進(jìn)行多次漂洗用胰蛋白酶處理后的動(dòng)物細(xì)胞需在生理鹽水中進(jìn)行傳代培養(yǎng)小鼠Rictor基因的正常表達(dá)與精子的發(fā)生密切相關(guān),敲除該基因的小鼠會(huì)出現(xiàn)無(wú)精癥。研究人員利用流式細(xì)胞儀對(duì)正常鼠和敲除鼠睪丸生精小管中的細(xì)胞進(jìn)行了DNA含量測(cè)定,結(jié)果如下圖(精原細(xì)胞DNA含量為2C)。下列說(shuō)法正確的是DNA含量為2C和1C的細(xì)胞分別對(duì)應(yīng)精原細(xì)胞和精子與正常鼠相比,敲除鼠的初級(jí)精母細(xì)胞數(shù)量顯著下降DNA含量由2C到4C的變化過(guò)程中會(huì)發(fā)生基因重組據(jù)圖推測(cè)敲除鼠精子形成過(guò)程阻滯在減數(shù)第二次分裂期間(18分)水稻的雄性不育植株是野生型水稻的

3、隱性突變體(正?;騇突變?yōu)閙)雄性不育植株不能產(chǎn)生可育花粉,但能產(chǎn)生正常雌配子。1)水稻的花為兩性花,自花授粉并結(jié)種子。在雜交育種時(shí),雄性不育植株的優(yōu)點(diǎn)是無(wú)需進(jìn)行,大大減輕了雜交操作的工作量。(2)我國(guó)科研人員將緊密連鎖不發(fā)生交換的三個(gè)基因M、P和R(P是與花粉代謝有關(guān)的基因,R為紅色熒光蛋白基因)與Ti質(zhì)粒連接,構(gòu),通過(guò)法轉(zhuǎn)入雄性不育水稻植株細(xì)胞中,獲得轉(zhuǎn)基因植株,如下圖所示。雄性不育植株(基因型mm)轉(zhuǎn)入M、P和R基因A轉(zhuǎn)基因植株廠無(wú)熒光植株(占50%)0f紅色熒光植株(占50%)(3)向雄性不育植株轉(zhuǎn)入M基因的目的是讓轉(zhuǎn)基因植株。轉(zhuǎn)基因植株自交后代中,雄性不育植株為熒光植株,由無(wú)熒光植

4、株和紅色熒光植株的性狀分離比為分析,P基因的功能是。4)雄性不育植株不能通過(guò)自交將雄性不育的特性傳遞給它的子代,而育種工作者構(gòu)建出的轉(zhuǎn)基因植株的特點(diǎn)是(5)以轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的雄性不育植株作為母本,以其他水稻品種為父本進(jìn)行雜交,獲得雜交稻。轉(zhuǎn)基因植株中的M、P和R基因不會(huì)隨著這種雜交稻的花粉擴(kuò)散,這是由于轉(zhuǎn)基因植,因此保證了雄性不育植株和雜交稻不含M、P和R基因。(除注明外,每空2分,共18分)(1)去雄(2)重組DNA農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化(3)雄配子可育無(wú)1:1使帶有P基因的花粉敗育(4)自交后既產(chǎn)生雄性不育植株,用于育種,也可產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植株用于保持該品系(5)緊密連鎖的M、P和R基因不會(huì)發(fā)生交換(

5、即M、R基因不會(huì)出現(xiàn)在沒(méi)有P基因的花粉中)(1分);而且含有P基因的花粉是失活的(1分)(16分)浮萍是簡(jiǎn)單的單子葉水生漂浮植物,被廣泛應(yīng)用于除草劑的篩選、水環(huán)境污染的修復(fù);浮萍的淀粉和蛋白含量高而被開發(fā)為生物質(zhì)能和優(yōu)質(zhì)蛋白生產(chǎn)的優(yōu)勢(shì)原料。本研究擬通過(guò)在浮萍中過(guò)表達(dá)大豆液泡膜抗鹽基因來(lái)增強(qiáng)浮萍的抗鹽性,以期獲得能夠應(yīng)用于鹽堿水域生長(zhǎng),并凈化污水的浮萍株系。(1)在浮萍的生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中,除自身分泌的激素調(diào)節(jié)外,還可以通過(guò)添加,以提高淀粉和蛋白質(zhì)的含量。(2)通過(guò)分析農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)GUS基因的效率,篩選能進(jìn)行高效的轉(zhuǎn)化的菌種。GUS組織化學(xué)染色是將外植體浸沒(méi)于GUS染液中染色。GUS瞬時(shí)表達(dá)率=(有相應(yīng)

6、級(jí)別GUS基因瞬時(shí)表達(dá)的外植體數(shù)/外植體總數(shù))X100%。使用不同農(nóng)桿菌對(duì)抗性浮萍愈傷組織的GUS瞬時(shí)表達(dá)率檢測(cè)結(jié)果如下圖,通過(guò)檢測(cè)結(jié)果顯示,因此浮萍遺傳轉(zhuǎn)化確定選用農(nóng)桿菌EHA105。EHAL05GV3101C58C1農(nóng)桿菌菌種(3)本實(shí)驗(yàn)使用添加不同濃度乙酰丁香酮的菌液侵染浮萍,據(jù)下圖實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨,侵染效率。乙酰丁香酮濃度為100pmol/L時(shí),浮萍的侵染效率比乙酰丁香酮濃度為200pmol/L時(shí)高出了%。0.4050100150200乙欣丁香朗濃度(pM)4)在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中,防止農(nóng)桿菌過(guò)度生長(zhǎng)是轉(zhuǎn)基因成敗的重要環(huán)節(jié)。植物材料和農(nóng)桿菌共培養(yǎng)結(jié)束后,轉(zhuǎn)化組織需要脫菌培養(yǎng),需要

7、用抑菌類抗生素抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng),以防止農(nóng)桿菌過(guò)度生長(zhǎng)對(duì)轉(zhuǎn)化組織產(chǎn)生毒害作用。因此選擇合適的抑菌抗生素和濃度很關(guān)鍵oOD600指的是某種溶液在600nm波長(zhǎng)處的吸光值。600吸光值正比于溶液中的吸光物質(zhì)的濃度,通常用于細(xì)菌細(xì)胞密度(OD600)測(cè)量。由下圖可知,對(duì)農(nóng)桿600菌EHA105都有很好的抑制效果;其最佳濃度都選用300mg/L的原因是。噥度(mg/)(5)浮萍已被成功用于植物生物反應(yīng)器方面的開發(fā)和生產(chǎn)。植物生物反應(yīng)器是指利用植物或整株植株,大量生產(chǎn)具有重要功能的蛋白質(zhì),如抗體、疫苗或次生代謝產(chǎn)物等。與動(dòng)物細(xì)胞和微生物發(fā)酵相比,具有明顯的優(yōu)勢(shì),如植物細(xì)胞具有,能夠脫分化和再分化。(16分)(1)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(2分);(2)農(nóng)桿菌EHA105的侵染效率要高于GV3101和C58C1(2分);(3)乙酰丁香酮濃度的升高(

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