細(xì)菌超廣譜內(nèi)酰胺酶和耐藥性

1、關(guān)于細(xì)菌超廣譜內(nèi)酰胺酶與耐藥性第一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌超廣譜內(nèi)酰胺酶與耐藥性1、什么是內(nèi)酰胺類抗生素？2、什么是內(nèi)酰胺酶？3、什么是超廣譜內(nèi)酰胺酶？4、它們與細(xì)菌耐藥有什么關(guān)系？第二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月一、內(nèi)酰胺類抗生素青霉素發(fā)現(xiàn)者、英國科學(xué)家弗萊明（1928）（一）概念 -內(nèi)酰胺類抗生素（-lactams）指化學(xué)結(jié)構(gòu)中具有-內(nèi)酰胺環(huán)的一大類抗生素。第三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月(二) 內(nèi)酰胺類

2、抗生素抑制細(xì)菌的機(jī)理N-乙酰葡萄糖胺 雙糖十肽 轉(zhuǎn)肽酶 N-乙酰胞壁酸五肽 聚合物 （PBPs） 粘肽（構(gòu)成細(xì)胞壁）內(nèi)酰胺類抗生素（）胞漿內(nèi)細(xì)胞膜細(xì)胞膜外第七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 細(xì)胞壁合成受阻，細(xì)胞壁缺損，外環(huán)境水分滲入到菌體，菌體膨脹裂解而死。第九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二、內(nèi)酰胺酶（一）概念 -內(nèi)酰胺酶（-lactamase）是細(xì)菌產(chǎn)生的可水解-內(nèi)酰胺類抗生素的酶。 絕大多數(shù)常見的-內(nèi)酰胺酶有一個依賴絲氨酸發(fā)揮作用的機(jī)制。通常它們的活性位點(diǎn)具有一個狹窄的縱形

3、溝狀結(jié)構(gòu)，在溝的底部形成了一個空腔（氧陰離子袋），這種疏松的構(gòu)造容易彎曲，便于結(jié)合底物。第十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）、-內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌耐藥的機(jī)理絲氨酸的結(jié)構(gòu)式第十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 -內(nèi)酰胺環(huán)上的羰基碳在結(jié)合內(nèi)酰胺酶活性部位的絲氨酸時發(fā)生了不可逆的反應(yīng)，結(jié)果使其成為開環(huán)物。第十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）-內(nèi)酰胺酶分類方法一、Bush-M-J分類法（功能分類法） 根據(jù)-內(nèi)酰胺酶的功能相似性（底物和抑制物的輪廓）分為1 ，2 ，3 ，4 四組，其中2組和3組又分為很多亞組。二、Ambler分類法（分子分類法） 根據(jù)酶的氨基

4、酸序列的保守性和相似性將-內(nèi)酰胺酶分為A，B，C，D四組。第十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月克拉維酸第十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 三、超廣譜- 內(nèi)酰胺酶 （一）概念 超廣譜- 內(nèi)酰胺酶(extended spectrum beta - lactamases , ESBLs) 是由質(zhì)粒介導(dǎo)的能賦予細(xì)菌對多種- 內(nèi)酰胺類抗生素和單酰胺環(huán)類抗生素耐藥并可被 -內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制的一類 -內(nèi)酰胺酶. 第十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月(二)超廣譜- 內(nèi)酰胺酶特點(diǎn)（1）主要是有質(zhì)粒介導(dǎo) ESBLs 基因由質(zhì)粒介導(dǎo), 可通過接合、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等形式在細(xì)菌間擴(kuò)

5、散。第十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（2）產(chǎn)超廣譜- 內(nèi)酰胺酶主要是革蘭氏陰性菌 如：大腸埃希菌屬、肺炎克雷伯菌、奇異變形桿菌（3）能被- 內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制 如：CA（克拉維酸）、甲氧西林第十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）TEM型 ESBLs TEM 型 ESBLs 由 TEM- 1 衍化而來。在 TEM 家族中 TEM- 3 是第一個顯示 ESBLs 特點(diǎn)的 TEM 型 - 內(nèi)酰胺酶。TEM 型 ESBLs 的形成是因?yàn)?38位甘氨酸突變?yōu)榻z氨酸所形成的。這種突變提高了對頭孢噻肟的水解能力。 2005 年發(fā)現(xiàn)的 TEM- 94發(fā)生了104,238 氨基

6、酸位點(diǎn)的改變, 藥敏實(shí)驗(yàn)證實(shí)其對頭孢泊肟和頭孢噻肟耐藥。第十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）超廣譜內(nèi)酰胺酶類型 目前發(fā)現(xiàn)的超廣譜 - 內(nèi) 酰 胺 酶 種類已超過 200 多種, 其類型可以分為 TEM 型、SHV 型、OXA 型、CTX- M 型、其它型等 5 類。其中 TEM和 SHV 型酶是臨床上較常見的超廣譜 - 內(nèi)酰胺酶。第二十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（2 ）SHV 型 ESBLs SHV 型 ESBLs 是由 SHV- 1 衍化而來。SHV 家族中第一個 SHV 型 ESBLs 是 SHV- 2。SHV- 2 發(fā)生了 Gly- 238- Ser 位

7、點(diǎn)的突變, 這增加了對氧亞氨基類抗生素的親和力和水解能力。 對比其它的 SHV 型 ESBLs 氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn), 氨基酸的突變主要集中在 179, 238, 240, 205 位點(diǎn)。 第二十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （三）ESBLs的檢測方法1、標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法（1）表型初篩試驗(yàn) 按標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法操作，當(dāng)下述抗菌藥物的抑菌環(huán)直徑頭孢泊肟(10g)17mm 或頭孢他啶(30g)22mm 或氨曲南(30g)27mm 或頭孢噻肟(30g)27mm或頭孢曲松(30g)25mm時，提示為可疑產(chǎn)ESBLs菌株。第二十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（2） 表型確證試驗(yàn) 使

8、用頭孢他啶(30g)和頭孢他啶/克拉維酸(30/10g)及頭孢噻肟(30g)和頭孢噻肟/克拉維酸(30/10g) 兩對藥敏紙片，當(dāng)兩個藥物中有任何一個在加克拉維酸后抑菌環(huán)直徑與不加克拉維酸的抑菌環(huán)相比增大值5mm，可確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌株。第二十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月頭孢他啶克拉維酸 頭孢噻肟頭孢他啶頭孢噻肟克拉維酸第二十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2 三相水解試驗(yàn)區(qū)分菌株為產(chǎn)ESBLs或產(chǎn)頭孢菌素酶（AmpC酶）ESBLs和AmpC酶同時產(chǎn)生的情況。第二十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月號槽：酶粗提物；號槽：酶+CA；號槽：酶+氯唑西林（CL

9、O）；號槽：酶+CA+CLO單產(chǎn) ESBLs 菌株第二十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月號槽：酶粗提物；號槽：酶+CA；號槽：酶+氯唑西林（CLO）；號槽：酶+CA+CLO聯(lián)合產(chǎn) ESBLs 和 AmpC 菌株第二十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月3、E-test 法 E-test，為AB BIODISK公司開發(fā)的測試ESBLs的試劑條。應(yīng)用表型確證試驗(yàn)的原理，將頭孢他啶（或頭孢噻肟）和復(fù)方制劑頭孢他啶/克拉維酸（或頭孢噻肟/克拉維酸）分別置于試條兩端，將試條貼于接種了待測細(xì)菌的平板上，刻度面朝上，35培養(yǎng)18-24小時后，讀取試條兩端的MIC值。當(dāng)頭孢他啶與頭孢他啶/

10、克拉維酸（或頭孢噻肟與頭孢噻肟/克拉維酸）的比值8時，即可判定為產(chǎn)ESBLs，否則為陰性。第二十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月4、分子生物學(xué)檢測聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) 參照 GenBank 已發(fā)表的 TEM、SHV、CTX-M 和 OXA 各亞型的基因序列，分別設(shè)計(jì)特異性引物第三十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月5、總結(jié)ESBLs的檢測方法表型初篩試驗(yàn)初步判斷表型確證試驗(yàn)最終確認(rèn)三相水解試驗(yàn)確認(rèn)菌株是否只產(chǎn)ESBLsE-test 法分子生物學(xué)檢測第三十二張，PPT共三十

11、九頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）ESBLs 的防治(1)開發(fā)能夠相對或絕對能夠抵抗內(nèi)酰胺酶水解的新型抗菌藥物。(2)應(yīng)用-內(nèi)酰胺酶抑制劑(3)規(guī)范抗生素的使用第三十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）-內(nèi)酰胺酶抑制劑 -內(nèi)酰胺酶抑制劑是一種-內(nèi)酰胺類藥物，可與-內(nèi)酰胺酶發(fā)生牢固的結(jié)合而使酶失活，和其他抗生素聯(lián)用可增強(qiáng)抗菌活性，減少其用量。第三十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）-內(nèi)酰胺酶抑制劑分類按作用分為三類：（1）可逆性競爭性抑制劑：鄰氯西林、雙氯西林等（2）不可逆競爭性抑制劑：克拉維酸、舒巴坦等（3）非競爭性抑制劑：甲氧西林等第三十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 -內(nèi)酰胺酶-內(nèi)酰胺類抗生素-內(nèi)酰胺酶克拉維酸不可逆競爭性抑制藥物分解，細(xì)菌存活酶失活，藥物起作用第三十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月-內(nèi)酰胺酶鄰氯西林 + 鄰氯西林可逆性競爭性抑制 第三十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月(三)合理使用抗生素有報(bào)道顯示抗生素尤其是第