實(shí)驗(yàn)一游離棉酚的測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)一 棉籽餅粕中游離棉酚含量的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握國(guó)標(biāo)法測(cè)定飼料中游離棉酚含量的原理、方法及結(jié)果的表示。2二、游離棉酚的測(cè)定方法概述一般用在70%丙酮水溶液或在3-氨基-1-丙醇存在下，用異丙醇和正己烷的混合溶劑提取游離棉酚，用比色法、高效液相色譜法測(cè)定。比色法：有苯胺法、三氯化銻法、甲氧基苯胺法、間苯三酚法、紫外分光光度法等。苯胺比色法準(zhǔn)確度高、精密度好，也是國(guó)標(biāo)方法。 HPLC法準(zhǔn)確度高，干擾少。HPLC法所測(cè)得的結(jié)果往往低于比色法。 3三、方法原理 在3-氨基-1-丙醇存在下，用異丙醇與正己醇的混合溶劑提取游離棉酚。苯胺與棉酚結(jié)合為苯胺棉酚，在最大吸收波長(zhǎng)（440nm）處進(jìn)行比色測(cè)定

2、。 該方法適用于棉籽粉、棉籽餅粕和配合飼料中游離棉酚含量的測(cè)定。4四、儀器與器皿樣品粉碎機(jī)及分樣篩分析天平電動(dòng)振蕩器恒溫水浴鍋分光光度計(jì)容量瓶、具塞錐形瓶、玻璃漏斗、移液管、量筒、玻璃珠5五、試劑（1）異丙醇；（2）正己烷；（3）冰乙酸；（4）3-氨基-1-丙醇；（5）苯胺；（6）異丙醇、正己烷混合溶劑：6：4（V/V）； （7）溶劑A：取500ml異丙醇、正己烷混合溶劑，2ml 3-氨基-1-丙醇，8ml冰乙酸和50ml水，放入1000ml容量瓶中。再用異丙醇、正己烷混合溶劑定容至刻度。6六、操作方法（1）游離棉酚的提取：稱取1-2g棉籽餅粕樣品于250ml具塞錐形瓶中，加入20粒玻璃珠。準(zhǔn)

3、確加入50ml溶劑A。塞緊瓶塞。于振蕩器上劇烈振蕩1小時(shí)（每分鐘120次左右）。用干燥的定量濾紙過濾。過濾時(shí)在漏斗上加蓋一表玻璃皿。棄去最初幾滴濾液。收集濾液于100ml具塞錐形瓶中。（2）以下操作見下表 78（3）測(cè)定吸光度值：在440nm波長(zhǎng)處以a0為參比溶液測(cè)定空白液b0的吸光度；以a為參比液測(cè)定樣品測(cè)定液b的吸光度。從以b的吸光度值減去b0的吸光度值，得到校正吸光度A。9七、結(jié)果的計(jì)算 游離棉酚（mg/kg）= A5025106 KmVL1000 式中：A校正吸光度； K質(zhì)量吸收系數(shù)，游離棉酚為62.5cm-1g-1l; m試樣質(zhì)量，g； V測(cè)定用濾液的體積，ml； L吸收池長(zhǎng)度，cm； 50提取樣品的提取液體積，ml；10結(jié)果表示與重復(fù)性每個(gè)試樣做兩個(gè)平行，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。結(jié)果表示到20mg/kg。：重復(fù)性： FG500 mg/kg時(shí)，相對(duì)偏差不超過15%； FG在500