鐵皮石斛組織培養(yǎng)

1、鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究進(jìn)展組織培養(yǎng)摘要：近年來，對(duì)鐵皮石斛的需求日趨增加，而野生資源難以滿 足市場(chǎng)需求，組織培養(yǎng)技術(shù)使大規(guī)模人工栽培成為可能。從種子萌發(fā)、 原球莖分化、生根與壯苗、原球莖增殖等方面闡述了近年來關(guān)于鐵皮 石斛組織培養(yǎng)技術(shù)的研究概況，并展望了發(fā)展前景。鐵皮石斛為蘭科石斛屬植物，是傳統(tǒng)名貴中藥材。神農(nóng)本草 經(jīng)列為上品，具有益胃生津、滋陰清熱、止咳潤(rùn)肺的功效?，F(xiàn)代 藥理研究表明，石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)人體免疫力和擴(kuò)張 血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，種子需與真菌共生才能萌發(fā)， 加上長(zhǎng)期采挖，使得野生鐵皮石斛資源日漸枯竭，成為瀕危植物，被 列為國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)的野生藥材品種。為了滿足

2、市場(chǎng)的需求，國(guó)內(nèi)許多 科研人員進(jìn)行了鐵皮石斛組織培養(yǎng)技術(shù)的研究。1種子萌發(fā)1.1胚齡:不同種齡的種子萌發(fā)率不一樣。葉秀嶙等取鐵皮石斛 26個(gè)月種齡的種子進(jìn)行組織培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，種齡愈長(zhǎng)，萌發(fā)率愈高。2 個(gè)月種齡的種子接入改良N6培養(yǎng)基中，萌發(fā)率僅為6 % ; 3個(gè)月種 齡的種子接入改良嘆培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2周后開始萌發(fā)，萌發(fā)率為87% ; 4 一 6個(gè)月種齡的種子接入培養(yǎng)基中，只要培養(yǎng)一周即可萌發(fā)，萌 發(fā)率為95 %。1.2基本培養(yǎng)基:鐵皮石斛種子在N6，改良N6, MS , 1 / 2 MS , SH、KS、VW、KundsonC , 1 / 2N6，White 等培養(yǎng)基上均可萌發(fā)。 趙天榜等比較風(fēng)、

3、MS等14種培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛種胚成苗率的影響， 除殘外，所有的基本培養(yǎng)基均優(yōu)于其減半培養(yǎng)基，其中以N6最好， SH、Kn、MS 次之，l /2MS、1 / 2 Vw 最差。1.3激素:在培養(yǎng)基中添加一定濃度的NAA可促進(jìn)種子的萌發(fā)， 濃度以0.2 一 0.5mg/L最適合胚的萌發(fā)和生長(zhǎng)，過高起抑制作用。2 , 4-D對(duì)胚的萌發(fā)起抑制作用。6 一 BA對(duì)胚萌發(fā)后的生長(zhǎng)起抑制作 用。KT、IAA對(duì)胚萌發(fā)和成苗的影響不大，當(dāng)濃度超過1mg/L時(shí)， 對(duì)胚萌發(fā)和成苗起抑制作用。1.4天然添加物:在培養(yǎng)基中添加適量的馬鈴薯汁、香蕉汁、椰 乳可促進(jìn)鐵皮石斛種胚的萌發(fā)，1.5炭源:在組培過程中適當(dāng)添加活性炭，

4、可以吸附代謝過程中 產(chǎn)生的廢棄物，防止組織褐變，并刺激胚胎的發(fā)生與生根，可加人2 % 蔗糖。2原球莖增殖2.1基本培養(yǎng)基:鐵皮石斛原球莖增殖可以1/2 MS，MS等作為基 本培養(yǎng)基。2.2激素:適宜的NAA、KT、6 BA濃度對(duì)原球莖的增殖起促 進(jìn)作用。唐桂香等以1 / 2 MS為基本培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)BA 1.0mg/L和 NAAO.lmg/L有利于原球莖誘導(dǎo)增殖。2.3天然添加物:椰子汁、蘋果汁對(duì)原球莖的增殖有較好的效果， 但香蕉汁對(duì)原球莖的增殖有抑制作用。2.4炭源:添加活性炭能使原球莖的增殖量顯著增加，這可能是 活性炭吸附了某種不利于原球莖增殖的物質(zhì)，蔗糖濃度0.5 %0.3 %。3原球莖分

5、化3.1基本培養(yǎng)基:鐵皮石斛原球莖分化可以1 / 2 MS，MS等作 為基本培養(yǎng)基。3.2激素：培養(yǎng)基中添加BA和NAA后可加快原球莖分化的進(jìn) 程。3.3天然添加物:土豆汁、馬鈴薯提取液能有效促進(jìn)原球莖的分 化，香蕉汁對(duì)原球莖的分化有抑制作用。3.4炭源:培養(yǎng)基中加人活性炭能促進(jìn)原球莖的分化際。在原球 莖分化中，蔗糖濃度以3 %為分化的臨界值，而蔗糖2 %為原球莖 分化的適宜濃度。4生根與壯苗4.1基本培養(yǎng)基:鐵皮石斛試管苗生根壯苗常用的基本培養(yǎng)基有 1/2 MS、MS、B5、N6 等。4.2激素:在基本培養(yǎng)基中添加NAA、IAA、IBA等激素有助于試 管苗生根壯苗。NAA有助于試管苗的生根，

6、以0.5mg/L試管苗平均根 數(shù)最多和平均根長(zhǎng)最長(zhǎng)。4.3天然添加物:在基本培養(yǎng)基中加人香蕉汁、馬鈴薯汁、孽葬 汁、綠豆芽汁、蘋果汁仁、椰子乳等能促進(jìn)鐵皮石斛幼苗的生長(zhǎng)和根 系的發(fā)育，香蕉汁的促進(jìn)作用最為顯著。4.4炭源:鐵皮石斛在生根培養(yǎng)時(shí)加入活性炭有利于試管苗的生 長(zhǎng)，能使根系長(zhǎng)得更加粗壯閉。5其他外植體的離體培養(yǎng)除種子作外植體外，以鐵皮石斛的莖尖、莖段、幼葉、種胚苗、 幼根為外植體，均可培育出組培苗。以莖尖、莖段為外植體，培養(yǎng)途 徑為莖尖、莖段一誘導(dǎo)形成不定芽不定芽增殖不定芽分化生根 壯苗，形成完整試管苗。5.1不定芽誘導(dǎo)：曾宋君等比較N6、MS、KS、VW、KC等培養(yǎng) 基，以MS為基本

7、培養(yǎng)基效果較好。朱艷等比較1 / 2 MS、B5、改 良N6、KC等4種培養(yǎng)基對(duì)莖段分化叢生芽的影響，結(jié)果表明以1/ 2 MS誘導(dǎo)叢生芽效果最好。張偉等比較N6、MS、1/2N6、1 / 2 MS 等培養(yǎng)基對(duì)試管苗生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，所有的基本培養(yǎng)基均優(yōu)于 其減半培養(yǎng)基，其中以改良N6最佳，MS次之。張啟香等比較l / 2MS、MS、VW等培養(yǎng)基，結(jié)果表明以1 / 2MS誘導(dǎo)效果最好。周 俊輝等比較N6、B5、MS、KC等4種基本培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛芽誘導(dǎo) 和增殖的影響，以B5效果最好。NAA、6 - BA、KT、IBA、LH在不定 芽誘導(dǎo)過程中具有良好的促進(jìn)作用，NAA濃度通常0.10.5mg

8、/L, 6 一 BA 濃度通常 0.5 一 2.0mg/L。5.2不定芽增殖:將叢生芽切割后繼續(xù)在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可增 殖產(chǎn)生大量叢生芽。在不定芽增殖培養(yǎng)中可添加香蕉汁、土豆汁、椰 子汁等天然附加物，周俊輝等認(rèn)為添加椰子汁對(duì)芽的增殖效果最好。5.3生根壯苗:生根壯苗適宜的培養(yǎng)基有N6 + 10 %香蕉汁，1 / 2 MS 十 IBAO.lmg/L，l / 2MS 十 10 %香蕉汁十 0.5 % AC，改良 N6 十 0.2mg/L NAA + 10 %香蕉汁，MS + NAAO.05 mg/L , + KTO.1mg/L, + 葉酸 2.0mg/L+ La 稀土 10mg/L，1 / 2 M

9、S + NAAO.7mg/L等。在生 根培養(yǎng)基中通常加入香蕉汁、蔗糖可促進(jìn)生根壯苗。6討論與展望6.1菌根技術(shù)和試管苗移栽關(guān)于鐵皮石斛組織培養(yǎng)的研究目前已取得一定的進(jìn)展，成功培育 出試管苗，但有關(guān)試管苗移栽方面的報(bào)道還很少，目前普遍存在移栽 成活率低，苗期管理困難的問題。6.2組織培養(yǎng)次生代謝產(chǎn)物的研究進(jìn)行組織培養(yǎng)研究時(shí)，直接以 組織培養(yǎng)物替代原藥材使用或者生產(chǎn)活性成分也是解決鐵皮石斛資 源短缺的方法之一，目前雖然涉及該方面的研究還很少，但以愈傷組 織培養(yǎng)物替代它的原植物具有廣闊的前景，值得進(jìn)一步的研究和開 發(fā)。6.3 展望顧慧芬等研究表明，鐵皮石斛組培苗和野生品多糖含量基本相 同。范俊安等對(duì)植物形態(tài)及莖、葉等組織