藥品微生物學(xué)檢查

1、關(guān)于藥品的微生物學(xué)檢查第一張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、目的要求 1、了解微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌儀器設(shè)備 2、了解空氣、皮膚細(xì)菌檢查方法 3、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.藥品的微生物限度檢查（一） 1）口服藥物的檢查: 藥品的預(yù)處理： 大腸桿菌的檢查： 細(xì)菌總數(shù)的檢查： 2）外用藥物的檢查: 藥品的預(yù)處理： 綠膿桿菌的檢查： 金黃色葡萄球菌的檢查：2.空氣、皮膚細(xì)菌檢查方法(驗(yàn)證)3.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌儀器設(shè)備： 高壓蒸汽滅菌鍋、消毒煮沸器、G6玻璃濾菌器裝置、潔凈工作臺、 移動式 紫外光燈、鼓風(fēng)式干烤箱、紫外線殺菌標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)一 藥品的微生物限度

2、檢查（一） 實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌設(shè)備 空氣和皮膚細(xì)菌檢查方法（綜合實(shí)驗(yàn)+基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)）第二張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 通過實(shí)驗(yàn)了解藥品微生物限定檢查法的意義、設(shè)計(jì)方法、細(xì)菌檢查常用的基本技術(shù)和程序，結(jié)果分析方法。藥品的微生物限度檢查實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃幤返奈⑸锵薅葯z查實(shí)驗(yàn)程序 一、藥品的預(yù)處理二、藥品的增菌培養(yǎng)、結(jié)果分析三、細(xì)菌分離鑒定、結(jié)果分析第三張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月口服藥外用藥藥品的微生物限度檢查實(shí)驗(yàn)方法（一） 1.藥品的預(yù)處理2克藥品加20毫升生理鹽水，研磨制成懸液 2.細(xì)菌培養(yǎng)外用藥口服藥藥品混懸液10毫升加入膽鹽乳糖增菌液中藥品混懸液10毫升加入膽鹽乳糖增菌液

3、中藥品混懸液10毫升加入亞碲酸鈉增菌液中37,24小時(shí)37,24小時(shí)第四張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 將剩余口服藥以10-1 10-2 10-3 10-4 進(jìn)行稀釋(以生理鹽水稀釋) 3.細(xì)菌總數(shù)測定從上述四個(gè)稀釋管中各取1ml混入溶化的瓊脂培養(yǎng)基中，混勻，冷卻后置37恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。取四個(gè)中試管各加9ml生理鹽水從剩余10ml懸液中取1ml加入上述四個(gè)稀釋管中1ml1ml10-110-410-210-39ml生理鹽水第五張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、目的要求: 1、了解細(xì)菌培養(yǎng)接種技術(shù) 2、掌握細(xì)菌基本形態(tài) 3、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)

4、容1.藥物的微生物限度檢查（二）2.空氣、皮膚細(xì)菌檢查結(jié)果測定。3.講授基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法（營養(yǎng)瓊脂、營養(yǎng)肉湯）。4.細(xì)菌在三種不同物理性狀培養(yǎng)基上的接種方法(基本技能)液體培養(yǎng)基 平板培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基 雙糖含鐵半固體斜面培養(yǎng)基5.顯微鏡下觀察 細(xì)菌的基本形態(tài): 球菌、枯草桿菌、霍亂弧菌。 特殊結(jié)構(gòu)： 肺炎莢膜、變形鞭毛、破傷風(fēng)芽胞。6.培養(yǎng)基的種類和用途 普通培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)二 藥品的微生物限度檢查（二） 細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查及培養(yǎng)接種技術(shù)第六張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、空氣、皮膚細(xì)菌培養(yǎng)現(xiàn)象觀察 （一）記錄空氣微生物培養(yǎng)結(jié)果菌落數(shù)目、大小、邊緣

5、、顏色、粗糙（光滑）（二）記錄皮膚微生物培養(yǎng)結(jié)果比較消毒前后細(xì)菌菌落數(shù)，菌落特點(diǎn)。第七張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基分類根據(jù)物理性狀分類： 液體培養(yǎng)基 主要用于增菌 半固體培養(yǎng)基 用于檢測動力及保存菌種 固體培養(yǎng)基 用于分離鑒定細(xì)菌根據(jù)用途分類： 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 普通瓊脂培養(yǎng)基 營養(yǎng)培養(yǎng)基 血液瓊脂培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 SS培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基雙糖鐵培養(yǎng)基 厭氧培養(yǎng)基 庖肉培養(yǎng)基第八張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基的制備程序調(diào)配矯正pH（7.0-7.6）分裝 滅菌（121.3，20-30分鐘）放入冰箱冷藏備用。因高壓之后pH值會下降0.1左右，所以矯正pH

6、時(shí)應(yīng)比所需的pH高。鑒定是否有菌可將培養(yǎng)基置于37 培養(yǎng)24小時(shí)，然后觀察。第九張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月二、細(xì)菌的接種技術(shù)材 料普通瓊脂平板、肉湯培養(yǎng)基、半固體斜面培養(yǎng)基大腸埃希菌培養(yǎng)物（套臺）第十張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月方 法1.平板劃線接種法（1）平行劃線法（2）分區(qū)劃線法2.瓊脂斜面的接種方法3.液體培養(yǎng)基接種法4.半固體接種法第十一張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月分區(qū)劃線法第十二張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落第十三張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月斜面移種技術(shù)第十四張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月菌苔第十五

7、張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月液體移種技術(shù)第十六張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月穿刺技術(shù) 第十七張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 取出前次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)物觀察： 1.口服藥物1)細(xì)菌鑒定： 在膽鹽乳糖增菌液中有無細(xì)菌生長： 增菌液變混濁有 -接種在伊紅美蘭瓊脂平板培養(yǎng)基 上面。 方法：分區(qū)劃線接種。 2)細(xì)菌總數(shù)測定： 選擇30-300個(gè)菌落平板， 細(xì)菌總數(shù)菌落數(shù)稀釋倍數(shù)藥物的微生物限度檢查方法（二）第十八張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2.外用藥1)判定膽鹽乳糖增菌液培養(yǎng)物及亞碲酸鈉增菌液培養(yǎng)物有無細(xì)菌生長： 增菌液變混濁有2)細(xì)菌鑒定：（1）將膽鹽乳糖增

8、菌液培養(yǎng)物無菌接種在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養(yǎng)基上面。 方法：斜面化線接種；（2）將亞碲酸鈉增菌液培養(yǎng)物，無菌接種在卵黃高鹽瓊脂平板培養(yǎng)基上面。 方法：分區(qū)劃線接種。 37恒溫孵育箱24小時(shí)培養(yǎng)后，觀察結(jié)果。第十九張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌基本形態(tài)球菌桿菌螺形菌第二十張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月葡萄球菌第二十一張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月鏈球菌第二十二張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸埃希菌第二十三張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月枯草桿菌第二十四張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月霍亂弧菌第二十五張，PPT共六十二

9、頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)鞭毛莢膜芽孢第二十六張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月破傷風(fēng)梭菌spore第二十七張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、目的要求: 1、了解細(xì)菌的生長現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察 2、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.藥物的微生物限度檢查（三）2.細(xì)菌的生長現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察 1）液體培養(yǎng)基-沉淀、渾濁、表面生長現(xiàn)象。 2）三葡、三鏈、大腸與副傷乙培養(yǎng)基的菌落特征、溶血環(huán)觀察。 3）雙糖含鐵培養(yǎng)基- 動力、氣體、硫化氫、分解乳糖觀察。 4）結(jié)核桿菌菌落的觀察。3.中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn) 1）中草藥-大蒜汁、黃連、黃芩、黃柏。 2）抗生

10、素-青霉素、慶大、氨芐、新諾明、生理鹽水。實(shí)驗(yàn)三 藥品的微生物限度檢查（三） 微生物的形態(tài)學(xué)檢查及藥物的敏感性試驗(yàn) 第二十八張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月1）從伊紅美蘭瓊脂平板培養(yǎng)基上- 挑取黑色帶有金屬光澤的濕潤菌落，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面，進(jìn)行細(xì)菌的純培養(yǎng)。 2）觀察外用藥物在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長狀況。 記錄被檢菌色素的溶解性質(zhì)、液化明膠的狀況及菌苔粘稠度等。 革蘭氏染色鏡下觀察其菌落形態(tài)。 根據(jù)上述被檢菌落的生物性質(zhì)和狀況及細(xì)菌形態(tài)，確定該被檢菌的名稱。 3）從卵黃高鹽瓊脂平板培養(yǎng)基上生長，挑取黃色的濕潤菌落，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面，進(jìn)行細(xì)菌的純

11、培養(yǎng)。藥物的微生物限度檢查（三）第二十九張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2.細(xì)菌的生長現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察混濁生長菌膜菌沉淀均勻渾濁對照第三十張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月菌膜生長第三十一張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十二張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十三張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十四張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月3.中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)第三十五張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 紙片法第三十六張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月六、革蘭染色法原理：革蘭陽性菌與革蘭陰性菌細(xì)胞壁差異應(yīng)用方法 標(biāo)

12、本片制備 革蘭染色結(jié)果第三十七張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.革蘭染色（1）初染：滴加結(jié)晶紫染液l2滴，1分鐘.水洗（2）媒染：滴加碘液， l2滴，作用1分鐘后水洗。 （3）脫色：滴加95酒精數(shù)滴，（約1530秒），立即水洗。 （4）復(fù)染：滴加稀釋復(fù)紅染液12滴，作用1分鐘后水洗。 （5）結(jié)果：牙垢標(biāo)本中革蘭陽性菌染成紫色，革蘭陰性菌染成紅色。其中真菌(白色念珠菌)染成紫色，而螺旋體等被染成紅色。口腔中脫落的組織細(xì)胞及個(gè)別白細(xì)胞被染成紅色。其細(xì)胞質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核呈深紅色。 第三十八張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)四 藥物的微生物限度檢查（四） 病毒和細(xì)菌及其他病原

13、微生物一、目的要求 1、了解抗酸染色方法及各種病毒和細(xì)菌的菌落形態(tài) 2、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、藥物的藥物的微生物限度檢查（四） 1）將口服藥物中的細(xì)菌分別接種：蛋白胨水培養(yǎng)基； 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基； 枸櫞酸鹽（西蒙氏）培養(yǎng)基。 同時(shí)接種產(chǎn)氣桿菌于上述培養(yǎng)管做對照，以備進(jìn)行IMViC試驗(yàn)。 2）取接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面的外用藥物中細(xì)菌進(jìn)行血漿凝固酶檢測,依 據(jù) 其反應(yīng)結(jié)果,確定該菌的性質(zhì)及名稱。2 、抗酸染色3 、真菌培養(yǎng)物的觀察-黑曲霉、木霉 、青霉菌菌落，白色念珠菌假菌絲， 酵母菌菌落的觀察。4 、記錄中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)結(jié)果 5 、觀察雞胚的結(jié)構(gòu)第三十

14、九張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月-試驗(yàn)培養(yǎng)基加試劑試驗(yàn)結(jié)果大腸埃希菌產(chǎn)氣桿菌蛋白胨水2管11葡萄糖蛋白胨水2管11葡萄糖蛋白胨水2管11枸櫞酸鹽2管11第四十張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)四 藥物的微生物限度檢查（四） 病毒和細(xì)菌及其他病原微生物 取接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面的外用藥物中細(xì)菌進(jìn)行血漿凝固酶檢測,依 據(jù) 其反應(yīng)結(jié)果,確定該菌的性質(zhì)及名稱。第四十一張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月二.血漿凝固酶試驗(yàn)原理：非致病性葡萄球菌不產(chǎn)生血漿凝固酶而致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使含有枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑的兔或人等血漿發(fā)生凝固。方法：1.取潔凈玻片，用

15、記號筆畫兩個(gè)圈并標(biāo)號，其中一個(gè)滴加生理鹽水另一個(gè)滴加兔血漿。2.接種環(huán)燒灼滅菌后挑取金葡菌苔，1/2在生理鹽水中研勻混懸，另1/2在兔血漿中研勻混懸，靜止片刻，觀察結(jié)果。結(jié)果： 凝集呈顆粒狀判定為血漿凝固酶試驗(yàn)（+）， 呈均勻混濁狀不凝集判定為（-）第四十二張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月方法：1.取潔凈玻片，用記號筆畫兩個(gè)圈并標(biāo)號，其中一個(gè)滴加生理鹽水另一個(gè)滴加兔血漿。2.接種環(huán)燒灼滅菌后挑取金葡菌苔，1/2在生理鹽水中研勻混懸，另1/2在兔血漿中研勻混懸，靜止片刻，觀察結(jié)果。結(jié)果： 凝集呈顆粒狀判定為血漿凝固酶試驗(yàn)（+）， 呈均勻混濁狀不凝集判定為（-）第四十三張，PPT共六十二

16、頁，創(chuàng)作于2022年6月制片（涂片、干燥、固定）；石炭酸復(fù)紅初染（加溫、 蓋濾紙片） 5min -水洗；3鹽酸酒精脫色 （ 15S,水洗）；美蘭復(fù)染（1min，水洗 ）-濾紙吸干鏡檢?？顾崛旧襟E第四十四張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)核桿菌第四十五張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月抗生素體外抑菌試驗(yàn)（二） 記錄紙片法結(jié)果測量抑菌環(huán)直徑 第四十六張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月病毒的分離培養(yǎng)雞胚接種動物接種 雞胚培養(yǎng)組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒的培養(yǎng)方法：第四十七張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月病毒的分離培養(yǎng)雞胚接種第四十八張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月

17、病毒名稱接種部位雞胚胚齡（天）痘類病毒絨毛尿囊膜1013流感、副流感、腮腺炎病毒尿囊9 11嗜神經(jīng)病毒卵黃囊58初次分離標(biāo)本羊膜腔1012病毒的分離培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)第四十九張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月實(shí)驗(yàn)五 藥物的微生物限度檢查（五）一、目的要求掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容以生化反應(yīng)（IMViC）檢測口服藥中細(xì)菌的性質(zhì)。第五十張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月-試驗(yàn)培養(yǎng)基加試劑試驗(yàn)結(jié)果大腸埃希菌產(chǎn)氣桿菌吲哚(I)蛋白胨水2管苯甲醛試劑0.5ml(5滴)紅陽性（+）無色變陰性（-）甲基紅(M)葡萄糖蛋白胨水2管甲基紅5滴紅色陽性（+）黃色陰性（-）VP葡萄糖蛋白

18、胨水2管培氏乙6滴萘酚試劑6滴無色變陰性（-）紅色陽性（+）枸椽酸鹽(C )枸櫞酸鹽2管綠無色變陰性（-）綠藍(lán)色陽性（+）第五十一張，PPT共六十二頁，創(chuàng)作于2022年6月IMViC結(jié)果吸哚試驗(yàn)：取出后每管滴加柯氏試劑0.5ml，靜止片刻，觀察有無顏色改變。大腸埃希菌能夠分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，加入對二甲基氨基苯甲醛后形成紅色的玫瑰吲哚，則為陽性反應(yīng)；產(chǎn)氣桿菌不產(chǎn)生吲哚，添加試劑后無顏色變化，為陰性反應(yīng)。甲基紅試驗(yàn)：取出后各管內(nèi)滴加甲基紅試劑數(shù)滴。大腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)酸較多，培養(yǎng)基的pH值在4.5以下，加入甲基紅試劑后呈紅色反應(yīng)，為陽性結(jié)果。產(chǎn)氣桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生的是乙酰甲基甲醇，酸類較少，培養(yǎng)基內(nèi)pH值較高，加入甲基紅試劑后呈黃色反應(yīng)是為陰性。V-P試驗(yàn)：葡萄糖蛋白胨水中滴加數(shù)滴培