農(nóng)藥殘留檢測(cè)分析校內(nèi)實(shí)訓(xùn)報(bào)告

1、農(nóng)藥殘留檢測(cè)分析校內(nèi)實(shí)訓(xùn)報(bào)告姓名：學(xué)號(hào)：成績(jī)：指導(dǎo)老師實(shí)習(xí)地點(diǎn)實(shí)訓(xùn)時(shí)間目的與意義隨著生活水平的提高，食品安全已被越來越多的人所重視?，F(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，農(nóng)藥的適用范圍也越來越廣，但是隨著農(nóng)藥的大量使用，農(nóng)藥殘留也成為了人們食用農(nóng)產(chǎn)品同時(shí)最擔(dān)心的問題之一。對(duì)農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行殘留分析，對(duì)于規(guī)范農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)，監(jiān)控食品安全有重要的意義。試驗(yàn)通過土壤中毒死蜱農(nóng)藥含量分析來模擬農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，具有簡(jiǎn)化試驗(yàn)的作用。實(shí)訓(xùn)內(nèi)容2.1樣品預(yù)處理2.1.1試樣制備含有樂斯本、毒死蜱的水樣。2.1.2提取量取5mL水樣加入分液漏斗中，并加入20mL乙酸乙酯置分液漏斗，充分震蕩，靜置分層，收集上層乙酸乙酯相，下層水相再

2、用10mL、10mL乙酸乙酯同上法萃取兩次，收集上層乙酸乙酯，加入2-5g無水硫酸鈉脫水，加入少量活性炭脫色。重復(fù)三次。2.1.3凈化2.1.3.1制作層析柱，層析柱自下而上裝無水硫酸鈉5g,氧化鋁4g,活性炭適量，無水硫酸鈉5g,稍加震動(dòng)，使柱子壓實(shí)；2.1.3.2取20ml乙酸乙酯，預(yù)先淋洗層析柱；2.1.3.3將上步驟收集到的試樣酯層液分批加入到層析柱中，過柱；2.1.3.4待層析柱中樣品液過柱完畢，加入40ml乙酸乙酯液洗脫；2.1.3.5收集得較純凈樣品液。2.2添加回收實(shí)驗(yàn)操作步驟2.2.1本組用0.048mg/l濃度的毒死蜱農(nóng)藥溶液做添加回收實(shí)驗(yàn)（取用樣品液2ml）,其操作方法同

3、試樣處理方法（另外還有0.096mg/l和0.192mg/1濃度的添加回收實(shí)驗(yàn)）。連續(xù)萃取時(shí)分別用10ml、5ml、5ml的乙酸乙酯溶液萃取，收集酯層液（其操作方法同樣品處理液操作方法）。2.3高效液相色譜檢測(cè)2.3.1高效液相色譜儀工作原理以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。高效液相色譜儀操作流程一開機(jī)前準(zhǔn)備1根據(jù)需要選擇合適色譜柱。2在容器中放入已過濾脫氣好的流動(dòng)相，把吸濾過濾頭放入容器中。二開機(jī)1打開所需儀器的電源開關(guān)，打開氦氣閥門。2等各儀器

4、自檢通過后，雙擊進(jìn)入工作站。三檢查設(shè)備連接選擇所需Project,runsample上擊右鍵，選擇所需儀器，聯(lián)機(jī)。點(diǎn)擊instrumentmethod的edit,設(shè)置好各儀器參數(shù)。保存所編緝的方法。樣品分析與采集點(diǎn)擊setup,建立方法。等待色譜柱、系統(tǒng)平衡，基線穩(wěn)定后，設(shè)置好樣品信息，點(diǎn)擊Start,即開始樣分析與數(shù)據(jù)采集。報(bào)告輸出在工作站中輸出檢測(cè)結(jié)果將文件轉(zhuǎn)化成所需格式的文件，輸出報(bào)告六關(guān)機(jī)1沖洗色譜柱，排出流路中可能有的緩沖液，并沖洗泵的柱塞桿。2泵停止，關(guān)閉氦氣閥門。3退出工作站，關(guān)閉儀器電源。在記錄本上記錄使用情況。2.3.3高效液相色譜儀使用注意事項(xiàng)所有的溶劑均選用HPLC級(jí)試劑

5、，水用純凈水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換，防止長(zhǎng)菌變質(zhì)；如果流動(dòng)相有緩沖鹽，必須用5%甲醇或5%乙腈過渡沖洗。樣品均用0.45um的濾膜過濾后才可進(jìn)樣。色譜柱用合適的溶劑保存，若為C18柱推薦用甲醇保存。5柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。6C18柱絕對(duì)不能進(jìn)蛋白樣品、血樣、生物樣品；7氣泡會(huì)致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生泡2.3.4農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為50mg/L100mg/L，200mg/L，250mg/L，500mg/L，在規(guī)定的色譜條件下,待儀器穩(wěn)定后，進(jìn)樣分析。制作農(nóng)藥濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲

6、線。2.3.5色譜條件（1）流動(dòng)相：乙腈-水（75-25）（2）檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm（3）進(jìn)樣量：20pL（4）流速：1.0mL/min2.4結(jié)果分析2.4.1農(nóng)藥的液相色譜圖圖表1水樣：-_5-一-2-分析結(jié)果編號(hào)1T分鐘面積mV*s類型寬秒面積4.4000.4.1151.BB1nA匚jvi3.vbJ.in右aa匚fn.6.733355.7829.BBffil：.i=.11.000027.00006.870293.1298圖表2添加回收實(shí)驗(yàn)-5355.3E2317W=.9-775分析結(jié)果編號(hào)RT分鐘面積mV*s類型寬秒面積14.45004.5633BB11.00000.053226.7500

7、9.3365BB16.00000.108837.86678569.1067BB177.000099.83813.0923-2.0404分析結(jié)果編號(hào)RT分鐘面積mV*s類型寬秒面積18.133328.9131BB34.0000100.00002.4.2農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度（mg/L）50100200250500峰面積（mV*s）756.55841723.48833611.21394803.47363843.2743濃度（mg/L）毒死脾農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.05x+13.838R=0.998從前四組的數(shù)據(jù)來看，總體趨勢(shì)是：隨著毒死脾濃度的增加，相應(yīng)濃度對(duì)映的峰面積是增加的，而從第四組數(shù)據(jù)到第五組數(shù)據(jù)，

8、隨著毒死脾濃度的增加，相應(yīng)濃度對(duì)映的峰面積是減少的，顯然第五組數(shù)據(jù)存在問題，所以在做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)將其舍去。2.4.2添加回收率將10000mg/L的毒死蜱溶液分別稀釋成2mg/L、20mg/L、200mg/L，在上述色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下：濃度(mg/L)峰面積(mV*s)123平均248.282458.930022.645043.285820102.238910.7336(舍)28.913165.823420067.134019.204755.782961.4585添加回收率=測(cè)得的濃度/實(shí)際的濃度對(duì)于濃度為2mg/L的添加回收率：測(cè)得的濃度=0.05x43.2858+13.838=16

9、.00(mg/L)實(shí)際的濃度為20mg/L所以：添加回收率=16.00/2x100%=800%對(duì)于濃度為20mg/L的添加回收率：測(cè)得的濃度=0.05x65.8234+13.838=17.13(mg/L)實(shí)際的濃度為20mg/L所以：添加回收率=17.13/20 x100%=85.65%對(duì)于濃度為200mg/L的添加回收率：測(cè)得的濃度=0.05x61.4585+13.838=16.91(mg/L)實(shí)際的濃度為200mg/L所以：添加回收率=16.91/200 x100%=8.46%(mg/L)(4)分析：由上面得到的數(shù)據(jù)可以看出，200mg/L的添加回收率在80%120%的合理范圍之內(nèi)，濃度為

10、2mg/L的添加回收率非常高，濃度為20mg/L的添加回收率非常低，不在合理范圍80%120%，?？赡苡捎谠谳腿r(shí)沒有萃取干凈，萃取的時(shí)候，在分層的時(shí)候水層和有機(jī)溶劑層沒有完全分開，有機(jī)溶劑層的農(nóng)藥流到水層中，本組的實(shí)驗(yàn)過程中，有一步未把潤(rùn)洗完的濃縮液收集，或者在蒸發(fā)濃縮是出現(xiàn)誤差！導(dǎo)致本組的添加回收實(shí)驗(yàn)的濃度不在農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之內(nèi)。2.4.3樣品中農(nóng)藥濃度檢測(cè)結(jié)果樣品中含毒死脾濃度為=0.05x93.1298+13.838=18.50(mg/L)實(shí)訓(xùn)小結(jié)與心得所謂農(nóng)藥殘留在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品以及土壤和水體中的現(xiàn)象。如今人們生活水平

11、提高，對(duì)物質(zhì)要求也嚴(yán)格了，綠色食品也越來越高的呼聲，農(nóng)藥殘留帶來一系列難以解決的難題，如傷害人身健康，污染環(huán)境等，農(nóng)藥殘留檢測(cè)是一項(xiàng)技術(shù)要求高，市場(chǎng)需求強(qiáng)的技術(shù)。作為制藥工程專業(yè)學(xué)生的我們，對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)也要有一定的了解，今天我們的實(shí)訓(xùn)內(nèi)容就是檢測(cè)水樣中的農(nóng)藥殘留含量，主要是樂斯本、毒死脾的含量。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括前處理、添加回收實(shí)驗(yàn)、高相液相色譜檢測(cè)等，前處理包括水樣的提取和水樣的濃縮，用乙酸乙酯多次進(jìn)行提取，對(duì)于乙酸乙酯，有揮發(fā)性，做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候要控制其用量，稍有毒性，提取時(shí)，將水樣和乙酸乙酯混于分液漏斗中，充分振蕩后靜置分層，收集酯相，水相再加乙酸乙酯萃取兩次。萃取完后，往酯相中加入適量的無水硫

12、酸鈉至無水硫酸鈉不溶解或無結(jié)塊產(chǎn)生。對(duì)于今天的實(shí)驗(yàn)，我們小組在這個(gè)步驟沒少出錯(cuò)，前處理收集酯相、還有濃縮試驗(yàn)時(shí)，都沒有進(jìn)行清洗儀器，這樣將影響最終的收率，所以說實(shí)驗(yàn)要非常嚴(yán)謹(jǐn)，尤其是對(duì)于化學(xué)實(shí)驗(yàn)，前處理非常重要，任何一步都會(huì)影響會(huì)面的數(shù)據(jù)。今天的檢測(cè)也用到了化學(xué)實(shí)驗(yàn)很重要的儀器高效液相色譜儀，HPLC主要包括溶劑傳輸系統(tǒng)（泵）、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和流動(dòng)相五個(gè)組成部分，操作要按部就班，不能隨心所欲。通過這次實(shí)驗(yàn)，主要熟悉并使用高效液相色譜儀，認(rèn)識(shí)到，越是精密的實(shí)驗(yàn)儀器一定要更認(rèn)真，明白其中的原理和操作過程，即可將它們變成解決人們難題的好幫手。平時(shí)的理論學(xué)習(xí)中我們總是能把一套一套的原理倒背如流，但真正實(shí)際操作時(shí)卻不見得能如魚得水，步步準(zhǔn)確無誤，很多時(shí)候我們都能看到儀器名字就能想起其一大段的理論知識(shí)，但實(shí)際操作時(shí)你甚至不能注意到很致命的注意事項(xiàng)，例如本次使用高效液相