菌種保存和微生物常識

1、.：.；第8頁 共8頁菌種保管和微生物常識1、常用培育基的制備、滅菌與消毒 營養(yǎng)：從外部環(huán)境攝取其生命活動所必需的能量和物質(zhì)，滿足生長和繁衍需求的一種生理過程。是生命活動的物質(zhì)根底，是生命活動的起點。 營養(yǎng)物：具有營養(yǎng)功能的物質(zhì)。也包括光能。提供生物的構(gòu)造物質(zhì)、能量、代謝調(diào)理物質(zhì)和良好的生理環(huán)境。 營養(yǎng)要素：碳源、氮源、能源、生長因子、無機(jī)鹽和水 培育基：人工配制、適宜微生物生長繁衍或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的混合養(yǎng)料。要求：應(yīng)具備6大營養(yǎng)要素；物質(zhì)比例適宜；必需滅菌。 2、選用和設(shè)計培育基的原那么、方法及制備過程原那么：目的明確 、營養(yǎng)協(xié)調(diào)、經(jīng)濟(jì)節(jié)約 物理化學(xué)條件適宜 方法：生態(tài)模擬、查閱文獻(xiàn) 精心設(shè)計

2、、實驗比較 步驟：稱量、熔化、調(diào)PH、過濾、分裝、 加塞、包扎、滅菌、冷卻、無菌檢查 培育基種類： 一、按成分的不同分 天然培育基、合成培育基、半合成培育基 二、按培育基的物理形狀分 固體培育基、液體培育基、半固體培育基 三、按培育基用途 根底培育基、選擇培育基 、加富培育基鑒別培育基 消毒與滅菌 ：消毒：消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體 滅菌：殺滅一切微生物的營養(yǎng)體，芽胞和孢子。 方法： 一、物理的方法：加熱、過濾、輻射 二、化學(xué)的方法：用化學(xué)試劑抑制或殺滅微生物。主要破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。如重金屬離子，磺胺類藥物及抗生素等。 加熱法： 1干熱法：火焰灼燒滅菌和熱空氣滅菌。 1、火焰灼燒適用于接種

3、環(huán)、接種針和金屬器具如鑷子等，試管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、熱空氣滅菌利用高溫枯燥空氣160170C加熱滅菌12h，適用于玻璃器皿和培育皿等。原理加熱使蛋白量變性，與水的含量有關(guān)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞含水量越大，凝固越快。 3、本卷須知： 1培育基、橡膠制品、塑料制品不能用此法； 2溫度控制在180； 3物品不能太擠； 4溫度降至70時才開箱門。 2濕熱法 ：原理：由于濕熱中菌體吸水，蛋白質(zhì)容易凝固，因蛋白質(zhì)含水量添加，所需凝固溫度降低；濕熱的蒸氣有潛熱存在。所以效果比同溫度下干熱好。 高壓蒸汽滅菌法： 1、設(shè)備：高壓滅菌鍋 2、時間長短根據(jù)滅菌物品的種類和數(shù)量不同有所變化。 3、適用于培育基、任

4、務(wù)服、橡膠物品等的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌。 4、本卷須知： 1冷空氣徹底排除；2加水；3壓力降為“0時方可翻開。 常壓蒸汽滅菌：對于不宜用高壓蒸汽滅菌的培育基如明膠培育基、牛乳培育基，含糖培育基等可采用此法。徹底滅菌那么采用間歇滅菌方法。 煮沸滅菌法：適用注射器和解剖器皿，時間1015min， 超高溫殺菌:-150C和2-8s對牛乳和其它液態(tài)食品。優(yōu)點 ：堅持食品價值和營養(yǎng)成分。過濾除菌： 原理：介質(zhì)在有壓力時阻隔微生物。 適用范圍：許多資料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 設(shè)備：蔡氏過濾器，濾膜過濾器。 優(yōu)缺陷：不破壞培育基成分，只適用少量濾液。需大量無菌空氣以及凈化任務(wù)臺。 本卷須知

5、：1、壓力適當(dāng)； 2、無菌條件下進(jìn)展； 3、防止浸透景象。 輻射滅菌： 原理：紫外線波長在200300nm，具有殺菌作用，以265-266殺菌力強。此段波長易被細(xì)胞中核酸吸收；可產(chǎn)生臭氧和過氧化氫。殺菌效能與強度和時間的乘積成正比。 缺陷：穿透力不大。距照射物1.2m為宜。 運用：無菌室，醫(yī)院。 本卷須知：對眼睛和皮膚有刺激作用。 射線滅菌：r射線，穿透力強，適用于堆積物品的滅菌。 化學(xué)藥品滅菌： 原理：運用化學(xué)制劑破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。 殺菌劑如重金屬離子； 抑菌劑如磺胺類及多數(shù)抗生素。 留意：與藥品的濃度高低，時間長短，微生物種類以及微生物所處的環(huán)境有關(guān)。 常用化學(xué)殺菌劑有：乙醇、醋酸、石碳酸

6、 福爾馬林、升汞、高錳酸鉀、新潔爾滅等 3、微生物的分別、純化及培育技術(shù) 分別與純化：從混雜的微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過程。 為什么要進(jìn)展純培育：平板上的單一菌落并不一定保證是一種菌。 常用的分別、純化方法： 單細(xì)胞挑取法 稀釋涂布平板法 稀釋混合平板法平板劃線法 稀釋涂布平板法 ： 步驟： 1、倒平板： 牛肉膏蛋白胨培育基，高氏I號培育基，查氏培育基冷卻至55-60時，混勻后倒平板，牛肉膏蛋白胨培育基倒4皿，高氏I號培育基和查氏培育基各倒3皿。 2、制備污水稀釋液：10g土樣，參與90ml無菌水中，在三角瓶中振搖20min。取0.5ml 參與盛有4.5ml無菌水的試管中，以

7、此類推，制成不同稀釋度。 3、涂布：將上述每種培育基平板底面標(biāo)志稀釋度，然后用無菌吸管從最后三種稀釋度，即10-4、10-5和10-6的試管中汲取0.1ml對號放入平板上，用玻棒涂布。 4、培育：高氏I號和查氏倒置培育于28培育箱中培育3-5days，牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基在37培育1-2days。 5、挑菌落：轉(zhuǎn)至斜面，檢查能否一致，保管。 平板劃線法： 1、倒平板，標(biāo)志培育基稱號，編號和實驗日期。 2、劃線方法 稀釋混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板時留意培育基溫度 3、混合均勻 4、微生物培育技術(shù) 1、斜面接種 2、液體培育基接種 3、穿刺接種 4、將已接種的斜面、半固體和液體培育

8、基放置培育箱中培育 5、將生長好的菌種用牛皮紙包好，置4冰箱中保管。 幾種常用的保藏方法： 1、傳代培育法 保藏的菌種經(jīng)過斜面、穿刺或皰肉培育基用于厭氧細(xì)菌培育好后，置4C冰箱中存放，定期進(jìn)展傳代培育、再存放。 可用膠塞替代棉塞或在斜面上覆蓋一層無菌液體石蠟來進(jìn)一步延伸保管期。 2、載體法 使生長適宜的微生物吸附在一定的載體上進(jìn)展枯燥。 常用的載體有土壤、砂土、硅膠、明膠、麩皮、磁珠和濾紙片等。 3、懸液法 將細(xì)菌、酵母菌細(xì)胞懸浮在一定的溶液中保管。 溶液包括蒸餾水、糖溶液、磷酸緩沖液、食鹽水等。 4、冷凍法 使菌種一直存放在低溫環(huán)境下的保藏方法。包括低溫法和液氮法。 此法關(guān)鍵是要抑制細(xì)胞的冷

9、凍損傷。留意控制降溫速率及維護(hù)劑的運用。 5、真空枯燥法 這類方法包括冷凍真空枯燥法和L枯燥法。 冷凍真空枯燥法是將要保藏的微生物樣品先經(jīng)低溫預(yù)凍，然后在低溫形狀下進(jìn)展減壓枯燥。 L-枯燥法那么不需求低溫預(yù)凍樣品，只是使樣品維持在1020C范圍內(nèi)進(jìn)展真空枯燥。 操作方法 1、斜面保藏法 將菌種轉(zhuǎn)接在適宜固體斜面培育基上，待其充分生長后，用牛皮紙將棉塞部分包扎好棉塞換成膠塞效果更好，置4C冰箱中包藏。 保藏時間依微生物的種類而定。霉菌、放線菌及芽孢菌保管24個月移種一次，酵母菌間隔兩個月，普通細(xì)菌一個月，假單胞菌兩周傳代一次。 此法優(yōu)點是操作簡單、運用方便，缺陷是保藏時間短、易被污染。 2、液體

10、石蠟保藏法 將無菌石蠟加在已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1CM為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕。 將試管直立，置低溫或室溫下保管。 此法適用且效果較好。霉菌、放線菌、芽孢菌可保藏兩年以上，酵母菌可保藏12年，普通細(xì)菌也可保藏1年左右。 3、穿刺保藏法 按穿刺接種方式培育菌種，菌種長好后用膠塞封嚴(yán)，置4冰箱存放。 4、砂土管保藏法 (1)河砂處置 取河砂假設(shè)干參與鹽酸10% ，加熱煮沸30min除去有機(jī)機(jī)質(zhì)。倒去鹽酸溶液，用自來水沖洗至中性，最后一次用蒸鎦水沖洗，烘干后用40目篩子過篩，棄去粗顆粒，備用。 (2)土壤處置 取非耕作層不含腐殖質(zhì)的痩黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。烘干后碾

11、碎，用100目篩子過篩，粗顆粒部分丟掉。 (3)砂土混合 處置妥當(dāng)?shù)暮由芭c土壤按3：1的比例摻合(或根據(jù)需求而用其他比例，甚至可全部作砂或土)均勻后，裝入10 x100mm的小試管或安瓿管中，每管分裝1g左右，塞上棉塞，進(jìn)展滅菌(通常采用間歇滅菌2-3次)，最后烘干。 (4)無菌檢查 每10支砂土管隨機(jī)抽1支，將砂土倒入肉湯培育基中，30培育40h，假設(shè)發(fā)現(xiàn)有微生物生長，一切砂土管那么需重新滅菌，再作無菌實驗，直至證明無菌后方可運用。 (5)菌懸液的制備 取生長強壯的新穎斜面菌種，參與2-3ml無菌水(每18x180mm 的試管斜面菌種)，用接種環(huán)悄然將菌苔洗下，制成菌懸液。 (6)分裝樣品 每支砂土管(注明標(biāo)志后)參與05ml菌懸液(剛剛使砂土潤濕為宜)， 用接種針拌勻。 (7)枯燥 將裝有菌懸液的砂土管放入枯燥器內(nèi)，枯燥器底部盛有枯燥劑。用真空泵抽干水分后火焰封口(也可用橡皮塞或棉塞塞住試管口)。 (8)保管 置4冰箱或室溫枯燥處，每隔一定的時間進(jìn)展檢測。此法多用于產(chǎn)芽孢的細(xì)菌、產(chǎn)生孢子的霉菌和放線菌。在抗生素工業(yè)消費中運用廣泛、效果較好，可保管幾年時間，但對營養(yǎng)細(xì)胞效果不佳。 5、冷凍真空枯燥法 1凍干