葡萄糖耐量實驗

1、關(guān)于葡萄糖的耐量實驗第一張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月糖尿病的發(fā)病機制 治療方法病因: 胰島素分泌不足及胰島素受體缺陷所致的代謝性疾病. 由于胰島素調(diào)節(jié)血糖水平,故糖尿病患者的血糖水平升高. 是常見的內(nèi)分泌紊亂性疾病分類 : I型糖尿病 II型糖尿病 繼發(fā)性糖尿病第二張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月癥狀: (三多一少) 多飲 多食 多尿 消瘦治療方法:口服藥物治療常用的有：化學類有促胰島素分泌劑、雙胍類、AGI 等；胰島素治療適應(yīng)癥： 1型糖尿病患者，由于自身胰島細胞功能受損，胰島素分泌絕對不足，在發(fā)病時就需要胰島素治療，而且需終生胰島素替代治療以維持生命和生活。約占糖尿

2、病總?cè)藬?shù)5%。 2 型糖尿病患者在生活方式和口服降糖藥聯(lián)合治療的基礎(chǔ)上，如果血糖仍然未達到控制目標，即可開始口服藥物和胰島素的聯(lián)合治療。一般經(jīng)過較大劑量多種口服藥物聯(lián)合治療后 HbA1c仍大于 7.0%時，就可以考慮啟動胰島素治療。 第三張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)第四張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床上OGTT主要適用于下列情況:（1）無糖尿病癥狀，空腹血糖異常，或偶爾出現(xiàn)糖尿，或有明顯糖尿病家族史者；（2）有糖尿病癥狀，血糖水平不夠糖尿病診斷標準者；（3）妊娠期或甲狀腺功能亢進出現(xiàn)糖尿者；（4）不明原因腎病與視網(wǎng)膜病者。第五張，PPT

3、共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(5)肥胖、血脂紊亂、高血壓，高尿酸血癥者；(6)屢發(fā)皮膚癤腫、皮膚感染，泌尿系感染者。第六張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗?zāi)康恼莆彰阜y定血清葡萄糖濃度的原理掌握血糖變化的臨床生理意義掌握口服葡萄糖耐量試驗的原理，適用人群和臨床意義。第七張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理葡萄糖耐量試驗（OGTT）是一種葡萄糖負荷試驗，用于檢查人體胰島素B細胞功能和機體對糖的調(diào)節(jié)能力。正常人進食后血糖都會暫時性升高，3060分鐘后可升到最高峰，但一般不超過8.9mmol/L，2小時左右又會回到空腹水平。這種現(xiàn)象稱為耐糖現(xiàn)象。第八張，PPT共三十三頁

4、，創(chuàng)作于2022年6月若內(nèi)分泌失調(diào)或神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，則調(diào)節(jié)功能失常，食入大量糖后血糖濃度可急劇上升，短時間不能恢復(fù)到原值，稱為耐糖失?，F(xiàn)象。所以觀察耐糖現(xiàn)象可以了解調(diào)節(jié)血糖的各種機能是否健全。第九張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月血清葡萄糖濃度測定方法1、GOD-POD法(酶測法)2、鄰甲苯胺法3、其他方法舉例 (福林馬爾露斯（Folin-Malmors）超微量法)第十張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1、GOD-POD法：以過氧化物酶作指示酶的偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法。 葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，同時釋放過氧化氫。 過氧化物酶（POD）催化過氧化氫氧化色素

5、原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反應(yīng)。 紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。 偶聯(lián)反應(yīng) 也作偶連反應(yīng)、耦聯(lián)反應(yīng)、氧化偶聯(lián)， 是由兩個有機化學單位進行某種化學反應(yīng)而得到 一個有機分子的過程. 第十一張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月反應(yīng)方程式: GOD 葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖酸+2H2O2 POD2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚紅色醌類化合物第十二張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2、鄰甲苯胺法：葡萄糖為一含醛基的己糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成青色的Suchiff堿。 Suchi

6、ff堿顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量成正比與進行同樣處理的標準葡萄糖液相比較，即可求出樣品中葡萄糖的含量。由于鄰甲苯胺只與醛糖作用顯色，故此種測定方法不受血液中其他還原物質(zhì)的干擾，測定時也無需除去血漿或血清中的蛋白質(zhì)。第十三張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月反應(yīng)方程式: H+葡萄糖 5-羥甲基-2-呋喃甲醛+3H2O 加熱5-羥甲基-2-呋喃甲醛+鄰甲苯胺Schiff堿+H2O第十四張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3、其他方法舉例 福林馬爾露斯（Folin-Malmors）超微量法：在熱堿溶液中的葡萄糖可將高鐵氰化鉀還原為低鐵氰化鉀，后者再與硫酸高鐵鹽作用生成亞鐵氰化鐵（普魯

7、士藍），與同樣處理的葡萄糖標準液進行比色，即可求出血糖含量。 其反應(yīng)如下：第十五張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月血糖測定方法歸納:血糖的測定方法按測定原理可分為無機化學方法、有機化學方法和生物化學方法三類。此外，還有固相酶法、電化學法及質(zhì)譜法等。常用的是分光光度法和酶學方法。分光光度法中常見的是鄰甲苯胺法，是利用葡萄糖在加熱的有機酸溶液中與某些芳香族胺類，可生成有色衍生物這一原理建立的。酶學方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脫氫酶法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同ATP反應(yīng)，產(chǎn)生葡萄糖6磷酸及ADP，葡萄糖6磷酸在葡萄糖6磷酸脫氧酶存在時，同NADP作用產(chǎn)生NAD

8、PH及6磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，NADPH在340nm有吸收峰。第十六張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖產(chǎn)生葡萄糖酸內(nèi)酯和雙氧水的反應(yīng)而建立。血糖的酶法測定是利用酶的特異性催化而建立起來的，具有高度的特異性，同時，可以避免使用化學方法中的一些有害試劑等。操作過程簡便，便于自動化檢測第十七張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月應(yīng)用GOD-POD法測定血糖濃度來檢測葡萄糖耐量第十八張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗器材與試劑:器材：5ml移液管50或100ul微量可調(diào)式移液器721E分光光度計1cm比色皿37恒溫水浴第十九張，PPT共三十

9、三頁，創(chuàng)作于2022年6月試劑:1、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0） 稱取無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g溶于蒸餾水800ml中，調(diào)pH7.0，定容至1L。2、酶試劑 取過氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，置4保存，可穩(wěn)定存放3個月。3、酚溶液 稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。4、酶酚混合試劑 將酶試劑及酚溶液等量混合，4可以存放1個月。第二十張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月5、12mmol/L苯甲酸溶液 取苯甲酸1.4g，于800ml蒸餾水中加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至1L。6、葡萄糖標準

10、貯存液（100mmol/L） 稱取已干燥恒重的無水葡萄糖1.802g，溶于約70ml 12mmol/L苯甲酸溶液中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h后方可使用。（防止氧化的作用 ，葡萄糖為單糖，含醛基，易氧化成羧基，加入苯甲酸，平衡向左移動 ）7、葡萄糖標準工作液（5mmol/L） 吸取葡萄糖標準貯存液5.00ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻。 第二十一張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月血清中葡萄糖溶度的測定 項目 空白管 標準管 測定管血清/ml0.020葡萄糖標準液/ml0.020蒸餾水/ml0.020酶-酚混合試劑/ml3

11、.003.003.00第二十二張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月混勻，置37水浴中，保溫25min，在波長510nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標準管及測定管吸光度。 計算公式: 血清葡萄糖濃度=（A測定/A標準）*5 mmol/L參考值: 空腹血清葡萄糖的濃度:3.896.11mmol/L第二十三張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月注意事項：實驗前受試者應(yīng)充分休息，避免體力活動，試驗中亦不能吸煙、喝咖啡，以免影響實驗結(jié)果。葡萄糖氧化酶對-D葡萄糖高度特異，溶液中葡萄糖約36%為型，64%為型。葡萄糖的完全氧化需要型到型的變旋反應(yīng)。新配制的葡萄糖標準液主要是型，故需放置2h以上（最

12、好過夜），待變旋平衡后方可應(yīng)用。第二十四張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月葡萄糖氧化酶法可以直接測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾性物質(zhì)濃度過高，可干擾過氧化物酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。因紅細胞的酵解將導致測定結(jié)果偏低，建議測定樣品以草酸鉀-氟化鈉做抗凝劑以抑制糖酵解。嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清應(yīng)先制備無蛋白血濾液，然后再進行測定。第二十五張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床意義:生理性高血糖:可見攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺素分泌增加時。病理性高血糖 （1）糖尿?。翰±硇愿哐浅Ｒ娪谝葝u素絕對或相對不足的糖尿病患者。 （2）內(nèi)分泌腺

13、功能障礙：甲狀腺功能亢進、腎上腺皮質(zhì)功能及髓質(zhì)功能亢進，引起的各種對抗胰島素的激素分泌過多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。第二十六張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（3）顱內(nèi)壓增高：顱內(nèi)壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內(nèi)出血、腦膜炎等，引起血糖增高。（4）脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。生理性低血糖：見于饑餓和劇烈運動。病理性低血糖：特發(fā)性功能性低血糖最多見，依次是藥源性、肝源性和胰島素瘤等。第二十七張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床診斷:正常耐糖量：空腹血糖6.1mmol/L，口服1小時內(nèi)血糖值升高至最高峰，但不超過1

14、1.1mmol/L，2小時后血糖水平（2hPG）基本恢復(fù)空腹水平，即2hPG7.8mmol/L。各次尿液中均未檢出糖?？崭寡菗p害（IFG）：6.1mmol/LFPG7.0mmol/L，2小時后血糖水平7.8mmol/L。糖耐量減退（IGT）:FPG7.0mmol/L以及7.8mmol/L2hPG11.1mmol/L第二十八張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月糖尿病：FPG7.0mmol/L,2hPG11.1mmol/L。耐量增加 見于腎上腺皮質(zhì)功能減退患者，垂體前葉功能減退、甲狀腺功能減退及胰島素分泌過多。其曲線特征是：（1）空腹血糖值低于正常值；（2）服糖后不出現(xiàn)血糖高峰；（3）1小時內(nèi)血糖即可恢復(fù)原值第二十九張，PPT共三十三頁，創(chuàng)作于2022年6月診 斷條件 靜脈（全血） mmol/l毛細血管 mmol/l靜脈（血漿） mmol/l糖尿病空腹 6.1 6.1 7.0服糖后2h 10.011.111.1糖耐量受損空腹 6.1 6.1 7.0服糖后2h 6.710.07.811.17.811.1空腹血糖受損 空腹5.6 6.15.6 6.16.1 7.0