熒光顯微成像技術(shù)與應(yīng)用

1、關(guān)于熒光顯微成像技術(shù)和應(yīng)用第一張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月原理 普通光學(xué)顯微鏡 通過普通光源的照明觀察標(biāo)本第二張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡(fluorescence microscope)： 利用較短波長的光(激發(fā)光)照射樣品，使樣品受到高能量激發(fā)，產(chǎn)生較長波長的熒光(發(fā)射光)，用來觀察和分辨樣品中產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的成分和位置。第三張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡的種類透射式落射式第四張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 目鏡吸收濾色鏡 物鏡暗場聚光鏡激發(fā)濾色鏡 汞燈透射熒光顯微鏡原理圖標(biāo)本第五張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月汞 燈

2、激發(fā)濾色鏡分色鏡吸收濾色鏡物 鏡 標(biāo) 本落射熒光顯微鏡原理圖第六張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 透射式汞燈光源激發(fā)濾色鏡暗場聚光鏡吸收濾色鏡 落射式汞燈光源激發(fā)濾色鏡分色鏡吸收濾色鏡熒光顯微鏡的主要部件第七張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月分色鏡 反射激發(fā)光，透過熒光暗場聚光鏡 來自下面光源的光線經(jīng)過暗場聚光鏡，形成了橫過顯微鏡視野而不進(jìn)入物鏡的強(qiáng)烈光束。因此視野是暗的 第八張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光圖像的記錄方法熒光顯微鏡所看到的熒光圖像具有： 形態(tài)學(xué)特征和熒光的顏色、亮度判斷結(jié)果時(shí)，必須將二者結(jié)合起來綜合判斷 記錄結(jié)果：主觀指標(biāo)（即工作者目力觀察） 客觀指

3、標(biāo)（細(xì)胞分光光度計(jì)、圖像分析儀等）第九張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡應(yīng)用技術(shù)1. 對細(xì)胞結(jié)構(gòu)或組分的定性位、半定量研究 免疫熒光技術(shù) 用熒光標(biāo)記的抗體或抗原與樣品(細(xì)胞、組織或分離的物質(zhì)等)中相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合，以適當(dāng)檢測熒光的技術(shù)對其進(jìn)行分析的方法。將抗原或抗體與熒光染料連接，用于檢測相應(yīng)特異性的抗體或抗原的方法稱“直接免疫熒光技(directimmunofluorescent technique)”。用熒光染料標(biāo)記的第二、第三抗體等檢測相應(yīng)抗原抗體復(fù)合體的方法則稱“間接免疫熒光技術(shù)(indirect immunofluorescent technique)”。第十張，

4、PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對抗原進(jìn)行細(xì)胞定位第十一張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2.作為生物大分子篩選與鑒定的標(biāo)記物。 綠色熒光蛋白 綠色螢光蛋白(green fluorescent protein)，簡稱GFP，其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍(lán)色波長范圍的光線激發(fā)下，會發(fā)出綠色螢光，在生物學(xué)研究中綠色熒光蛋白具有廣泛用途，包括有第十二張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 1.分子標(biāo)記 利用綠色熒光的發(fā)光機(jī)制，可將GFP作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽(protein tagging)，即利用DNA重組技術(shù)，將目的基因與GFP基因構(gòu)成融合基因，轉(zhuǎn)染合適的細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，然后借助熒光顯微鏡便可對標(biāo)記的蛋白質(zhì)進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)活體觀察第十三張，PPT共十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2.藥物篩選 熒光探針分布是利用信號傳導(dǎo)中信號分子的遷移功能，將一熒光蛋白與信號分子相偶聯(lián)，根據(jù)熒光蛋白的分布情況即可推斷信號分子的遷移狀況，并推斷該分子在遷移中的功能。由于GFP分子量小，在活細(xì)胞內(nèi)可溶且對細(xì)胞毒性較小，因而常用作熒光探針 第十四張，PPT共十六