酶免檢測(cè)技術(shù)原理以及影響

1、關(guān)于酶免檢測(cè)技術(shù)原理及影響第一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月3月18日免疫室差錯(cuò)問題分析及整改措施3月18日免疫室出現(xiàn)了標(biāo)本漏檢問題，導(dǎo)致病人情緒不滿，甚至大吵大鬧，給科室形象造成了一定的影響。暴露出了免疫室一些問題，如嚴(yán)格按檢測(cè)流程執(zhí)行力度問題，認(rèn)真細(xì)心問題等，同時(shí)也違背了免疫室規(guī)定的檢驗(yàn)報(bào)告結(jié)果時(shí)效性原則和以病人為中心的服務(wù)宗旨。針對(duì)上述事件，經(jīng)免疫室人員討論、分析，制定出以下整改措施：1、端正態(tài)度、要認(rèn)真、負(fù)責(zé)2、嚴(yán)格執(zhí)行免疫室檢驗(yàn)流程，仔細(xì)核對(duì)標(biāo)本，不同批次檢測(cè)標(biāo)本 標(biāo)記清楚3、增加人員緩解緊張工作狀態(tài)4、歡迎大家給出寶貴建議5、堅(jiān)持免疫室兩個(gè)原則第二張，PPT共三十九頁，

2、創(chuàng)作于2022年6月免疫室簡(jiǎn)介檢驗(yàn)項(xiàng)目普免術(shù)前四項(xiàng)（普免）術(shù)前四項(xiàng)（急篩復(fù)查）體檢AFPCEA體檢HAV(IgM)HEV(IgM、IgG)HBcAbTAP化學(xué)發(fā)光腫瘤性激素HCG貧血三項(xiàng)胰島素C-肽自身免疫自免肝四項(xiàng)ENA譜抗核抗體抗線粒體抗體血管炎過敏原呼吸道HIV初篩實(shí)驗(yàn)室迎檢任務(wù)前景展望檢測(cè)方面：免疫球蛋白、補(bǔ)體、免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子、免疫移植等，技術(shù)方面：電泳技術(shù)、細(xì)胞技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)、流式細(xì)胞技等教學(xué)方面：華信臨床檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)第三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫室簡(jiǎn)介工作人員 姓名職稱職務(wù)職責(zé)狀態(tài)孫文鮮主管檢驗(yàn)技師常規(guī)免疫免疫室組長固定人員劉麗娜主管檢驗(yàn)技師發(fā)光免疫免

3、疫室質(zhì)控管理員固定人員史可檢驗(yàn)師自身免疫免疫室生物安全及感染控制管理員固定人員馮凡檢驗(yàn)員常規(guī)免疫免疫室儀器維護(hù)及信息管理員固定人員夜班人員科室骨干科室骨干科室骨干暫時(shí)固定堅(jiān)持兩個(gè)原則：1、堅(jiān)持檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、及時(shí)性、有效性 2、堅(jiān)持以病人為中心，全心全心全意服務(wù)病人第四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫室簡(jiǎn)介免疫室日常工作量（3月23日為例）項(xiàng)目標(biāo)本量（人份）項(xiàng)目包括內(nèi)容備注普篩88門診、病房普篩，乙肝五項(xiàng)（ 酶免法）急篩復(fù)查47所有急篩（酶免法）發(fā)光51腫瘤、性激素、貧血三項(xiàng)、胰島素、C-肽、HCG體檢37AFP、CEA、乙肝五項(xiàng)、丙肝、普篩自免3自身免疫、呼吸道、過敏原、雜項(xiàng)

4、9TB、HP、TAP、HPV、HAV、HEV、HBcAb-IgM總計(jì)234第五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫室簡(jiǎn)介免疫室特殊項(xiàng)目檢測(cè)成本項(xiàng)目成本（）項(xiàng)目成本（）項(xiàng)目成本（）項(xiàng)目成本（）備注AFP66.29FSH66.29Ferr52.51呼吸道63.98CEA66.29LH66.29Foll89.97過敏原69.63CA15374.76P66.29B1290.05抗核抗體66.60CA19985.59T66.29胰島素67.94抗ds-DNA158.20CA12585.59PRL66.29C-肽62.20抗平滑肌抗體69.69FPSA85.59E266.29自免肝55.02EN

5、A譜57.50TPSA85.59HCG66.29血管炎61.70抗線粒體抗體待定注：此統(tǒng)計(jì)結(jié)果可信度為95第六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月一、抗原抗體反應(yīng)二、酶免疫技術(shù)的分類、原理及特點(diǎn)三、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)四、ELISA法檢測(cè)注意事項(xiàng)五、ELISA法檢測(cè)常見問題及解決方法第七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月一、抗原抗體反應(yīng)第八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)原理抗原抗體結(jié)合反應(yīng)是抗原決定簇和抗體分子超變區(qū)在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)上具有互補(bǔ)性，使抗原表位嵌入抗體超變區(qū)的槽溝，發(fā)生特異性結(jié)合，其關(guān)系如鑰匙和鎖。有四種分子間作用力參與并促使抗原、抗體的結(jié)合。

6、第九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)原理氫鍵結(jié)合力范德華引力靜電引力疏水作用力抗原抗體結(jié)合力第十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)及影響因素抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)：1、特異性 2、比例性 3、可逆性抗原抗體反應(yīng)影響因素：1、反應(yīng)物自身因素：抗原 抗體2、反應(yīng)環(huán)境條件：電解質(zhì) 酸堿度 溫 度抗原抗體反應(yīng)影響因素：1、反應(yīng)物自身因素： 抗原 理化性狀、表位種類、數(shù)目 抗體 來源、特異性、親和性、效價(jià)2、反應(yīng)環(huán)境條件： 電解質(zhì) 85g/LNaCl溶液 酸堿度 pH6-9為宜 溫 度 最適溫度為37第十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二、酶免疫技術(shù)的

7、分類、特點(diǎn)及原理第十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月1、酶免技術(shù)的分類.酶免疫技術(shù)酶免疫組化組織切片或其它標(biāo)本中抗原的定位 酶免疫測(cè)定液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量均相 異相固相酶免疫測(cè)定液相酶免疫測(cè)定1、酶放大免疫測(cè)定技術(shù)EMIT2、克隆酶供體免疫分析CEDIA分離結(jié)合、游離酶標(biāo)記物，底物測(cè)定檢測(cè)微量短肽激素、小分子抗原最廣泛，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)小分子激素、半抗原測(cè)定第十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 酶免技術(shù)的分類2、酶免技術(shù)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的特異性 +酶高效催化反應(yīng)的專一性主要試劑: 酶標(biāo)記的抗體或抗原酶標(biāo)物特點(diǎn)： 免疫學(xué)活性 酶對(duì)底物的催化活性第十四張，PPT

8、共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月3、酶免技術(shù)原理及特點(diǎn)原理：酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng)酶對(duì)底物的顯色反應(yīng)對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定位、定性或定量的測(cè)定分析特點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好酶標(biāo)記試劑能夠較長時(shí)間保持穩(wěn)定操作簡(jiǎn)便、對(duì)環(huán)境沒有污染。易與其它技術(shù)偶聯(lián)衍生出適用范圍更廣的新方法。第十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)第十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月1、基本原理.原理包被12反應(yīng)加入待測(cè)抗體或抗原和酶標(biāo)抗原或抗體3洗滌使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的分離4底物顯色定性或定量的分析三個(gè)必要試劑 固相的抗原或抗體 酶標(biāo)記物（酶結(jié)合

9、物） 酶反應(yīng)的底物 第十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月.雙抗體夾心法（測(cè)抗原）方法：用已知抗體包被，加入待檢血清，再加酶標(biāo)抗體，加底物顯色應(yīng)用：二價(jià)或二價(jià)以上的較大分子抗原測(cè)定 HBsAg、HBeAg、甲胎蛋白、HCG等.2、方法類型及反應(yīng)原理第十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月方法類型及反應(yīng)原理雙位點(diǎn)一步法（測(cè)抗原）方法：用單克隆抗體做成固相抗體和酶標(biāo)抗體，待測(cè)抗原酶標(biāo)抗原同時(shí)加入，加底物顯色應(yīng)用：與雙抗體夾心法相似，提高了特異性、靈敏度，需注意“鉤狀效應(yīng)”第十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月競(jìng)爭(zhēng)法（測(cè)抗原） 方法：用已知抗體包被，加入待測(cè)血清，再加酶標(biāo)

10、抗原，酶標(biāo)抗原與待檢物競(jìng)爭(zhēng)與包被物結(jié)合。加底物顯色。 應(yīng)用：用于只有一個(gè)抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）方法類型及反應(yīng)原理第二十張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月.雙抗原夾心法（測(cè)抗體）原理：類似雙抗體夾心法操作步驟：類似 應(yīng)用：乙型肝炎表面抗體方法類型及反應(yīng)原理第二十一張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月方法類型及反應(yīng)原理間接法（測(cè)抗體）方法用已知抗原包被，加入待測(cè)血清，再加酶標(biāo)的抗人IgG（抗抗體或二抗）加底物顯色。優(yōu)點(diǎn)一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體應(yīng)用常用于HCV抗體、HIV抗體和梅毒螺旋體抗體等的測(cè)定第二十二張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月方法類

11、型及反應(yīng)原理競(jìng)爭(zhēng)法（測(cè)抗體）原理：類似檢測(cè)抗原的競(jìng)爭(zhēng)法應(yīng)用：乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)的檢測(cè) 第二十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月方法類型及反應(yīng)原理捕獲法（測(cè)抗體） 應(yīng)用：病原體急性感染診斷中的IgM型抗體 甲型肝炎HAV-IgM抗體 乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗體第二十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月四、ELISA法檢測(cè)注意事項(xiàng)第二十五張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月1、標(biāo)本避免溶血、高脂血、纖維蛋白凝塊盡量新鮮，避免細(xì)菌污染 一般5天內(nèi)檢測(cè)的血清可4保存，否則低溫保存。 第二十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2

12、022年6月 2、 試 劑.試劑盒保存于2-8.使用前應(yīng)先將檢測(cè)試劑 盒放置室溫平衡15-30 分鐘，保證酶等液體的初始反應(yīng)溫度及 活性劑的溶解。.觀察外包裝和內(nèi)組份有無漏液。第二十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 3、加 樣 A. 加樣不可太快； B. 要避免加在孔壁上部； C. 不可濺出； D. 避免產(chǎn)生氣泡； E. 盡可能使用同一加樣器，裝緊槍 頭，加樣后充分混勻。加樣器定期校準(zhǔn)！第二十八張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月溫育溫度的選擇足夠的反應(yīng)時(shí)間“邊緣效應(yīng)”的排除4、溫 育第二十九張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月5、洗 板 按說明書洗板次數(shù)防止洗板機(jī)堵孔

13、有適當(dāng)?shù)那峙輹r(shí)間每孔加入洗液350ul 不溢孔，殘留cutHIV（麗珠）0.15+MAX(NCx,0.08)cut灰區(qū)又稱灰色帶反應(yīng)。就是把OD值在Cut off值正負(fù)20%這個(gè)范圍內(nèi)的標(biāo)本稱為灰區(qū)標(biāo)本。這個(gè)范圍稱為灰區(qū)。.灰區(qū)是客觀存在的，沒有不存在灰區(qū) 的試劑，我們只是盡量減少灰區(qū)的出現(xiàn)比例。.減少灰區(qū)最有效的方法就是盡量將板洗滌干凈。不同試劑盒，CUTOFF值計(jì)算方法不同例：第三十三張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月五、ELISA法檢測(cè)常見問題及解決方法第三十四張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方法類風(fēng)濕因子：一般為IgM型，可與變性IgG F

14、c段非特異結(jié)合，因此可能與包被的IgG以及隨后加入的酶標(biāo)IgG結(jié)合而產(chǎn)生假陽性。補(bǔ)體：包被抗體及隨后加入的酶標(biāo)抗體均能激活補(bǔ)體而與補(bǔ)體C1q位點(diǎn)結(jié)合而產(chǎn)生假陽性，也可降低檢測(cè)物與固相結(jié)合而引起假陰性或測(cè)值偏低異嗜性抗體：人血清中含有抗 齒類動(dòng)物（羊、鼠等）Ig的抗體，即天然異嗜性抗體。與酶標(biāo)二抗出現(xiàn)假陽性。溶菌酶：可與等電點(diǎn)5的低等電點(diǎn)蛋白強(qiáng)結(jié)合，雙抗體夾心法ELISA可假陽性。溶血：Hb中的血紅素集團(tuán)有類似過氧化物的活性，溫育時(shí)吸附固相可與HRP顯色。細(xì)菌污染：細(xì)菌分泌的一些酶可對(duì)抗原抗體蛋白分解或直接影響酶標(biāo)抗體作用，并且細(xì)菌引起標(biāo)本混濁。標(biāo)本4存放過久：IgG聚合成二聚體，間接法中易假陽

15、性。建議1:20準(zhǔn)確配置洗滌液10、試劑盒運(yùn)輸時(shí)間太長，受高溫影響夏天長途運(yùn)輸時(shí)，縮短時(shí)間，低溫措施11、試劑盒失效不適用失效試劑第三十六張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月現(xiàn)象可能原因解決方法重復(fù)性差1、樣品數(shù)量較多、加樣時(shí)間過長重復(fù)測(cè)定標(biāo)本時(shí)，盡可能使用同一移液器，裝緊吸嘴，條件、人員應(yīng)盡量與上次保持一致，以排除這些因素造成的重復(fù)性差的可能性。2、加樣量不一致3、孵育時(shí)間不一致4、洗滌條件不同5、操作人員不同滿板白，陽性對(duì)照不顯色1、把終止液誤當(dāng)作酶結(jié)合物、或底物使用嚴(yán)格按試劑說明書操作，加液時(shí)看準(zhǔn)標(biāo)簽，正確稀釋洗滌液，不要漏加試劑2、漏加試劑，如酶結(jié)合物、底物A、B液3、蒸餾水被污染，或盛洗滌液桶被污染，留有使酶失活的物質(zhì)，換用合格水盛蒸餾水的瓶子要潔凈第三十七張，PPT共三十九頁，創(chuàng)作于2022年6月現(xiàn)象可能原因解決方法滿板顯色1、底物失效、或被污染更換底物2、加好底物后在保溫時(shí)，受強(qiáng)光或紫外線照射顯色時(shí)避